受体PPT课件.ppt

拮抗剂 antagonist 通常是指能抵抗激动剂作用的药物 拮抗剂与激动剂作用于同一受体分子 呈竞争性或非竞争性结合 pA2 代表由功能实验获得的可逆性竞争性拮抗剂的pKd值 使激动剂EC50增大1倍所需的拮抗剂的浓度 以其10为底的负对数值表示 KB与pKB 与pA2一样 代表由功能实验获得的可逆性竞争性拮抗剂的pKd值 与pA2的差别只是在作Schild作图时假设斜率为1 0 竞争性拮抗剂与受体的亲和性通常采用Schild作图法求得原理 在一定浓度竞争性拮抗剂存在下 激动剂的浓度 效应曲线平行右移 拮抗剂的亲和性越高 右移越多 方法 1 pA2通常采用3个以上浓度的拮抗剂 Schild方程为lg dr 1 lg B lgKB dr 相应浓度拮抗剂 B 存在时浓度 效应曲线的EC50值与对照浓度 效应曲线的EC50值的比值 也称为剂量比 doseratio 以拮抗剂浓度的对数值为横坐标 以相应浓度拮抗剂的剂量比 1的对数值 lg dr 1 为纵坐标 得一直线 其与横坐标的交点即为代表该拮抗剂亲和性的pA2值 Schild方程 lg dr 1 lg B lgKB 如果拮抗剂与受体仅有单一位点的结合 斜率应为1 0 此时仅需用一种拮抗剂浓度 即能得到上述直线 由此方法到的拮抗剂亲和性称KB B为所用拮抗剂的浓度 dr的意义同上 2 pKB B KB dr 1 放射配体结合测定法 Radioligandbindingassay 利用受体与配体特异性结合的特性 将被研究受体的特异性配体标记上同位素 放射性配体与组织 细胞膜 细胞浆 或细胞一起温育 然后采用一定的方法将与受体结合的放射性配体与游离的放射性配体分离 根据放射性配体与受体结合的情况来判断受体的数量 亲和性等 最常用的两种方法是Scatchard分析与竞争抑制实验 饱和实验与Scatchard分析 采用不同浓度的放射配体 6 12个浓度 与组织或细胞在有受体拮抗剂存在 非特异性结合管 和无拮抗剂存在 总结合管 条件下温育一定时间 分离与受体结合的放射性配体 特异性结合量用mol mg蛋白 特异结合位点 细胞表示 受体放射配体结合测定计算公式 L R Kd LR Bmax R LR R YX L Y LR X Bmax Y Kd Y 理想状态下的非线性回归 B 最大结合容量 fmol mg蛋白 蛋白浓度 mg ml 所用蛋白体积 ml 比放射性 dpm fmol 衰变系数 计数效率 K1 K2 Bmax y 结合受体量 fmol 比放射性 dpm fmol 衰变系数 计数效率 K2 x 有效配体浓度 fmol ml 配体体积 ml 比放射性 dpm fmol 衰变系数 计数效率 K2 X K3 Y 一种浓度的放射性配体及多种浓度的未标记配体 14 16种浓度 与组织或细胞在一定条件下温育 分离与受体结合的放射性配体 未标记配体与放射性配体竞争性与受体结合 未标记配体的浓度越大 与受体结合的放射性配体的量越少 依此可得竞争抑制结合曲线 竞争抑制结合实验 受体与竞争性拮抗剂的亲和性受体亚型分析计算受体的Bmax和Kd值 0 OneSiteCompetative Curve a 1B AR 10 0 7 5 5 0 2 5 50 100 150 Legend lg BMY mol L SpecificBinding a 1B AR 6 5 4 2 1 0 1 2 Legend lgB lgB Bmax B Hill作图BMY7378 OneSiteCompetative Curve a 1B AR 10 9 8 7 6 5 4 0 50 100 Legend lg 5 MU mol L SpecificBinding a 1B AR 5 0 4 5 4 0 2 1 0 1 2 Legend logB lgB Bmax B Hill作图5 MU 受体与竞争性拮抗剂的亲和性 Hill作图 与横坐标的交点代表50 受体被非标记配体结合时 所需非标记配体的浓度 即其IC50 免疫学方法 受体的分离 纯化受体的探测 定位 定量 几乎所有生命科学研究方法都可以用于研究受体药理学功能分析 受体产生效应为指标放射配体结合法 特异结合为指标放射配体结合法 结合活性免疫方法 受体抗原分子 Contents MoleculestructureDimerizationInteractionmolecuesTrafficking compartmentsGeneticmodlesDrugselectionDiseasetechnologies 思考题2药理学功能分析和放射配体结合实验能得到那些指标 这些指标的含义是什么 请你设计一个与受体研究