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磷脂 脂肪酸 分析 野山参 土壤 微生物 群落 多样性 张亚玉

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磷脂脂肪酸法分析野山参根区土壤微生物群落多样性 收稿日期 2010 03 26 基金项目 国家科技支撑计划 2007BAI38B01 吉林省科技厅计划项目 20090573 作者简介 张亚玉 1968 女 研究员 博士 研究方向为人参 西洋参等药用植物栽培 E mail zyy1966999 sina com 张亚玉 1 宋晓霞1 孙 海 1 汪景宽2 于 树 2 1 中国农业科学院特产研究所 吉林吉林132109 2 沈阳农业大学土壤与环境学院 沈阳110161 摘要 应用磷脂脂肪酸法 PLFA 分析了野山参根区土壤及对照土壤微生物群落结构特征 结果表明 野山 参生长的根区土壤与对照土壤相比 微生物总量发生了明显的变化 均有减少的趋势 野山参根区中代表有致病 特征的真菌种类18 2w9 18 1w9c 18 1w9t的总量没有增加反而减少 这与以往的研究结果相反 应用主成分分 析法从PLFAs中提出 3个主成分 2个样品分别代表81 03 和85 44 的变异信息 主成分一 PC1 分别解释了 36 54 和39 09 的变异 主成分二 PC2 分别解释了28 65 和29 91 的变异 主成分三 PC3 分别解释了15 83 和16 44 的变异 在测试的野山参根区土壤样品中 PC1得分均比对照低 而且从主成分得分图上可以很明显区 分根区土壤与对照土壤 从微生物群落结构上揭示了野山参在一地健康生长的主要原因 关键词 土壤微生物 群落多样性 磷脂脂肪酸 主成分分析 野山参 中图分类号 S151 9 4文献标志码 A文章编号 1005 9369 2011 02 0092 05 Analysis of soil microbial diversity in wild ginseng with phospholipid fat ty acid method ZHANG Yayu1 SONG Xiaoxia1 SUN Hai1 WANG Jingkuan2 YU Shu2 1 Insti tute of Special Wild Economic Animal and Plant Science CAAS Jilin 132109 China 2 College of Soil and Environment Shenyang Agricultural University Shenyang 110161 China Abstract The ester linked phospholipid fatty acid PLFA method was used to evaluate the soil microbial community diversity in two wild ginseng root zone and corresponding control The results showed that root zone campar with control the total soil microbial biomass in root zone changed obviously and all depressed trend presented a tendency of decrease compared with that of control the total represent fungi with the pathogenic efficacy 18 2w9 18 1w9c 18 1w9t in No 1 wild ginseng root zone was not increased and was decreased The experiment result was different from all the results of the previous Three principal components were screened out with the principal component analysis represented 81 03 and 85 44 of the information of diversity Among the three PC1 explained 36 54 and 39 09 of the variation PC2 explained 28 65 and 29 91 PC3 explained 15 83 and 16 44 which helped successfully distinguish root zone from control in the principal components scores charts This was probably the reason why the wild ginseng could grow health long term Key words soil microbial community diversity PLFA principal component analysis wild ginseng 野山参 Wild ginseng 为五加科人参属多年生 草本植物 其根为道地中草药 吉林省东部山区 被认为是人参最适宜的生长区 而抚松县被誉为 人参之乡 自古就是人参的主产区 出产优质野 山参 野山参是指自然生长在原始森林中 没有人 为因素影响的一类人参 野山参的药用价值极高 第42卷 第2期东北农业大学学报42 2 92 96 2011年2月Journal of Northeast Agricultural UniversityFeb 2011 早在2 000年前 神农本草经 中对野山参的药用 价值就有了详细的记载 本草纲目 中称野山参为 神草 列为药中上品 具有生津安神 补虚固 脱 大补元气 强精健身益寿延年之功效 1 但随 着对野山参无度采挖 导致目前野山参资源濒于灭 绝的地步 而林下参和农田栽参的发展既是对山参 资源的保护 又可满足人们对人参产品的需求 也 为参农提供了治富之路 为农村产业结构调整提供 了新的思路 但在林下参发展过程中由于选地不 当 林下参的存苗率低 形体变劣的现象时有发 生 农田栽参过程中由于改土不当 存在产量低 病害重 且存在严重的连作障碍 限制了参业的发 展 而上述问题的产生均与土壤的物理 化学及微 生物特性等关系密切 2 4 通过对栽参土壤和老参 地土壤的微生物及酶活性的研究 多数专家提出土 壤微生物群落的改变可能是人参连作障碍的根源 野山参在深山密林中生长十年 几十年甚至上百 年 其能够安然无恙 与其特有的土壤微生物群落 特性直接相关 前人对于人参土壤微生物的研究多 采用传统的培养法 由于可培养的微生物种类仅占 土壤微生物的1 左右 所以对于微生物的真实性 存在一定的误差 而磷脂脂肪酸PLFA方法是一种 快速 重现性好的分析土壤微生物群落结构多样性 的方法 可以分析所有活体微生物 包括可培养和 不可培养的微生物 而且 信息准确度高 应用 范围广 操作简便 可以同时处理大量的样品 是 对土壤中活体微生物的真实反映 5 8 本文利用磷 脂脂肪酸法通过对野山参根区土壤微生物结构特性 与非根区土壤微生物群落的对比分析 明确山参根 区土壤的微生物结构特征 期望能在农田栽参土壤 改良和林下参护育选地方面提供帮助 为人参产业 的健康发展提供指导 1材料与方法 1 1试验材料 土壤样品采自吉林省人参之乡的抚松县露水河 镇楞场村 离村5 km的黑熊沟山上 1号 大约12 年生 野山参土壤位于东经127 44 北纬42 47 海拔 780 9 m 2号 大约25年生 野山参位于东 经 127 57 北纬 42 33 海拔 650 5 m 采集 地土壤类型为暗棕壤 该区是野山参经常被发现的 地域 1 2采样方法 首先除去表面的枯枝落叶层后 边抬参边取 土 由于野山参生长的特殊性 每年在生长期其 须根周围均长出许多营养吸收根 枯萎期时有的 脱落 有的在须根上形成珍珠点 使野山参根 圈土壤可以扩展到须根周围 2 cm 左右的范围 对照为非根区土壤 在附近采集 采集深度与参 层土壤样品相对应 取回的新鲜土样放入4 的 冰箱贮存待测 野山参根区土壤的基本性质见 表1 表 1供试土壤基本性质 Table 1Some basic properties of tested soil 编号 No 1号 2号 pH 6 19 5 57 有机质 g kg 1 OM 226 87 196 22 全氮 g kg 1 Total N 11 28 9 29 全钾 g kg 1 Total K 10 15 7 93 全磷 g kg 1 Total P 0 16 0 24 碱解氮 mg kg 1 Alkal N 63 18 69 18 速效钾 mg kg 1 Avail K 690 70 614 24 有效磷 mg kg 1 Avail P 7 07 11 64 1 3测试方法 土壤微生物磷脂脂肪酸的测定在 White 的方 法 9 上加以改进 鲜土加入柠檬酸缓冲液 氯仿 甲醇 0 8 1 2 25 避光震荡 离心 再加入柠 檬酸缓冲液 氯仿 甲醇 0 9 1 1 震荡 避光保 存 经18 h分离后 用吸管把上层液吸走 保留 底层氯仿相在氮气流下吹干 用柱层析硅胶 0 8 g 在 120 下烘干 2 h 填充玻璃管柱 直径 6 mm 依次分别加 10 mL 氯仿 10 mL 丙酮 10 mL甲醇 收集到的磷脂脂肪酸在甲醇相中 在 氮气流下吹干样品 向干样品中加入 1 mL 甲 醇 甲苯 1 1 混合液和1 mL 0 2 mol L 1KOH甲醇 溶液 37 水浴15 min后 冷却至室温 依次加 入2 mL去离子水 0 3 mL 1 mol L 1HAc 2 mL正 张亚玉等 磷脂脂肪酸法分析野山参根区土壤微生物群落多样性第2期 93 己烷 震荡 离心 甲酯化的 C19 0 为内标 氮气流下吹干 20 下保存 外标为 SupelcoTM 37 Component FAME Mix 和 Bacterial Acid Methl Esters Mix 检测部分由安捷伦GC MS 6890 N 5973 N 完 成 色谱柱为hp5 MS 30 m 250 um 0 25 um 石英 毛细管柱 GC MS分析条件 升温程序 进样后 在70 保持5 min 之后以20 min 1的速率升至 190 保持 1 min 以 5 min 1的速率上升到 200 停留2 min 以10 min 1的速率上升到 280 保留8 min 进样口温度为250 载气为 He 0 9 mL min 1 分流比为 10 1 离子源温度 230 四极杆 150 质谱全扫描范围 30 600 m z 1 1 4数据分析 应用Excel SAS软件进行方差分析和PLFAs 主成分分析 其中c t i和a分别表示顺势双键 反势双键 顺势支链 反势支链 br表示不确定支 链位置 Me表示甲基位置 cy表示环丙基 结果 见表2 PLFAs 18 2w9 18 1w9c 18 1w9t 10Me17 0 10Me18 0 14 0 i15 0 a15 0 15 0 br16 0 i16 0 16 1w7 16 1w9c 16 1W9t 16 0 br17 0 i17 0 cy17 0 br19 0 cy19 0 代表生物 Representative organism 真菌 放线菌 细菌 参考文献 Reference 7 8 9 10 11 表 2磷脂脂肪酸的代表生物 Table 2Biomarkers of some microbial groups in soil 2结果与分析 本试验共测得1号土壤中的脂肪酸23种 2号 土壤中脂肪酸19种 根区土壤与非根区土壤微生 物所含脂肪酸种类基本相同 2 1野山参根区土壤的微生物PLFA图谱的特征 结果见图1 2 本研究鉴定的PLFAs C链长 度为14 24 包括饱和 不饱和 甲基化分支和环 化脂肪谱 在野山参根区土壤的PLFAs中 i15 0 a15 0 i16 0 16 1w9c 16 1w9t 16 0 br17 0 i17 0 cy17 0 18 2w9 18 1w9c 18 1w9t 等 13 种 PLFAs在1号野山参土壤微生物丰度占97 28 2 号野山参中占84 89 是山参根区土壤生态系统 的主要生物成分 同时发现 野山参根区土壤微 生物总量与非根区土壤微生物总量相比 均有下 降的趋势 野山参根区土壤的微生物组成也有所 改变 对比所获得的野山参样品 1号野山参生长 健康 无发病症状 研究1号根区土壤的微生物组 成发现 根区中代表致病因素的真菌18 2w9 18 1w9c 18 1w9t的数量与对照相比明显减少 而代 表放线菌种类的10Me17 0却明显增加 由于在人 参生产中 真菌病害的发生较为常见 2号野山参 虽然年限较长 但身体已经发生锈变的症状 可能 与其根区土壤的微生物变化有着直接的关系 与对 照相比 微生物的量虽然有减少的趋势 但代表真 菌18 1w9c 18 1w9t减少的程度并不显著 有益微 生物没有增加均在减少 这与农田土壤的微生物群 落结构的变化与病害的发生直接相关相一致 2 2野山参根区土壤微生物的群落结构 通过PLFAs主成分分析可明显的区分野山参 根区土壤与对照土壤 见图3 根区土壤在坐标轴 附近 而对照土壤则远离坐标轴 说明野山参根 区土壤微生物脂肪酸的组成和主成分一 二间的 相关性不大或成负相关 12 13 3个主成分得分解释 了81 03 和85 44 的变异 主成分一 PC1 解释 了36 54 和39 09 的变异 主成分二 PC2 解释 了28 65 和29 91 的变异 主成分三 PC3 解释 了15 83 和16 43 的变异 在测试的野山参根区 土壤样品中 PC1得分均比对照低 主成分一 二 的因子分析表明 i15 0 a15 0 16 1w9c i17 0 与 主成分一呈高度正相关 而16 1w9t 16 0 br17 0 17 0 10Me cy17 0 18 0 10Me 18 2w9 18 94 东北农业大学学报第42卷 3讨论 PLFAs在研究比较复杂环境中微生物群落组成 方面应用广泛 14 PLFAs的变化可以很好地反映野 山参根区土壤微生物的变化 研究证明野山参根 区土壤微生物脂肪酸图谱与对照相比发生明显的 改变 野山参根区土壤的微生物总量明显减少 代表真菌生物的18 2w9 18 1w9c 18 1w9t总量 与对照相比有减少的趋势 这一结果有别与以往 的相应研究 产生这一现象的原因可能与野山参 的生长有直接关系 野山参在一地生长10年 20 年甚至几十年 不感病 也不出现平地栽参的连 1w9c 18 1w9t 与主成分成高度负相关 也就是与 根区土壤的微生物群落结构直接相关 从对两份土 样的分析看 野山参生长根区土壤微生物群落组 成发生了改变 尽管两份样品采自不同的山上 但 根区土壤的微生物群落的变化却有相似的发展趋 势 图 3PLFAs主成分分析图谱 Fig 3Principle components analysis of PLFA profiles from microbe 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 300 250 150 200 100 50 0 i15 0 14 00 a15 0 i16 0 16 1w9c 16 1w9t 16 0 br17 0 i17 0 17 0 10Me cy17 0 18 0 10Me br18 0 18 2w9 18 1w9c 18 1w9t Br19 0 24 00 00 23 00 22 00 21 00 20 00 Cy19 0 脂肪酸含量 nmol g 1 Fatty acid content 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 1号山参No 1 wild ginseng 1号对照No 1 control 图 22号野山参PLFAs图谱 Fig 2PLFAs profile of tested No 2 soil 图 11号野山参PLFAs图谱 Fig 1PLFAs profile of tested No 1 soil 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 300 250 150 200 100 50 0 i15 0 a15 0 Bri16 0 16 1w7 16 1w9c I16 0 Br17 0 cy17 0 18 0 10Me 18 1w9t Br18 0 23 00 脂肪酸含量 nmo lg 1 Fatty acid content 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 脂肪酸种类 Fatty acid sorts 15 00 16 1w9t 16 00 I17 0 17 0 10Me I18 0 18 1w9c 1号对照No 1 control 2号山参No 1 wild ginseng 1号山参No 1 wild ginseng 2号对照No 2 control 050100150200250300 80 60 40 20 0 20 40 60 80 100 PC1 36 5 PC2 28 7 一一一一一一 一一一一一一 一一一一一一 七七七七七七 七七七七七七 七七七七七七 2号山参No 2 wild ginseng 2号对照No 2 control 张亚玉等 磷脂脂肪酸法分析野山参根区土壤微生物群落多样性第2期 95 脂肪酸种类 Fatty acid sorts 作障碍 特有的根区土壤微生物群落特性可能是 其健康生长的直接原因 对于土壤微生物的传统培养方法 土壤微生物 可培养的总量不足全部微生物的1 分离结果不 能够反映土壤微生物的真实情况 利用PLFA分析 发法可以培养几乎土壤中全部的活体微生物 能够 比较准确的反映土壤微生物的群落结构特征 15 对 野山参根区土壤所测得的23种PLFAs代表了土壤 的细菌 真菌和放线菌 是野山参根区土壤生态 系统的主要成分 结合以往对于栽培人参土壤微 生物真菌培养研究的结果 在方法上为解决制约农 田栽参和老参地的微生物改造方面提供了方法指 导 由于野山参资源的濒临灭绝 其根区土壤的获 得也较为珍贵 通过了解野山参根区土壤微生物群 落特征 可以为农田栽参土壤改良提供科学指导 为人参产业持续健康发展提供新的理论支持 参考文献 1 何永明 人参本草史考证 J 中成药 2001 23 5 384 386 2 贾书刚 王淑平 窦森 栽培人参对床土化学性质的影响 J 吉 林农业大学学报 1992 14 2 42 46 3 窦森 张晋京 江源 等 栽参对土壤化学性质的影响 J 吉林农 业大学学报 1996 18 3 67 73 4 于得荣 赵寿经 曹秀英 等 农田土壤与高产人参腐殖土壤的 理化性状对比研究 J 土壤学报 1990 27 2 228 232 5 宋晓霞 张亚玉 孙海 人参与西洋参土壤脲酶活性对比研究 J 特产研究 2008 2 33 35 6 张亚玉 宋晓霞 孙海 栽培人参 西洋参不同年限土壤酸碱 度和酶活性的变化研究 J 特产研究 2008 4 33 35 7 白震 何红波 张威 等 磷脂脂肪酸技术及其在土壤微生物研 究中的应用 J 生态学报 2006 26 7 2387 2393 8 焦晓丹 吴凤芝 土壤微生物多样性研究方法的进展 J 土壤通 报 2004 35 6 789 792 9 White D C Stair J O Ringelberg D B Quantitative comparisons of in situ microbial biodiversity by signature bio marker analysis J Joumal of Industry Microbiology 1996 17 185 196 10 Zelles L Identification of single cultured microorganisms based on their whole community fatty acid profiles using extraction proce dure Chemosphere 1999 39 665 682 11 Hamel C Vujanovic V Jeannotte R et al Negative feedeback on a perennial crop Fusarium crown and root of asparagus is related to changes in soil microbial com munity structure Plant and Soil 2005 268 75 87 12 Blume E Bischoff M Reichert J M et al Surface and subsurface microbial biomass community structure and metabolic activity as a function of soil depth and season Appl Soil Ecol 2002 20 171 181 13 Justin B B Myrold D D Sulzman E W Root control on soil micro bial community structure in forest J Oecologia 2006 148 4 650 659 14 祁建军 姚槐应 李先恩 等 磷脂脂肪酸法分析地黄根际土壤 微生物多样性 J 土壤 2008 40 3 448 454 15 于树 汪景宽 李双异 应用PLFA 方法分析长期不同施肥处理 对玉米地土壤微生物群落结构的影响 J 生态学报 2008 28 9 4222 4227 96 东北农业大学学报第42卷 东北农业大学科技动态 国家自然科学基金面上项目 表达纤维素酶玉米青贮用乳酸菌工程菌的构建 通过验收 由项目主持人杨丽杰教授主持的国家自然科学基金面上项目 表达纤维素酶玉米青贮用乳酸菌工程菌的构建 近 日通过验收 该项目采用微生物学 分子生物学和酶学相结合的方法 将克隆出的纤维素酶基因转入从天然优质的 玉米青贮中优化出的玉米青贮专用乳酸菌中 首先构建出能表达纤维素酶青贮用乳酸菌工程菌株 同时进行重组体 筛选 DNA序列分析及表达酶活测定 系统地研究表达纤维素酶乳酸菌工程菌质粒稳定性 本项目的意义在于改 善青贮品质 提高纤维素降解率 避免纤维素酶使用过程中失活 降低饲料成本 为奶牛场养殖带来更大的经济效 益 另外 对合理地利用自然资源 改善农业生态环境和提高生态效益具有重要意义

内容简介：

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