如何开展比对实验.ppt

如何开展比对实验 2011 1 6 学习和讨论要点 定义和术语有关文件的规定和细则比对试验设计方案要点不同检测系统检验结果可比性的评估 术语和定义 检测系统 完成一个检测项目所需要的仪器 试剂 校准品 质控品 操作程序等的组合 若是手工操作 还必须包括具体的操作人员 配套检测系统 整个检测系统由同一厂商或仪器的指定厂商提供并配套使用 若该系统经FDA认可 使用这样的检测系统对病人标本进行检验 其结果具溯源性 自建检测系统 实验室根据自己的意愿自行建立的检测系统 其检验结果往往不可溯源 不同检测系统间缺乏可比性 检测系统 仪器 试剂 校准品 溯源性和可比性 溯源性 通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链 使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准 通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性 可比性 不同检测系统或不同检验方法对一批病人标本测定结果的一致程度 两者关系 溯源性是可比性的基础 可比性是溯源性的目标 追求检验结果的可比性是最大的质量 比对试验 Ifthelaboratoryusesmorethanoneinstrumenttotestforagivenanalyte aretheinstrumentscheckedagainsteachotheratleasttwiceayearforcorrelationofpatient clientresults 实验室使用一台以上的仪器进行同一试验 须每年至少进行两次病人结果的比对 有关文件的规定和细则 CLSI NCCLS EP CLSI是美国 临床实验室标准化协会 的英文缩写 英文名为ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute CLSI前身是NCCLS 美国临床实验室标准化委员会 英文名称为Nationalcommitteeforclinicallaboratory 美国临床实验室标准化委员会 NCCLS 评价方案 EvaluationProtocol 简称EP 系列文件 目前已普遍为临床实验用来对仪器 试剂及方法学进行系统化评价的文件 CLSI EP9 A2 CLSI文件EP9 A2 用患者标本进行方法比对及偏倚评估 批准指南 第二版 是为实验室人员和生产厂商制定的 它叙述了测定两种方法之间相对偏倚的程序 也叙述了采用一分为二的患者样本设计方法比对试验时所需要考虑的因素 CLSI CLSI文件EP9 A2 此文件为临床实验室用户和制造商提供了设计一个评价实验的指南 用于评价测定同一被测物的两种方法之间的偏倚 理想情况下 待评方法 或候选方法 应该与参考方法相比较 CLSI CLSI文件EP9 A2 本指南便于估计两种方法在不同样本浓度下的偏倚 预期的差异 如果参较方法同厂家使用的方法相同 那么就可以把实验结果与厂家的声明进行统计学比较 以确定性能是否可以接受 CLSI CLSI文件EP9 A2 1 1比对试验概述评价一个分析方法需要以下条件 操作者有足够的时间熟悉仪器操作及保养程序 操作者有足够的时间熟悉评价方案 在评价实验过程中 待评方法及参比方法必须保证有适当的质量控制 待评方法及参比方法必须有足够的数据以保证结果具有代表性 需要多少数据取决于两种方法的精密度和干扰作用 两方法间的偏倚大小 样本分析物数据的范围及检测的医学要求 CLSI CLSI文件EP9 A2 在熟悉仪器操作过程中 待评和参评方法的操作者必须掌握仪器安装 操作 维护 故障排除及两个方法的质量控制的所有方面 此过程可以在其他评价工作之前或与仪器厂商培训阶段同时进行 两种方法都要进行实验室的常规质量控制 CLSI CLSI文件EP9 A2 在熟悉过程后 方法比对实验即可开始 工作组建议在至少5个工作日内最少要分析完40个患者样本 在遵循厂家的推荐进行校准的条件下 增加测定样本数及测定天数 可以提高实验的可靠性及有效性 CLSI CLSI文件EP9 A2 用待评方法和参比方法对每一患者样本各作两份测定 分析每一方法在同一批内的双份测定结果 应尽可能使至少50 样本的测定结果处于实验室的参考区间之外 CLSI CLSI文件EP9 A2 实验结束后 合理记录数据 如附录所建议的 数据作图并目测或统计学方法评价图的相对线性 足够范围和离散的均匀性 根据数据的检查结果 使用简单的线性回归或用其他方法估计在医学决定水平处的预期偏倚的可信区间 然后把此评价结果与厂家声明或内部标准进行比较以判断方法是否可以接受 CLSI 医疗机构临床实验室管理办法 新旧批号试剂对比验证同一项目不同分析系统结果比对评估 同一项目不同分析系统结果比对评估 管理办法 中规定 实验室内采用不同方法或仪器检验同一项目至少半年进行一次比对 样本至少20份具体试验方法同方法学比对实验 比对结果不好应及时解决考虑不同方法线性参数可调Y bX a参数调整后重新比对 ISO15189 ISO15189 根据ISO15189临床实验室质量保证之内审要求 在同一实验室使用两种以上型号的分析仪时 应当进行比对试验 在卫生部的医院管理年检查中 明确提出比对试验的重要性 ISO15189 5 6 6当同样的检验应用不同程序或设备 或在不同地点进行 或以上各项均不同时 应有确切机制以验证在整个临床适用区间内检验结果的可比性 应按适合于程序和设备特性的规定周期验证 5 6 7实验室应文件化并记录比对活动 只要适用 针对其结果迅速采取措施 对识别出的问题或不足应采取措施并保留记录 ISO15189 5 6检验程序的质量保证 CLIA 88 CLIA 88 4 化验结果的比较如果实验室对某一项目的测定采用两种相似的方法 则所在组室的负责人必须每年两次对有关的化验结果进行比较工作 步骤如下 一 选择适当数量的标本二 确定可接受的标准三 进行两种方法测定结果的比较 如达不到标准 要有解决措施四 记录全过程 并保存两年 CLIA 88 海军总医院检验科程序文件 比对试验设计方案要点 比对计划 标准比对方案 原则上常规生化项目 血细胞计数 凝血三项三地实验室之间的比对每年进行一次 其他项目视具体情况每1 2年进行一次 程序文件 比对试验设计方案要点 1 各种仪器处于良好的工作状态 严格按SOP操作 2 检验人员有足够的时间熟悉检测系统的各个环节 熟悉评价方案 3 在整个实验中 保持实验方法和比较方法都处于完整的质量控制之下 始终对实验结果有校准措施 4 实验时间至少做5天 时间长一些更好 可以客观反映实际情况 程序文件 比对试验设计方案要点 5 至少做40份病人标本 多一点更好 6 尽可能使50 的实验标本分析物的含量不在参考区间内 各个标本分析物含量越宽越好 7 不要使用对任一方法有干扰的标本 8 每份标本应有足够的量 以便使实验方法和比较方法都能做双份测定 程序文件 比对试验设计方案要点 9 将标本按1 2 3 4 5 6 7 8顺序排列先测一遍 然后将顺序倒过来做双份第二次测定 10 应在2个小时内两种方法对同批标本分别开始实验 最好使用当天采集的标本 程序文件 实验样本要求 来源于健康人或患者 无干扰 尽量避免储存 测定物浓度范围在检测线性范围内较均匀分布 样本数至少40例 确认 增加数量能提高可信性 参比方法 实验室当前使用的方法 生产厂家声明的方法和公认的参考方法都可作为参比方法 参比方法应该做到如下几点 具有比待评方法更好的精密度 可能的情况下 不受已知干扰物质的干扰 使用与待评方法相同的单位 可能的情况下 与标准品或参考方法有已知的相对偏倚 可溯源 具体操作 测定方法 每天分别用两种方法进行测定 测定顺序 1 2 3 4 5 6 7 88 7 6 5 4 3 2 1 顺序中的浓度应尽可能随机排列 第二次标本的反向顺序可以减少交叉污染及漂移对重复测定标本平均值的影响 测定次数 至少测定5天 共40个样本 160个测试 复杂的后期数据处理 同种方法内离群值检查 参考方法和待评方法 两种方法间离群值检查绘制散点图 偏倚图回归分析检查范围是否足够 r 0 975 得出回归方程决定水平的预期偏倚与允许总偏差比较有文献认为预期偏倚应 1 2TEa 实验数据的收集 处理和应用 1 不采用已明确有人为误差的结果 2 记录实验结果 若两方法结果的差值大于任一方法的批内不精密度时 应查对标本 并重新实验 若找不出原因 应保留数据备考 3 整个实验必须有室内质量控制 失控时必须重做 实验数据的收集 处理和应用 4 检查每一方法内双份测定值有无离群表现 以4倍的各方法差值的均值为判断限 各方法内的成对差值都应在限值内 说明双份测定结果符合要求 5 将实验结果点画于X Y座标纸上 图中标出斜率为1通过零点的直线 看图了解有无线性关系 有无明显离群点 实验数据的收集 处理和应用 6 检查X Y关系实验点有无离群表现 先看图有无明显离群点 若有 应对X Y配对值作离群值计算 以4倍的平均差值为判断限 所有差值都不应超出限值 7 检查标本内分析物含量分布是否适当 影响r的因素一是实验点和回归线的离散程度 一是分析物含量分布宽度 一般要求r 0 975或r2 0 95 认为X范围是合适的 图1 实验数据的收集 处理和应用 8 线性回归统计 bX ab和a分别表示两种方法间的比例误差和恒定误差 根据临床使用要求 可在各个临床决定水平浓度Xc处 了解Y方法引入后相对于X方法的系统误差 SE SE Yc Xc 实验数据的收集 处理和应用 9 以方法学比较评估的系统误差 SE 1 2CLIA 88允许误差或根据生物学变异设定的分析质量指标 认为系统稳定状态的系统误差属临床可接受水平 10 使用2个及以上的医学决定水平浓度 若项目只有一个医学决定水平 则需估计在实验数据均值附近的系统误差 11 若项目暂时没有医学决定水平的 则需估计在实验数据均值附近的系统误差以及参考值上下限处的系统误差 实验数据的收集 处理和应用 12 相关系数好 并不代表二个检测系统间不存在系统误差或偏倚 图2和表1 13 当相关系数较差时 应改善数据分布范围 或实验方法的精密度 不同检测系统ALT测定相关与回归分析 不同检测系统ALT测定的可接受性能评价 比对结果的判断 将比对结果制