免疫复习总结.doc

临床免疫学检验复习总结名册解释免疫（immunity）：是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而排斥“非己” ，以维持人体的健康。 抗原：是指能刺激机会免疫系统启动特异性免疫应答，并能与相应的免疫应答产物发生特异性结合的物质。抗体（antibody,Ab)：是B细胞识别抗原后增殖分化为桨细胞所产生的一种免疫球蛋白，主要存在于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合。抗原抗体反应：指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。亲和力（affinity）：是抗体分子上单一抗原结合部位与抗原分子表面一个相应的抗原表位之间的结合强度，是抗原、抗体之间固有的结合力。亲合力：指一个抗体分子与抗原分子表面数个相应抗原表位之间的结合强度。特异性（specificity）：一种抗原通常只能与其刺激机体产生的相应抗体结合，这种抗原与抗体结合反应的专一性称为抗原抗体反应的特异性。交叉反应（cross reaction）：若两种不同的抗原分子表面具有相同或类似的抗原表位，则二者均能与对方抗血清中的相应抗体结合，即发生交叉反应。可逆性（reversibility）：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可以解离为游离的抗原与抗体的特性称为抗原抗体反应的可逆性。免疫原（immunogen）：指能激发机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。半抗原（hapten）：指仅有抗原性而无免疫原性的物质，半抗原不能直接用作免疫原，只有把这些半抗原与蛋白质等大分子物质结合后才能刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞。佐剂（adjuvant）：指预先或与抗原一起注射与机体，能够增强机体免疫应答或改变免疫应答类型的物质。抗血清（antiserum）：将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，一定时间后采集动物血液，分离含有抗体的血清，称为抗血清。单克隆抗体（monoclonal antibody）：由一个仅识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体，称为单克隆抗体。多克隆抗体：抗原通常带有多个表位，免疫动物后、可刺激产生针对同一抗原不同表位的抗体，所以免疫血清实质上包含了多种质与量均不同的抗体，故称多克隆抗体。 杂交瘤技术：利用细胞融合技术，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤的技术。嵌合抗体（chimeric antibody）：从鼠源单抗功能性V区基因，经基因重组与人抗体C区基因连接成嵌合基因，插入适当的表达载体中，转染宿主细胞，表达嵌合抗体。改形抗体（reshaped antibody，RAb）：在嵌合抗体基础上用人抗体可变区的骨架区序列取代鼠源单抗CDR以外的骨架区序列，重新构成既有鼠源单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体，该抗体对人体几乎无免疫原性。凝集反应（agglutination reaction）：指颗粒性抗原或覆盖了可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）结合后，出现的肉眼可见的凝集现象。试管凝集试验：是在试管内颗粒性抗原与相应的抗体直接结合，在一定条件下出现肉眼可见的凝集现象。间接凝集反应（indirect agglutination）：将可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶联在适当大小的颗粒性载体表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适当电解质存在的条件下，出现特异性的凝集现象，称为间接凝集反应或被动凝集反应。协同凝集反应（coagglutination reaction）：与间接凝集反应的原理相类似。载体为金黄色葡萄球菌。SPA能与IgG的Fc段结合，当葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。当与相应的抗结合时，则出现凝集反应。间接血凝试验（indirect hemagglutination test）：以红细胞为载体的间接凝集试验。将可溶性Ag（或Ab）吸附于人O型RBC或绵羊、家兔的RBC制成致敏的RBC，与相应Ab（或Ag）作用，在有电解质存在的条件下，经过一定时间可出现肉眼可见的红细胞凝集现象。沉淀反应（precipitation）：指在适当条件下，可溶性的抗原和相应的抗体特异性结合后形成沉淀物的现象。液相沉淀反应（fluidphase precipitation）：指可溶性抗原与相应抗体在液体介质中发生的沉淀反应。单向免疫扩散试验（single immunodiffusion）：待测抗原从凝胶孔中向含有相应定量抗体的凝胶四周自由扩散，在二者浓度比例合适处形成白色沉淀环。沉淀环大小与抗原的浓度呈正相关。双向免疫扩散（double immunodiffusion）：将抗原和抗体溶液分别放在凝胶的对应孔中，让两者在凝胶中自由扩散，当抗原与抗体相遇在浓度比例合适处便形成可见的白色沉淀线。对流免疫电泳（counter immunoelectrophoresis）：是在电场作用下，抗原和抗体在凝胶中定向、加速的双向免疫扩散技术。补体结合试验（complementfixationtest，CFT）是利用抗原抗体复合物可结合补体，而游离的抗原或抗体不能结合补体的特点，以溶血素致敏的绵羊红细胞为指示系统，指示补体是否被结合，从而判断抗原抗体是否对应。荧光免疫技术：是将抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结合起来的一种免疫分析技术,是免疫标记技术中发展最早的一种检测方法荧光免疫显微技术： 以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原.。或血清中的抗体，常用于定性和定位检查的一门技术。数字共聚焦技术：用镧系稀土元素螯合物(如Eu3+螯合物)标记Ag或Ab， Ag与Ab反应后，利用时间分辨荧光分析仪检测标本中的相应Ab或Ag时间分辨荧光免疫测定：用镧系稀土元素螯合物(如Eu3+螯合物)标记Ag或Ab， Ag与Ab反应后，利用时间分辨荧光分析仪检测标本中的相应Ab或Ag。荧光偏振免疫测定(FPIA)：一种均相竞争荧光免疫分析法。待测的小分子抗原和荧光素标记的小分子抗原(恒量)与相应抗体(恒量)竞争结合。RIA：即放射免疫分析，是以放射性核素标记抗原和待测抗原竞争结合一定量的特异性抗体，待测抗原量与抗原抗体复合物放射性强度呈反比，用来测定待测抗原含量的一种竞争免疫学方法。IRMA：即免疫放射分析，是以放射性核素标记的抗体与待测抗原发生非竞争性结合反应，待测抗原量与抗原抗体复合物放射性强度呈正比，从而测定待测抗原含量的一种非竞争免疫学方法。酶免疫技术：是用酶作标记物标记抗原或抗体，将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性结合在一起的一种免疫检测技术。酶联免疫吸附试验（ELISA）原理：抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面，受检样品和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原抗体复合物，加入酶反应底物后，底物被酶催化形成有色产物，通过定性或定量分析。酶免疫印迹试验（enzyme immunoblotting test):是一种以膜为载体的酶免疫技术，以膜为载体吸附抗原，加入抗体和酶标二抗，反应后在膜表面形成免疫复合物，加底物显色进行检测。发光免疫技术：是将发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。这种方法不仅具有发光分析的高灵敏度而且具有抗原抗体反应的高度特异性，包括光致发光免疫技术和化学发光免疫测定技术。化学发光免疫技术：是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。该方法不仅具有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性,而且还具有分离简便,可以实现自动化分析的特点，包括发光酶免疫分析、化学发光免疫分析和电化学发光免疫分析。化学发光酶免疫测定：是采用以催化反应参与发光的酶如HRP或ALP作为标记物，标记检测用的抗原或抗体，待测标本与检测试剂进行免疫反应后，形成酶标抗原抗体复合物，结合在复合物上的酶催化其底物发生反应并产生发光效应。胶体金免疫技术（colloidal gold immunoassay ）是指利用胶体金颗粒标记特异性蛋白，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，从而进行定性或半定量检测。免疫金（immunogold） 是指胶体金与Ag或Ab的结合物, 有时称之为金探针。斑点金免疫层析：以NC膜为载体，结合抗原抗体反应、金标技术与蛋白质层析技术的快速固相膜免疫分析技术。免疫金银染色：是在金免疫技术基础上发展起来的更为敏感的技术，利用金免疫技术测定产物上的金颗粒将银离子还原成银颗粒，在金颗粒表面形成一色泽更深的黑色层，可增强金免疫技术的敏感性。胶体金：是金盐被还原成金原子后形成的金颗粒悬液，胶体金颗粒有一个基础金核（金原子Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuCL2）,外层离子层H则分散在胶体金溶液中，以维持胶体金游离羽溶胶间的悬液状态。免疫组织化学（Immunohistochemistry）：用显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位，通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的免疫学检测技术。亲合组织化学技术是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础，建立的组织细胞化学技术。葡萄球菌蛋白A(SPA)：金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质，作为桥抗体或标记抗体不受种属特异性的限制，它能和人及许多动物IgG结合，对IgG免疫球蛋白亚型的结合有选择性。凝集素(1ectin)：从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，能凝集红细胞。免疫芯片：将抗原抗体反应的特异性与电子芯片高密度集成原理相结合产生的生物芯片检测技术。外周血单个核细胞PBMC：外周血单个核细胞主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验中最常用的细胞群，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。 E花环试验：T细胞表面有特异性绵羊红细胞 (SRBC) 受体，即E受体。将T细胞与SRBC按一定比例混匀，置4至少2h或过夜，T细胞表面的E受体能与SRBC结合形成以T细胞为中心，四周环绕SRBC的花环样结构，镜检计数可得总花环(Et)形成率，亦即T细胞的百分率。 淋巴母细胞转化试验：细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞出现一系列的增殖反应，主要表现为胞内蛋白质和核酸合成增加，并发生形态返祖变化，如细胞变大、胞质增多、胞质出现空泡、核染色质疏松、核仁明显，这种淋巴细胞增殖反应又称淋巴细胞母细胞转化(lymphoblast transformation)。溶血空斑试验：该方法用于检测实验动物抗体形成细胞数目。其基本原理是抗体形成细胞分泌的Ig与SRBC上的抗原结合，在补体作用下出现溶血反应。方法是将SRBC与其免疫的小鼠脾细胞、补体及适量琼脂糖液混合倾注平板，或者将吸附有已知抗原的SRBC与待检B细胞、补体及适量琼脂糖液混合倾注平板，温育一定时间，抗体形成细胞释放的抗体会使周围SRBC致敏，并在补体作用下出现肉眼可见的溶血空斑，每一空斑中央含有一个抗体形成细胞，因此空斑数量即代表抗体形成细胞数。NBT还原试验：活化的中性粒细胞与NBT一起温育，由于中性粒细胞吞噬杀菌过程中产生超氧阴离子（O），使被吞进细胞内的NBT由原来呈淡黄色还原成不溶性的蓝黑色颗粒,沉积在细胞浆中，称为NBT阳性细胞。光学显微镜下计数NBT阳性细胞，其百分率可反映中性粒细胞的杀菌功能。流式细胞术：是指借助流式细胞仪，精确、快速地对生物细胞的理化特性和生物学特性进行多参数定量分析，并对特定细胞群体分选的新技术。细胞分选：是指从细胞群体中将选定的细胞分离出来。List Mode方式：是指用表格将每一个被测细胞的众多原始数据全部记录下来，形成数据文件。荧光补偿技术：是指利用已知标准样品或根据细胞样品的生物学意义，合理设置各荧光信号之间的相互补偿值。依赖细胞株：是指人们为检测某一种细胞因子而筛选的，该细胞株的分裂增殖只依赖于某一种细胞因子的存在，并在一定浓度范围内与细胞增殖程度呈正相关。若培养基中缺乏这种细胞因子，依赖株则不能存活。细胞因子活性单位：细胞因子使相应细胞达到最大程度增殖的50时所需细胞因子的含量称为细胞因子的一个活性单位。免疫球蛋白超家族:该类细胞黏附分子具有与Ig相似的结构特征，即具有一个或多个IgV样或C样结构域，具有黏附分子功能，种类繁多，统称为IgSF，其识别的配体多为IgSF分子和整合素家族分子。主要参与介导细胞间黏附和信号传递，参与淋巴细胞法与分化，炎症反应和免疫应答及淋巴细胞的归巢和再循环。E-selectin：选择素家族成员，主要表达于血管内皮细胞上，其与配体结合后，参与介导白细胞向炎症区和肿瘤细胞转移。粘附分子：指介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合的一类分子糖蛋白，分布于细胞表面或细胞外基质，参与细胞信号传导与活化、细胞的伸展和移动、细胞的生长及分化、肿瘤转移和创伤愈合。准确度：即待测物的测定值与其真值的一致性程度。准确度不能直接以数值表示，通常以不准确度来间接衡量。对一分析物重复多次测定，所得均值与其真值或参考靶值之间的差异亦即偏差，即为测定的不准确度。精密度：在一定条件下所获得的独立的测定结果之间的一致性程度。与准确度一样，精密度同样也是以不精密度来间接表示。测定不精密度的主要来源是随机误差，以标准差（SD）和/或变异系数（CV）具体表示。SD或CV越大，表示重复测定的离散度越大，精密度越差，反之则越好。质量保证：为一产品或服务项目、为满足特定的质量要求而提供的具有充分可信性所进行的、有计划和系统的措施。室内质量控制：由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠程度，目的是监测和控制本室常规工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。室间质量评价：为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构采取一定的方法，连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定实时的测定结果的可接受性。标准品(物)：指性质纯正的己知含量或成分的物质，通常用以比较检测未知的物质或成分。标准品有WHO国际标准品和国家标准品。质控物(品)：是用以校准物相同的介质制备的，具有较好的稳定性和重复性，其作用主要是控制仪器的稳定性，以保证仪器、试剂、工作环境具高度的稳定性。超敏反应(hypersensitivity):机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织损伤为主的免疫应答。变应原(allergen):引起超敏反应的抗原物质变应素 (allergins)：引起型超敏反应的抗体主要是IgE类抗体，亦称变应素 (allergins)自身免疫病(autoimmune disease, AID)是指由于过度而持久的自身免疫反应导致组织器官损伤并引起相应器官病变或临床症状的一类疾病。自身免疫耐受(autoimmune-tolerance)是免疫系统对自身的组织和细胞不产生或仅产生微弱的免疫应答。自身抗体(autoantibody)：某些原因使自身免疫耐受遭到破坏时，免疫系统就会对自身组织成分发生免疫应答，产生针对自身成分的抗体。自身免疫(autoimmunity)：某些原因使自身免疫耐受遭到破坏时，免疫系统对自身组织成分发生免疫应答产生针对自身成分的自身抗体和/或自身反应性淋巴细胞的现象。抗核抗体(ANA)：是泛指针对真核细胞核成分的一类自身抗体的总称。ANA是诊断SLE重要指标。类风湿因子RF：RF是一种存在于人或动物体内抗变性IgG Fc的自身抗体，常见的有IgM、IgG、IgA、IgE型，其中IgM型被认为是RF的主要类型。免疫球蛋白病：是外周血中免疫球蛋白和/或免疫球蛋白片段超常增高或尿中出现异常免疫球蛋白片段的疾病。单克隆蛋白：单克隆免疫球蛋白病时，由于单株浆细胞异常增殖所产生的大量理化性质十分均一的免疫球蛋白，称为单克隆蛋白（monoclonal protein，MP或M蛋白），M蛋白多无免疫活性，又称副蛋白（paraprotein）。冷球蛋白：温度低于30时易自发形成沉淀，加温后又可溶解的免疫球蛋白。免疫缺陷病（immunodeficiency disease，IDD）：是由于遗传因素或其他因素造成免疫系统先天发育障碍或后天损伤引起的各种临床综合征。原发性免疫缺陷病（primary immunodeficiency disease，PIDD）：是免疫系统的遗传缺陷或先天发育不全所致的临床综合征。继发性免疫缺陷病（secondary immunodeficiency disease，SIDD）：是免疫系统受到后天因素，如感染、肿瘤、营养不良、代谢疾病和其他疾病作用引起免疫功能低下所致的临床综合征。联合免疫缺陷病（combined immunodeficiency disease，CID）：是指T细胞和B细胞均有分化发育障碍，导致细胞免疫和体液免疫联合缺陷所致的疾病。ASO：是A族溶血性链球菌的代谢产物之一，对所有真核细胞的细胞膜、细胞质和细胞器都有毒性，链球菌溶血素“0”具有抗原性，能刺激机体产生对应的抗体，中和其溶细胞活性，称之为抗链球菌溶血素“0”(anti-streptolysin“0”，ASO)。TORCH：优生优育筛选检测部分致畸因素被综合称为“TORCH”。其中“T”代表弓形体(Toxoplasma gondii)，“R代表风疹病毒(rubella virus)，“C”代表巨细胞病毒(cytomegalovirus)，“H”代表单纯疱疹病毒(herpes simplex virus)，“O” (other infections)指其他相关病原体如：梅毒螺旋体、柯萨奇病毒、衣原体或支原体等的感染。这是一组可通过宫内感染直接影响胎儿发育，并引起相似临床症状和体征如围生期感染、流产、死胎、早产、先天性畸形和智力障碍等的感染因素。VDRL：本试验是用从牛心肌中提取的心类脂、加入一定量的卵磷脂和胆固醇作为抗原，简称VDRL抗原。试验时，将加热（56）处理过的待检血清加一滴于玻片上，再加等量抗原悬液并混合振摇，观察凝集颗粒。可作为定性和定量检测梅毒患者血清中反应素的筛选试验。COPT：是一种抗原-抗体反应，虫卵抗原与病人血清中相应抗体能特异性结合，一旦虫卵与抗体结合，虫卵周围形成泡状、指状或条状并有明显折光性的沉淀物。COPT的操作简便，成本不高，敏感性较高，沿用至今。侵袭力：即指细菌突破机体防御屏障，在体内定居、繁殖、扩散的能力。肿瘤特异性抗原（TSA)：是指仅表达于某种肿瘤细胞表面而不存在于正常细胞的新抗原。肿瘤相关性抗原（TAA):：是指非肿瘤细胞所特有的，既存在于肿瘤组织或细胞，也存在于正常组织或细胞的抗原物质，只是其在肿瘤细胞的表达量远远超过正常细胞，此类抗原只表现出量的变化而无严格的肿瘤特异性。肿瘤标志物（TM)是指在肿瘤发生、发展过程中，由肿瘤本身所产生的或是由机体对肿瘤细胞反应而产生的，反映肿瘤存在和生长的一类物质。宿主抗移植物反应（HVGR)：在实质器官移植中，宿主对供者器官产生的排斥反应移植物抗宿主反应(GVHR)：在骨髓移植或其他免疫细胞移植中，移植物中的淋巴细胞可识别宿主抗原，进而攻击宿主的靶组织产生的排斥反应。免疫性不孕：是由针对生殖系统抗原的自身免疫或同种异体免疫引起，例如针对精子、精浆、卵子透明带等抗原产生的免疫应答。重症肌无力（MG):：胸腺发育异常或未知原因产生乙酰胆碱受体抗体，突触后膜终板胆碱受体遭到破坏，数量减少，导致肌细胞动作电位产生障碍。多发性硬化症(MS)：是一种病因未明的，以中枢神经系统炎性、多灶性、脱髓鞘性病变为特征的疾病。简答题抗原抗体反应的影响因素有哪些？一、反应物自身因素：1、抗原：抗原的理化性状、分子量、抗原表位的种类及数目均可影响抗原抗体反应结果。2、抗体：抗体来源；抗体的浓度；抗体的特异性和亲和力。二、反应的环境因素1、电解质；2、酸碱度；3、温度。抗原抗体反应基本类型有哪些？抗原抗体反应基本类型有：凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应、免疫反应。简述杂交瘤技术的基本原理。杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖，经过克隆化后称为单个细胞克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增殖培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。简述火箭免疫电泳的原理及主要用途。原理：火箭免疫电泳是将单向免疫扩散和电泳相结合的技术。抗原在电场作用下，在含有适量抗体的琼脂糖凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原抗体比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀，峰形高低与抗原量呈正相关。用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原含量。主要用途：1、抗原蛋白定量；2、C3、C4及其裂解产物检测；3、AFP等检测。免疫浊度分析的影响因素有哪些？1、抗体的质量；2、抗原、抗体比例；3、反应的条件；4、增浊剂的作用；5标本的因素。沉淀反应的技术分类有哪些？1、液相沉淀反应；2、凝胶中沉淀反应；免疫浊度检测荧光免疫显微技术技术类型及方法学评价：技术类型：直接法、间接法、补体结合法、双标记法方法学评价：共同优点：定性、定位检查。直接法：操作简便、特异性高，敏感性偏低。直接法：操作简便、特异性高，敏感性偏低。间接法：敏感性较高，易出现非特异性荧光。补体结合法：可检测多种抗原或抗体，敏感性较高，易出现非特异性荧光，操作较复杂。时间分辨荧光免疫测定技术类型：固相双位点夹心法/、固相抗原竞争法、 /固相抗体竞争法/、 间接法/、 捕获法免疫复合物与游离抗原常用分离方法吸附去附游离抗原法、化学沉淀法、双抗体法、PR试剂法固相分离法。（1）IRMA与RIA的区别：IRMARIA标记物质抗体抗原标记物用量过量限量反应方式直接结合竞争性结合B、F分离方法固相抗体法等第二抗体法等酶联免疫吸附试验（ELISA）技术类型及原理和用途双抗体夹心法：Ag-Ab反应后形成固相Ab-Ag-Ab1*，加入底物后,在酶的作用下生成有色产物，其量与待检抗原的量成正比。常用于检测抗原间接法：将Ag联接到固相载体上，样品中待检Ab与之结合成Ag-Ab，加Ab1*，形成Ag-Ab-Ab1*，加底物显色,确定待检抗体含量。常用于测定抗体竞争法 ：小分子抗原或半抗原缺乏1个以上抗体结合位点，可用竞争法测定。用于测抗原或抗体捕获法：先将针对IgM的第二抗体(Ab)结合于固相载体，加入样品，样品中所有IgM被捕获。洗涤后加入特异抗原与待检IgM结合；再加入抗原特异的酶标抗体(sAb)，反应形成固相酶标抗体复合物，加入底物显色后，即可对样品中待检IgM的存在及其含量进行测定。主要用于IgM抗体测定酶免疫测定的应用：1. 病原体及其抗体测定2. 蛋白质测定3. 非肽类激素测定4. 药物和毒品测定化学发光与荧光的根本区别是什么?简述化学发光的基本原理化学发光和荧光的根本区别是形成激发态分子的激发能原理不同，荧光是发光物质吸收了激发光后使分子产生发射光，化学发光是化学反应过程中所产生的化学能使分子激发产生的发射光。化学发光反应系统中以化学反应为基础，首要条件是吸收了化学能而处于激发态的分子或原子必须能释放出光子或者能将能量转移到另一个物质的分子上并使这种分子激发，当这种分子回到基态时能释放出光子。免疫金的制备技术要点(1)胶体金溶液的pH值调整：调节至PI或偏碱。(2)蛋白质最适标记量的确定：系列稀释蛋白，加一定量胶体金，NaCl, 以红色保持不变而蛋白含量最低的一管为最适标记量。(3) 标记过程；搅拌、加一定量稳定剂（BSA/PEG）。 (4) 标记物纯化:离心法、过柱。 何谓金免疫测定技术？简述其技术类型及原理。金免疫测定技术是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应的一类免疫学测定技术，其主要技术类型有斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析实验。(1)斑点金免疫渗滤实验:在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本，免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩的作用，达到快速检测的目的，阳性反应在膜上呈红色斑点。(2)斑点金免疫层析实验：是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相组合的以硝酸纤维膜为载体的固相膜免疫分析技术，滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜某一区域的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。简述免疫金电镜染色技术的原理，技术要点和注意事项。原理：金标记物与待检标本的相应蛋白质发生结合反应,由于胶体金颗粒具有高电子密度的特性。电镜下观察，在金标蛋白结合处可见黑褐色颗粒，从而对细胞膜上或胞内蛋白质进行定性与定位。 技术要点：标本包埋：用戊二醛对标本进行固定，后行饿酸固定（固定膜结构），丙酮或乙醇逐级脱水，包埋(Epon812树脂)，超薄切片(80nm)，置300目镍网上免疫组化染色：白蛋白封闭，加一抗，孵育，PBS冲洗，卵蛋白封闭，加二抗(金标记IgG )，孵育，PBS冲洗，蒸馏水冲洗，醋酸双氧铀、枸橼酸铅负染，电镜观察。非标记抗体酶免疫组化类型：酶桥法，过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法，双桥PAP法，碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶（APAAP）法亲合组织化学技术类型：葡萄球菌蛋白A技术，凝集素组织化学技术葡萄球菌蛋白A(SPA)技术原理：结合部位是Fc段，不影响抗体的活性；结合力是双价的，可同时结合两个IgG分子；可将酶、荧光素、胶体金等标记在SPA上。SPA应用：1.免疫球蛋白的制备和分析能和IgG及其某些结合Fc段结合，可提纯、分析免疫球蛋白制剂。2.应用于免疫细胞化学结合力是双价的，可作为桥抗体或标记抗体。且不受种属特异性限制；分子量小，穿透力强。3.应用于多种细菌、支原体和病毒的简易快速诊断SPA菌体为载体，结合特异性抗体成为一种吸附原，作协同凝集素，用于细菌、病毒的定群和分型。4.可作为固相吸附剂研究免疫复合物、膜抗原、膜受体和膜Ig 凝集素组织化学技术凝集素受体是存在于细胞膜上的糖蛋白和糖脂中的寡糖，而这种受体可区别细胞的类型和反映细胞在分化、成熟和在肿瘤细胞中的作用。1 作为细胞分化成熟的标记血细胞，特别是淋巴细胞的分群2 作为细胞特殊类型的标记人视网膜 视锥细胞（PNA+）视杆细胞（PNA-）乳腺 乳腺上皮细胞（PNA+）肌上皮细胞和间质细胞（PNA-）3 在肿瘤中凝集素结合的改变 PHA胃癌诊断性标志简述T淋巴细胞转化的试验原理和镜下淋巴细胞转化形态学特征T淋巴细胞转化试验原理：T淋巴细胞在受到非特异性有丝分裂原或特异性抗原刺激后能发生增殖反应，细胞代谢旺盛，蛋白质和核酸合成增加；与此同时细胞体积增大，分裂呈母细胞样，此为淋巴细胞转化现象。因此可借助形态学方法观测淋巴细胞形态变化情况，3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定DNA合成情况，或MTT比色法测定线粒体代谢活性即可判定淋巴细胞转化程度。镜下淋巴细胞形态可以见到以下几种类型。(1)淋巴母细胞胞体比未转化淋巴细胞大34倍，呈圆形或椭圆形，胞浆染色淡蓝，可有伪足、空泡，细胞核增大，核质疏松，呈细网状，可见分裂现象。(2)过渡型淋巴细胞形态介于淋巴母细胞和正常淋巴细胞之间，体积稍大，多为1215mm，胞浆稍多，淡蓝色，核稍大，核质疏松。注意与大淋巴细胞区别，后者虽然体积较大，但核质致密，胞浆较少，嗜碱性强。(3)正常淋巴细胞与未经刺激的淋巴细胞一样，体积小，核质致密，胞浆少，嗜碱性强。简述Ficoll-hypaque分离液分离PBMC的原理、步骤和注意事项Ficoll-hypaque分离液分离PBMC的原理：血液单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。人外周血单个核细胞的密度为1.0501.077，而粒细胞和红细胞的密度在1.0801.110。利用密度为1.0770.001的Ficoll-hypaque分层液，将待分离的细胞悬液小心铺于其上，经离心后单个核细胞悬浮于分层液上层界面，而红细胞与粒细胞沉于管底，据此可将血液中的单个核细胞与其他细胞分离开。Ficoll-hypaque分离液分离PBMC的步骤：（1）取静脉血，加肝素溶液抗凝，再加入等量Hanks液，混匀。（2）取分层液置于离心管中，将稀释血液沿管壁缓缓叠加于分层液上，形成清晰界面。稀释血液与分层液的容积比例以2:13:1为宜。（3）置水平离心机中离心2000r/min 20min。（4）离心后从离心管底部到液面分为五层，依次为红细胞沉淀层、粒细胞层、分层液层、白雾状单个核细胞层、血浆层(含血小板和破碎细胞)。（5）用滴管直接吸出单个核细胞层，置于另一离心管中。（6）加入5倍量以上的Hanks液，充分混匀，离心1000r/min 10min。离心后倾弃上清液，再用Hanks液洗涤2次。（7）用含1020灭活小牛血清的Hanks液或培养液配制细胞悬液。计数，并分别计数粒细胞和单个核细胞数，同时用台盼蓝染色检测细胞活力，最后按实验要求将细胞悬液调整到适当浓度。注意事项：（1）将血液适当稀释，减低血液粘稠度有利于提高单个核细胞的收获率。（2）温度变化可直接影响分层液的密度，即影响细胞的收获率和纯度。故应在室温(1825)下进行实验，分层液使用前应预温至室温。（3）分层液应直接加入管底，防止浸沾四周管壁。（4）将细胞悬液叠加于分层液上时务必小心，不要扰乱界面以影响分离效果。（5）分离时的转速与时间应根据不同标本作相应调整。离心后若见白雾状细胞层中仍掺杂红细胞，应提高转速或延长离心时间；若淋巴细胞丢失过多，则应适当降低转速或缩短离心时间。叙述T细胞介导的细胞毒试验的原理、意义和方法分类。细胞毒T试验（CTL）在体外能特异性杀伤带有相同抗原的某些敏感传代瘤细胞株（靶细胞）。将适当的靶细胞悬液按一定比例与受检淋巴细胞混合，培养数小时后观察靶细胞的破坏情况可判断受检者的CTL杀伤能力，进而判断其细胞免疫状态。常用方法有形态学检查法和51Cr（51是Cr相对分子质量，为上标的）释放法。CTL杀伤功能测定是体外检测机体细胞免疫功能的一种常用方法。利用靶抗原与淋巴细胞的相互关系阐明靶细胞的抗原性：用于判断肿瘤患者的预后及免疫治疗效果，观察药物，肿瘤抗原以及其他对CTL杀伤功能的影响，鉴定淋巴细胞的功能性亚群等。测定吞噬细胞功能有哪些常用方法吞噬细胞功能测定从趋化，吞噬和杀菌三个方面进行检测。常用方法：趋化功能测定的有滤膜渗透法，琼脂平板法，吞噬功能测定的有吞噬试验，杀菌功能测定得有NBT还原试验，杀菌功能试验，化学发光试验等方法。简述流式细胞仪的工作原理。.流式细胞仪是一种在计算机技术支持下高度自动化的显微荧光脉冲分光光度仪，可分为三个部分：（1）细胞流动室及其液流驱动系统：细胞样品和包裹在外的鞘液在气体正压的驱动下一起流经流动室，其中的细胞一个一个排列成单行，逐个以相同的速度、相同的轨迹通过检测区，此为流式细胞仪的单细胞流技术；（2）激发光及其光束成形系统：流式细胞仪的激发光大多采用氩离子气体激光器，也可采用半导体激光器。仪器中一般都采用两块相互垂直放置的柱面透镜组成光束成形系统，对激光束进行适当的聚焦，形成截面为椭圆形的照射光斑即检测区。椭圆形光斑的检测区能保证样品中细胞是一个一个分别受到光照，并且每一受检细胞都受到一致的光照激发，此为流式细胞仪中的单细胞照明技术；（3）细胞信号检测与分析处理系统：细胞受到激发光照射时，产生散射光和荧光信号。光电倍增管及其电子线路将每一细胞的光信号转换为相应的电信号，后者再通过模数转换器( ADC )量化为数字信号，由计算机采集、分析、显示与存贮等，此为流式细胞仪的单细胞检测技术。论述流式细胞术在免疫学中的应用。（1）淋巴细胞及其亚群的测定：通过FCM检测淋巴细胞的CD分子，可鉴定淋巴细胞并计算出淋细胞各亚群的百分率；（2）淋巴细胞功能测定：通过FCM检测淋巴细胞的表面受体及各种细胞因子，可区分各种淋巴细胞，并推测其功能。FCM还可快速测定混合淋巴细胞培养、细胞介导细胞毒、细胞吞噬功能等；（3）白血病细胞免疫分型：FCM能快速、精确地分析白血病细胞系免疫表型的来源及分化阶段，用于各种血液肿瘤的原发性诊断、鉴别、分型分期、疗效观察、残存瘤细胞检测、肿瘤复发的早期发现、骨髓移植后的成功与再生检测；（4）肿瘤耐药基因分析：FCM能快速检测细胞P-gp表达，报告MDR并提示预测疗效，及时更改治疗方案；（5）AIDS病程分析：通过FCM检测Th细胞绝对计数、Th/Tc比值，可及时进行药物治疗干预和疗法评估；（6）自身免疫性疾病相关HLA分析：通过FCM检测细胞某些HLA异常表达,可用于多种生理和病理状态的研究。简述细胞分选的原理。细胞分选(cell sorting)是指从细胞群体中将选定的细胞分离出来。细胞分选时，振荡装置充电产生每秒4万次的振动频率，使喷嘴射出一连串均匀的成千上万个小液滴，流动的细胞就分散在这些小液滴中。此时，给细胞流束一个充电脉冲信号，选定细胞形成的液滴带有特定的电荷，未被选定细胞形成的液滴和不含细胞的空白液滴均不带电荷。带有电荷的液滴向下落入偏转板的高压静电场时，依据自身所带电荷正负向左或右发生偏转，落入各自的收集容器中。不带电荷的水滴则垂直下流进入中间的废液容器中。细胞因子检测的临床意义及其注意的问题细胞因子是机体内十分重要的免疫分子。在基础免疫学研究中，检测细胞因子水平用于探讨细胞因子水平与免疫细胞表型、分化、增殖以及功能的相互关系及细胞因子与某些生理病理过程的相互关系。在临床医学的研究中，当发生某些疾病时，体内细胞因子及受体表达可发生异常，这些异常与机体免疫功能异常或发生病理损伤有关。因此，检测患者细胞因子及其受体表达水平有助于对临床某些疾病的诊断、治疗和预后的判断。另一方面，细胞因子基因工程产品的问世，促进了重组细胞因子的临床应用，这也要求对患者体内相应细胞因子水平进行判断。总之，检测细胞因子及其受体具有重要的应用价值。由于细胞因子多以自分泌和旁分泌的方式发挥作用，很少进入到血液循环。因此对于蛋白水平的检测来说，检测局部体液中细胞因子较测定血清或血浆中细胞因子更具有实际意义。另一方面，由于细胞因子网络的特性，细胞因子之间是相互关联的，故单独检测一种细胞因子及其受体并不能提供更多信息，常需要多种细胞因子的联合检测。生物学测定法测定细胞因子原理及其优缺点细胞因子生物学检测法是根据某些细胞因子特定的生物学功能设计的，因此该方法是测定细胞因子生物活性水平的方法。其原理是应用一定的指示系统（如细胞）与已知活性的细胞因子标准品或待测标本相互作用，最终以指示系统的变化（如细胞增殖、死亡或分泌蛋白等）来显示细胞因子的功能，将待检标本与标准品进行比较最终得知待检标本的细胞因子水平。生物学检测方法测定的是细胞因子的生物学活性，能真实反映细胞因子在体内发生作用的情况，并且具有较高的灵敏度，不需商品化试剂盒，成本低适合基础研究工作。但是，由于不同细胞因子间的生物学作用具有重叠性，导致该方法的特异性不强。应用依赖性较强的细胞株或使用中和性单克隆抗体封闭干扰物质的作用，可提高实验方法的特异性。此外，生物学方法操作繁琐，需进行细胞培养，实验周期长，影响因素较多，重复性差。简述时间分辨荧光免疫测定法的特点？不受特异荧光的干扰。可同时用于多种因子的测定没有放射性污物的处理问题。实时荧光PCR方法的优点有哪些？扩增和产物测定同时完成，扩散及应答在测定的始终是处于闭管状态，污染的可能性小。简便快速。可同时测定大量标本。细胞粘附分子基因的多态性测定有哪些？（1）PCR-SSCP （2）PCR-RFLP （3）实时荧光PCR （4）PCR-ASO （5）PCR-SSO （6）PCR-SSP简述酶组化法的基本原理？酶标抗特异性粘附分子的 抗体与处理好的组织切片标本反应后，如组织细胞存在相应的粘附分子，则酶标抗体即可与其结合，再加入颗粒性底物显色。试述细胞表面粘附分子的测定有哪些？酶免疫组化法；荧光免疫法；流式细胞仪测定法；时间分辨荧光免疫测定法；酶免疫法。PCR-SSCP用于细胞黏附分子基因的多态性测定的主要缺点是什么？主要缺点是：测定点突变时，不能排除假阳性，测定特异性必须由DNA测序来证实；PCR的测定操作难于标准化。PCR-SSCP测定受影响因素较多，没有一个适合于各种情况下的通用实验条件，实验室必须根据自己的摸索，得出自己实验室的最适实验条件。因此，PCR-SSCP对实验操作者的经验要求较高，不好掌握，应用不是很普遍。实时荧光PCR方法用于细胞黏附分子基因的多态性测定的主要缺点是什么？优点主要是：扩增和产物测定同时完成，扩增反应管在测定的始终总是处于闭管状态，因此出现扩增产物污染的可能性小；简便快速；可同时测定大量样本。缺点是：对每种突变，需制备得到相应的荧光标记特异探针；需要特殊的实时荧光测定设备。简述细胞表面黏附分子测定的意义。组织细胞活检标本的特定细胞黏附分子测定，可作为恶性肿瘤诊断和预后的指标。LI-钙黏素是肠道特异的细胞黏附分子，胃活检组织标本的LI-钙黏素免疫组化测定可作为胃发生和肿瘤形成及分化较好的腺癌的一个重要的早期辅助诊断指标。对组织标本的E-钙黏素的免疫组化测定为阴性，可能预后不良，如E-钙黏素测定可作为已分化的甲状腺癌的一个独立的预后指标。简述可溶性黏附分子测定的临床意义。血液循环中可作为疾病辅助诊断的可溶性细胞黏附分子主要有免疫球蛋白超家族的VCAM-1和ICAM-1和选择性家族。ICAM-1在肝病、寄生虫病如阿米巴病、贾第虫病和弓形体病等、转移癌、溃疡性结肠炎等的患者血循环中浓度明显增高，其测定可作为血管内皮损伤及疾病严重程度的诊断指标。VCAM-1在肾功能损害、自身免疫病如系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎等、器官移植排斥、深静脉栓塞等的患者血循环中有明显增高。在深静脉栓塞手术后的病人血清中检测VCAM-1，可作为静脉血栓症的早期诊断指标。在器官移植的病人，在移植器官发生排斥反应前数天，即可测出病人血液中VCAM-1有明显升高，可作为器官移植后监测早期排斥发生的非侵入性指标。E、L和P三种类型的选择素均可出现于血循环中，可溶性E-选择素的增高可见于糖尿病、恶性肿瘤、自身免疫病、败血症、结节性多动脉炎和巨大细胞动脉炎等疾病患者血循环中，这种增高与疾病的活动性无关，而与器官受损伤的程度相关。因此，血液中可溶性L-选择素水平的测定可作为疾病严重程度及预后的辅助诊断指标。血液中可溶性L-选择素的增高可见于败血症、HIV感染和AIDS患者，L-选择素具有抑制白细胞对内皮细胞黏附的功能，因此，血液中可溶性L-选择素的增高可作为疾病预后的辅助诊断指标。血液中可溶性P-选择素的增高可见于溶血性尿毒症和血小板减少性紫癫患者，P-选择素可阻断TNF对b-整合素的激活，进而抑制中性粒细胞与内皮细胞的黏附。简述白细胞分化抗原检测在艾滋病诊断和治疗中有哪些意义白细胞分化抗原检测在艾滋病诊断和治疗中的意义在于：CD4分子胞膜外区第一个V样结构域是人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus , HIV）外壳蛋白gp120识别的部位，因此人类CD4+分子是HIV的主要受体。HIV感染CD4+细胞后，通过损伤细胞膜、干扰细胞代谢、形成合胞体、CTL和抗体破坏HIV感染的细胞等多种机制，选择性地使CD4+细胞数量锐减和功能降低。由于CD4+细胞是机体免疫系统中最重要的免疫调节细胞，可以产生多种重要的细胞因子，因此HIV感染后，在临床上突出的表现是获得性免疫缺陷综合征（AIDS）。检测患者外周血CD4+/CD8+比值和CD4+百分率及绝对值，对于辅助诊断和判断病情具有重要的作用。正常人CD4+/CD8+比值在1.72.0之间，外周血中CD4+为600个/ml左右。当HIV感染后CD4+/CD8+比值迅速降低甚至倒置，出现症状时细胞一般少于300个/ml，当其数目降至200个/ml以下时，则为疾病恶化的先兆。简述白细胞分化抗原及其单克隆抗体在基础免疫学方面有哪些应用？CD抗原及其相应的单克隆抗体在基础免疫学研究中，主要用于：（1）CD抗原的基因克隆，新CD抗原及新配体的发现；（2）CD抗原结构与功能关系研究；（3）CD分子参与的细胞激活途径和膜信号的传导；（4）细胞分化过程中的检测；（5）淋巴细胞群、亚群及其功能；（6）炎症发生机制；（7）细胞迁移、定位，如肿瘤细胞的转移等。简述白细胞分化抗原及其单克隆抗体在临床免疫上主要有哪些应用？.在临床免疫学中，CD抗原及其相应的单克隆抗体主要用于疾病的发病机制研究、疾病的诊断、预防和治疗。（1）检测外周血细胞或骨髓细胞表面CD抗原的检测，对各种血液病的诊断、预后判断和治疗起着重要作用；（2）在血栓与出血性疾病中的应用；（3）艾滋病诊断和治疗方面应用；（4）疾病发病机制的研究上的应用：如胰岛素依赖糖尿病、多发性硬化症、桥本甲状腺炎、Sjgren氏综合征、自身免疫性肝炎、溃疡性结肠炎、再生障碍性贫血和不育症等疾病的发病机制。简述室内质控物和室间质评物的异同室内质控物：用于检测过程的控制，其目的是监测和控制实验室常规操作的精密度。室间质评物：用于室间质量评价，目的是评价实验室常规测定的准确度，使各实验室的测定结果具有可比性。室间质评物一般是血清盘，而不是单个的血清样本。血清盘的血清数量由组织室间质评的机构来确定。室间质评物一般可适用于不同的测定方法。无论是室内质控物还是室间质评