-氨基-α-(3-三氟甲基苯基)-O,O-二(2-烷氧基乙基)亚膦酸酯对小麦赤霉病原菌的抑制活性及作用机制的初步探究.pdf

第1 8 卷第6 期 2 0 0 9 年1 2 月 激光生物学报 A C T AL A S E RB I O L O G YS I N I C A V 0 1 1 8N o 6 D e c 2 0 0 9 基础研究 N 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 0 氨基 0 t 3 g 甲基苯基 一0 O 二 2 烷氧基乙基 亚膦酸酯对小麦赤霉病原菌的抑制活性 及作用机制的初步探究 黄银久k 2 刘芳2 吴守伟1 赵莉1 1 蚌埠医学院生物科学系 安徽蚌埠2 3 3 0 3 0 2 贵州大学精细化工研究开发中心 绿色农药与生物工程 教育部重点实验宣 贵州贵阳5 5 0 0 2 5 3 药明康德 上海2 0 0 1 3 1 摘要 实验室条件下采用生长速率法测定化合物N 4 一甲基 2 氨基苯并噻唑 i 3 t 氨皋 d 一 3 三氟甲皋苯基 一 0 0 二 2 烷氧基乙基 亚膦酸酯对小麦赤霉病原菌 F u s a r i u mg r a m i n e a r u m 的离体抑制效果 并初步研究了其 抑制小麦赤霉病原菌作用机制 实验结果表明 该化合物对小麦赤霉病原菌的E c 为4 6 0 5 斗s m L 当化合物 浓度为5 0 斗g m L 时 对该病原芮的抑制率就达到了6 0 5 以浓度为2 5 0 斗g m L 的该供试化合物处理小麦 赤霉病原菌菌丝2 4h 后 其细胞膜通透性增强 菌体内还原糖 几丁糖和可溶性蛋自含量及几丁质酶活性在短 时间内均出现先升高然后下降的趋势 关键词 N 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 仅 氨基 仪 3 三氟甲基苯基 O O 一二 2 一烷氧基乙基 亚膦酸酯 小麦赤霉病原菌 抑菌活性 作用机制 中图分类号 T Q 4 6 0 1 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 7 7 1 4 6 2 0 0 9 0 6 0 7 6 5 0 6 T h eA n t i f u n g a lA c t i v i t ya n dA c t i o nM e c h a n i s mo fN 4 m e t h y l 2 a m i n o b e n z o t h i a z o l e o c a m i n o a 3 t r i f l u o r o m e t h y l p h e n y i O 0 d i 2 a l k o x y e t h y i P h o s p h i n a t et oF u s a r i u mg r a m i n e a r u m H U A N GY i n j i u L I UF a n 9 2 一 W US h o u w e i l Z H A OL i l 1 B i o s c i e n c eD e p a r t m e n to fB e n g b uM e d i c a lC o l l e g e B e n g b u2 3 3 0 0 0 A n h u i C h i n a 2 K e yL a b o r a t o r yo fG r e e nP e s t i c i d ea n dB i o e n g i n e e r i n g M i n i s t r yo fE d u c a t i o n R e s e a r c ha n dD e v e l o p m e n tC e n t r ef o r F i n eC h e m i c a l s G u i z h o uU n i v e r s i t y G u i y a n g5 5 0 0 2 5 G u i z h o u C h i n a 3 W u x iA p p T e cC o S h a n g h a i2 0 0 1 3 1 C h i n a A b s t r a c t U s i n gt h em y c e l i a t 当x o s t hr a t em e t h o di nt h el a b o r a t o r y t h ei n h i b i t o r e f f e c t sa n da c t i o nm e c h a n i s m so f c o m p o u n dN 4 m e t h y l 2 a m i n o b e n z o t h i a z o l e 俚 a m i n o O t 3 t r i f l u o r o m e t h y l p h e n y i 一O O d i 2 a l k o x y e t h y l p h o s p h i n a t et oF u s a r i u mg r a m i n e a r u mi nv i t r ow e r es t u d i e d T h eb i o a s s a yr e s u l t ss h o w e dt h a tt h ec o m p o u n dh a dh i g ha n t i f u n g a l a c t i v i t yo nt h eg r o w t ho fF u s a r i u mg r a m i n e a r u m w i t ht h ev a l u eo fE C 如4 6 0 5I L L g m L W h e nt h ec o n c e n t r a t i o no ft h e c o m p o u n dw a ga t5 0I z g m L t h ei n h i b i t i o n r a t er e a c h e d6 0 5 W h e nPg r a m i n e a r u mw a st r e a t e dw i t ht h ec o m 收稿日期 2 0 0 9 0 4 2 7 修回日期 2 0 0 9 0 9 1 0 基金项目 安徽省教育厅自然科学研究项目 2 0 0 6 K J l 2 4 C 作者简介 黄银久 1 9 7 4 一 男 讲师 硕士 从事手性药物与新作用机制研究 电话 1 5 8 5 5 7 7 9 4 8 8 电子邮箱 f l y w i t h w i n d h y j 16 3 c o m 万方数据 7 6 6激光生物学报 第1 8 卷 p o u n da t2 5 0p g m Lf o r2 4h o u m t h ep e r m e a b i l i t yo fc e l tm e m b r a n er i s e d T h em y c e l i a lr e d u c i n gs u g a r D G I c N A c c o n t e n t t h es o l u b l ep r o t e i nc o n t e n ta n dt h ec h i t i n a s ea c t i v i t ya l lr i s e da tt h eb e g i n n i n gt h e nd e c l i n e d K e yw o r d s N 4 m e t h y l 2 a m i n o b e n z o t h i a z o l e O t a m i n o a 一 3 t r i n u o l D m e t h y l p h e n y l O O d i 2 a l k o x y e t h y l p h o s p h i n a t e f u s a r i u mg r a m i n e a r u m f u n g i c i d a la c t i v i t y a c t i o nm e c h a n i s m o t 一氨基膦酸及其酯作为天然氨基酸的类似物 自2 0 世纪5 0 年代末H o r i g u c h i 从动物体内分离以 来 其合成方法和生物活性受到很多科学家的关注 1 9 9 9 年卢水明等 合成了1 6 个新的1 3 4 噻 二唑的d 一氨基膦酸酯衍生物 并对部分化合物进行 了牛物活性测定 结果表明 它们对小麦赤霉病菌 水稻纹枯病菌 棉花立枯病菌 甜菜褐班病菌 芦笋 褐斑病菌均具有一定的抑制作用 同年 A h m e t 等 2 1 向磷酯中引入1 5 个杂环基网 牛物活性测试表 明 当R l 为哌啶基团 R 为异丁基团时 对肠球菌 葡萄球菌等表现出较好的活性 2 0 0 2 年汪焱钢等 3 制备出1 2 个尚未见报道的 S c h i f f 碱 将其再与亚磷酸二乙酯加成 合成出1 2 个 新的含四唑基的O t 一氨基烃皋膦酸酯 生物测试实验 证明 含四唑环的d 氨基烃摹膦酸酯具有较好的植 物生长调节活性 尤其是一些化合物的生长素活性 特别好 当膦酸酯巾A r 为二氯代芳基或吲哚基时 其生长素活性接近常用的牛长素品种口引哚乙酸 2 0 0 3 年宋宝安等一 采用活性基团拼接法将氟原 子引入a 一氨基烷基膦酸酯中 合成了一系列含氟芳 基仅一氨基烷基膦酸酯类新化合物并进行了抑制烟草 花叶病毒 T M V 田间生物测试 结果表明 该类化 合物具有良好的抑制T M V 活性 其中4d 化合物在 5 0 0I 山g m L 浓度下对烟草花叶病毒 T M V 防效达 到了6 7 0 3 多项研究都表明O t 氨基膦酸及其酯具有抗肿瘤 活性 抗植物病毒 植物生长调节 除草 杀虫和杀菌 等苇要的生物活性L s 7 但关于仅 氨基膦酸酯类化合 物抗菌方面作用机制的研究较少 据此 本研究通过 简单而有效的方法合成出o L 氨基膦酸酯类衍生物N 一 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 a 一氨基 仅一 3 一三氟甲基苯 基 一0 0 一二 2 烷氧基乙基 亚膦酸酯 生物活性测 试结果表明该化合物对小麦赤霉病原菌具有较高的 抑菌活性 E C 为4 6 0 5p g m L 因此 本文以小麦 赤霉病原菌为研究对象 进行了毒力测试及药物处 理后菌体内相关生理指标的测定工作 旨在探讨其 抑制病原菌生长的作用机制 为新农药的创制奠定 更好的基础 1 材料与方法 1 1 材料 1 1 1 供试药剂N 一 4 一甲基 2 一氨基一苯并噻唑 I t 氨基 d 3 三氟甲基苯基 一0 0 一二 2 一烷氧基乙基 业膦酸酯 自编号2 0 0 6 1 2 2 贵州大学精细化工研 究开发中心研制 考马斯亮蓝 B 1 0 一R A D 公司 对一N N 二甲基氨基苯甲醛 D M A B 天津市科密欧 化学试剂开发中心 3 5 二硝基水杨酸 D N S 中 国医药上海化学试剂公司 三羟甲基氨基甲烷 T r i s 北京鼎国生物技术有限责任公司 小牛血 清白蛋白 B A S 北京鼎国生物技术有限公司 1 1 2 实验仪器生物洁净安全柜B H C 一1 3 0 0 I I A B 2 江苏 调温调湿培养箱3 0 2 A 型 上海 紫外分 光光度计U V 2 1 0 0 型 尤尼柯 超级水浴恒温振荡 器H Z S H 型 哈尔滨东联 高速冷冻离心机S i g m a 2 K 1 5 型 德国 电子天平S a f l o f i u sB a s i c 德国 精 密P H 计P H S 3 C 型 上海 光学显微镜O l y m p u s 日 本 1 1 3 供试菌株小麦赤霉病原菌F u s a r i u mg r a m i n e a r u m 由南开大学元素有机化学研究所馈赠 本 实验窜保存 1 2 实验方法 1 2 1 离体抑菌活性测定 采用生长速率法 8 j 沿培养3d 5d 的新鲜小麦赤霉病菌菌落边缘打取 直径为0 4c m 的菌饼 移植于含药P D A 平板中央 每处理重复3 次 置于2 5 一2 8 培养箱中培养 至对照菌丝牛长接近平皿三分之二处开始观测 十 字交叉法测量菌落直径 取平均值 计算抑制率 用 最小二乘法求出毒力回归方程及E C 抑制率公式 如下 r 一个 抑制率 七南 1 0 0 J U t c 代表对照组菌落直径大小 T 代表处理组菌 落直径大小 1 2 2 对病原菌细胞膜通透性的影响一1 将培 养数天的菌丝过滤 并用二次水清洗数遍 然后加入 到浓度为2 5 0 g m L 的药液中 另设溶剂对照 立 即测定电导率的本底值J o 然后分别于0 1 0m i n 3 0 万方数据 第6 期黄银久等 N 4 甲基 2 氡基苯并噻畦 q 氨基咀 3 三氟甲基苯基 0 二 2 畿氧基乙基 亚臃酸睹对小麦赤霉病原菌的抑制活性及作用机割的初步探究7 6 7 r a i n 6 0m i n 9 0r a i n t1 2 0m i n 1 8 0m i n 2 4 0 m i n 3 6 0 r a i n 后测定电导率 每处理三个平行 最后将三组处 理于沸水中煮沸1 5m i n 待冷却至室温 测定电导率 J s 相对电导率计算方法 某时间的相对渗透率 某时间的电导率 J 一零时间的电导率 J o 煮沸后的电导率 i s 一零时问的电导率 J o 1 0 0 1 2 3 茵体细胞内上清液的提取无菌条件下 在已培养几天的新鲜小麦赤霉病原荫菌落边缘打取 直径为0 4c m 的菌碟 按每瓶8 个菌碟接于9 0m L 查氏培养基一1 中 放人温度为 2 6 1 的调温保 湿培养箱内培养2 5d 一3 0d 后 加入药剂至终浓度 为2 5 0 斗g m L 分别于药剂处理0 5h lh 3h 6h 1 2h 2 4h 过滤收集菌丝 用蒸馏水反复冲洗后再用 滤纸充分吸千 并称重记录 一2 0 储存备用 未加 药剂处理菌丝作为对照 用时取冰冻菌丝 置于预 冷研钵中 按每克菌丝5m L 的比例加入T r i s H C l 浸 提液 0 0 5m o l L p H 7 5 和少量石英砂 在冰 浴中研磨至糊状 转入离心管中 4 1 50 0 0g 离心 3 0m i n 取f 清液 一2 0 储存备用 1 0 1 1 2 4 对病原菌还原糖含量的影响取菌体上清 液0 1m L 加入0 1m LT r i s H c l 缓冲液 混匀 再加 入2m LD N S 沸水浴5m i n 取出市即放入盛冷水的 烧杯中 冷却至室温 再加蒸馏水Im L 混匀 用 T r i s H C I 缓冲液调零 于波长5 4 0n m 下测O D 值 实 验重复3 次 同时 以葡萄糖为标样 绘制标准曲 线 将测得O D 值转换为样品中葡萄糖含量 m s m L 以葡萄糖含量 m s m L 为纵坐标 药剂处理 时间 T i m e h 为横坐标 绘制菌丝体内还原糖含量 随药剂处理时间变化曲线 1 2 5 对茵体内几丁糖含量的影响 1取菌体 上清液0 2m L 加0 2m L 硼酸钾 0 8m o L L 沸水 浴3m i n 冷却 加3m L 质量分数为1 的D M A B 3 6 保温2 0m i n 冷却 用T r i s H C I 缓冲液调零 于 波长5 4 4n m 测O D 值 实验重复3 次 同时 绘制N 乙酰葡萄糖胺标准曲线 D G I c N A c 将测得O D 值 转换为样品中D G I c N A c 含量 m g m L 以D G l c N A c 含量 m g m L 为纵坐标 药剂处理时间 T i m e h 为横坐标 绘制菌体内D G I c N A c 含量随药剂处理 时间变化曲线 1 2 6 化合物对病原茵体内可溶性蛋白的影 响 1采用考马斯亮蓝G 2 5 0 染色法 取菌体上 清液0 0 5m L 用T r i s H C I 缓冲液稀释l O 倍 再分别 取稀释液0 1m L 于1 5m L 离心管中 再加入3m L 考 马斯亮蓝G 2 5 0 溶液 摇匀 静置2r a i n 用T r i s H C l 缓冲液调零 于波长5 9 5n m 下测O D 值 实验重复三 次 用牛血清白蛋白 B S A 为标样 绘制可溶性蛋 白含量标准曲线 将测得O D 值转换为样品中可溶 性蛋白含量 m g m L 以药剂处理菌丝时间 T i m e h 为横坐标 可溶性蛋白含量 m m L 为纵 坐标 绘制菌体内可溶性蛋白含量随药剂处理时间 变化曲线 1 2 7 化合物对茵体内几丁质酶活性的影响0 1 2 0 5 胶体几丁质溶液的配制 称取几丁质粉末 8 0g 缓慢加入3 2 0m L 预冷的浓H C I 中 在磁力搅拌 器E 迅速搅拌 待几丁质粉末均匀分散后 在水浴 中轻轻搅拌并缓慢加热至3 7 混合物的黏度迅速 增加 几分钟后黏度开始下降 混合物逐渐变得清 亮 当几丁质基本上溶解时 将几丁质溶液倒入3 2 0 m L 预冷的蒸馏水中 继续搅拌 几分钟后 溶液出 现沉淀 变得浑浊 3 0m i n 后停止搅拌 将悬浮液置 于4 冰箱保存过夜 倒掉上清液 沉淀用蒸馏水洗 涤数次 反复离心 留取沉淀 继续洗涤 直至p H 接 近5 0 时 用1m o L LN a O H 滴定 使溶液显中性 将 此中性沉淀物加到2 0 0m L 的蒸馏水中 剧烈搅拌至 悬浮 即为几丁质胶体溶液 向1 5m L 离心管中加4 0 0 L 菌丝提取液 再加 入2 0 0t r L0 5 胶状几丁质 3 7 保温1h 煮沸 5m i n 灭活 对照管保温前先煮沸5r a i n 灭活 50 0 0r m i n 离心1 0m i n 取上清液4 0 0 斗L 加到1 5m L 离心管中 加入2 0 0 斗L 硼酸钾 0 8m o V L 沸水浴 3m i n 立即冷却 加3m L1 的D M A B 试剂 3 6 保温2 0m i n 立即冷却 与波长5 4 4n m 下测O D 值 通过N 乙酰葡萄糖胺含量变化标准方程 将O D 值 转换为每小时内几丁质酶水解几丁质生成的N 一乙酰 葡萄糖胺含量的变化 m g m L h 2 结果与分析 2 1 离体抑菌效果 由表1 可见 N 一 4 一甲基 2 氨基一苯并噻唑 0 氨 基 0 一 3 三氟甲基苯基 一O 0 二 2 一烷氧基乙基 亚 膦酸酯对小麦赤霉病原菌的离体抑菌活性较高 供 试化合物浓度为5 0 斗g m L 时 对小麦赤霉病原菌的 抑制率为6 0 5 0 用最小二乘法求得其毒力回归 方程为Y 0 6 7 1 x 3 8 8 4 E C 5 0 为4 6 0 5 斗r m L 实际效果见图1 万方数据 7 6 8激光生物学报第1 8 卷 表1化合物2 0 0 6 1 2 2 对小麦赤霉菌菌丝径向生长的抑制效果 T a b 1 I n h i b i t o r ye f f e c to fc o m p o u n d 2 0 0 6 12 2o nt h e r a d i a lg r o w t ho fF u s a r i u mg r a m i n e a r u m N o t e C K u n t r e a t m e n t N o t e 1 6a n dC Kw e r e3 1 2 5I L g m L 6 2 5t L g m L 1 2 5 斗g m L 2 5p g m L 5 0I 山g m L 1 0 0p s m Lt r e a t m e n ta n du n t r e a t m e n tr e s p e c t i v e l y 图l化合物2 0 0 6 1 2 2 对小麦赤霉菌的抑制效果 F i g 1I n h i b i t o r ye f f e c to fc o m p o u n d 2 0 0 612 2o nF u s a r i l g mg r a m i n e a r u m 2 2 菌体细胞膜通透性的变化 2 5 2 0 1 j j 1 0 5 0 C o n t r o l 卜 2 0 0 6 1 2 2 O1 2 0 03 4 0 0 T i m e r a i n 图2 化合物2 0 0 6 1 2 2 对小麦赤霉茵细胞膜通透性 的影响 F i g 2 T h ee f f e c to fc o m p o u n d 2 0 0 612 2o nm e m b m n ep e r m e a b i l i t yo fF g r a m i n e a r u m 由图2 可见 药剂作用于小麦赤霉菌丝体后 病原菌 细胞膜通透性增大 药剂处理3 6 0m i n 后 小麦赤霉 病菌细胞膜通透性比对照高出5 4 8 P 0 0 5 2 3 菌体内还原糖含量的变化 霎 l o 8 o 6 0 4 C o n t r o l 一2 0 0 6 1 2 2 图3茵体内还原糖含量的变化 F i g 3C h a n g e so fm y c e l i a lr e d u c i n gs u g a rc o n t e n t 由图3 可见 化合物处理小麦赤霉病原菌菌体 后 菌体内还原糖含量在前2h 先升高 2h 后开始 呈现出不断下降的趋势 处理菌丝2 4h 后还原糖含 量比对照组降低了4 2 9 P 0 0 5 2 4 茵体内几丁糖含量的变化 由图4 可见 化合物处理小麦赤霉病原菌体后 在1 8h 内菌体内N 一乙酰葡萄糖胺含量出现起伏不 定的变化 且含量高于对照 2h 后菌体内N 一乙酰葡 萄糖胺含量比对照组高3 5 3 P 0 0 5 1 8h 后 开始出现下降趋势 处理2 4h 后菌体内N 乙酰葡萄 糖胺含量比对照组低1 2 9 P 0 0 5 2 5 茵体内可容性蛋白含量的变化 由图5 可见 化合物处理小麦赤霉病原菌后 菌 体内可溶性蛋白含量在短时间内出现先升高而后降 低的趋势 在药剂处理3h 后菌体内可溶性蛋白含量 万方数据 第6 期黄银久等 N 4 甲基 2 氨摹苯并噻畦 n 囊基吨 3 三氟甲基苯基 m O 二 2 I 烷氧基乙基 亚磷酸酯对小麦赤霉病原菌的抑制活性及作用机嗣的初步探究 7 6 9 冒 蚕耄 口 8 一 0 t r D l 一2 0 0 6 1 2 2 图4 茵体内几丁糖含量的变化 F i g 4C h a n g e so fm y c e l i a lD G I c N A cc o n t e n t 比对组照高4 2 9 P 0 0 5 1 0h 后菌体内可 溶性蛋白含量的变化趋势接近对照组且一直低于对 照组 L 2 暑 L O S 鼍 昌套0 8 a 3 毒重啪 萎 0 2 C o n t r o l 一2 0 0 6 1 2 2 图5茵体内可溶性蛋白含量变化 F i g 5C h a n g e so fm y c e l i a ls o l u b l ep r o t e i nc o n t e n t 2 6 茵体内几丁质酶活性的变化 亳 呈 羁 oo p h 善耄 C o n t r o l 一2 0 1 2 2 T i m e h 图6 茵体内几丁质酶活性的变化 F i g 6C h a n g e so fm y c e l i a lc h i t i n a s ea c t i v i t y 由图6 可见 化合物处理小麦赤霉病原菌菌体 后 在开始的一段时间里菌体内几丁质酶活性比对 照组高 但在处理9h 后 菌体内几丁质酶的活性开 始降低 而对照组几丁质酶活性开始升高 处理菌 丝2 4h 后几丁质酶活性比对照组低2 6 3 5 P 0 0 5 3 讨论 早期关于a 氨基膦酸酯类化合物生物活性作用 机制的研究表明 该类化合物可以通过生物酶抑制 活性 3 j 植物生长调节剂活性 J4 超氧物歧化酶 S O D 过氧化物酶 P O D 抑制活性 细胞膜破坏效 应发挥作用 川 本研究中的Q 一氨基膦酸酯类化合物N 一 4 一甲基一 2 一氨基 苯并噻唑 q 一氨基 仅 3 一三氟甲基苯基 O 0 一二 2 一烷氧基乙基 亚膦酸酯对小麦赤霉病原菌 表现出较好的离体抑制效果 抑制中浓度为4 6 0 5 卜g m L 菌体细胞膜通透性研究表明 随着化合物作用 的延长 2 0 0 6 1 2 2 对菌丝细胞膜的破坏作用加强 表 现出时间依赖性 图2 供试化合物处理后 与对照相比 菌体内还原糖 含量表现出先急剧升高后降低的趋势 图3 说明 2 0 0 6 1 2 2 可能干扰菌体糖的吸收或代谢 导致菌体细 胞能量供应不足 从而抑制菌体细胞的生长 但究 竟是药剂通过抑制菌体对培养液中葡萄糖的吸收 还是促进糖的不断代谢转化 有待研究 与对照相比 2 0 0 6 1 2 2 处理后 菌体内几丁质酶 活性显著升高 而后降低 图6 这可能由于菌体 葡萄糖饥饿时 可引起细胞壁水解酶活性的升高 并 引起褶关细胞壁水解酶基因的表达 l 引 因此可认 为 2 0 0 6 1 2 2 处理病原菌后 菌体细胞产生糖饥饿现 象 刺激几丁质酶活性的升高 不断降解细胞壁组 分 进一步导致膜透性增加 图2 随着糖饥饿现 象的加剧 乙酰葡萄糖胺可继续脱氨生成葡萄糖 来 供给菌体对能量的需求 因此表现为菌体内测得的 乙酰葡萄糖胺含量升高而后下降的趋势 图4 化合物2 0 0 6 1 2 2 处理小麦赤霉病原菌后 初期 菌体内的可溶性蛋白含量高于对照组 而后缓慢下 降至对照水平 图5 这暗示该化合物可能在短时 间内诱导了菌体抗性相关蛋白增加 以此来抵御药 剂对菌体细胞的伤害 因此表现为可溶性蛋白含量 短时间内出现增加 随着药剂处理时间的延长 可 溶性蛋白含量开始降低 1 0h 后含量接近对照水平 之后变化不再明显 暗示干扰蛋白质生物合成可能 不是药剂发挥抑菌作用主要途径 万方数据 7 7 0 2 3 4 5 6 7 8 激光生物学报 第1 8 卷 R e f e r e n c e s J f 水明 陈茹玉 1 3 4 一噻二哗的o t 氨睡膦酸酯衍生物的 合成及其乍物活性 J 合成化学 1 9 9 9 7 3 2 7 0 2 7 4 L US h u i m i n g C H E NR u y u S y n t h e s i so faA m i n o p h o s p h o n a t e D e r i v a t i v e so fl 3 4T h i a d i a z o l ea n dT h e i rB i o l o g i c a lA c t i v i t i e s J C h i n e s eJ o u r n a lo fS y n t h e t i cC h e m i s t r y 1 9 9 9 7 3 2 7 0 2 7 4 A H M E TM S A D I Y ES H A S A NK e ta 1 S y n t h e s i so fS o m e H e t e r o e y e l i cP h o s p h o n a t e sa n dT h e i rA n t i b a c t e r i a la n dA n t i f a n g a la c t i v i t i e s J I n d i a nJC h e mB 1 9 9 9 3 8 B 2 1 9 7 2 0 0 汪焱钢 卢冰熙 叶义法 等 仅 5 I q 唑基 氨基烃基膦酸 酯的合成及其生物活性 J 有机化学 2 0 0 2 l l 2 2 8 6 2 8 6 6 W A N GY a n g a n g L UB i n g x i Y EW e n f a e ta 1 S y n t h e s i s a n dB i o l o g i c a lA c t i v i t yo fd 一 5 T e t r a z o l y l 一a m i n o a l k y lP h o s p h o n a t e s J C h i n e s eJ o u r n a lo fO r g a n i cC h e m i s t r y 2 0 0 2 ll 2 2 8 6 2 8 6 6 宋宝安 蒋木庚 吴扬兰 等 N 对三氟甲基苯基一a 一氩基烷 蘑膦酸酯的合成 晶体结构及生物活性 J 有机化学 2 0 0 3 2 3 9 9 6 7 9 7 2 S O N GB a o a n J I A N GM u g e n g W UY a n g l a n da 1 S y n t h e s i s S t r u c t u r ea n dB i o a c t i v i t yo fN 一 p T r i f u r o m e t h y l p h e n y l d a m i n o p h o s p h o n a t e s J C h i n e s eJ o u r n a lo fO r g a n i cC h e m i s t r y 2 0 0 3 2 3 9 9 6 7 9 7 2 D USC F A I G E RH B E L A K H O VV e ta 1 T o w a r d st h eD e v e l o p m e n to fN o v e lA n t i b i o t i c s S y r n t h e s i sa n dE v a l u a t i o no fa M e c h a n i s m b a s e dI n h i b i t o ro fK d o S PS y n t h a s e J B i o o r g a n M e dC h e m 1 9 9 9 7 1 2 2 6 7 1 2 6 8 2 Z O M O V AAM M O L O D Y K HZV K U D R Y A V T S E V ALA 以 a 1 A n t i m i c r o b i a lA c t i v i t yo f0 O d i e t h y iN a l k y l a m i n o m e t h y l p h o s p h o n a t e s a n d O e t h y lN a l k y l a m i n o m e t h y l p h o s p h o n i c A c i d s J P h a r mC h e mJ 1 9 8 6 2 0 1 1 7 7 4 7 7 7 J I NLH S O N GBA Z H A N GGP e ta 1 S y n t h e s h X r a y C r y s t a l l o g r a p h i cA n a l y s i s a n dA n t i t u m o rA c t i v i t yo fN 一 b e n z o t h i a z o l e 2 一y 1 l 一 f l u o r o p h e n y l 0 0 一d i a l k y l a a m i n o p h o s p h o n a r e s J B i o o r gM e dC h e mL e t t 2 0 0 6 1 6 6 1 5 3 7 1 5 4 3 黄国洋 农药试验技术与评价方法 M 北京 农业出版 社 2 0 0 0 3 0 3 1 H U A N GG u o y a n g P e s t i c i d eT e s tT e c h n o l o g ya n dE v a l u a t i o n M e t h o d M B e i j i n g A g r i c u l t u r eP u b l i s h i n gH o u s e 2 0 0 0 3 0 3 1 9 黄青春 周明国 叶钟音 拌种疋对柑桔溃疡病菌菌体细胞 活性的影响 J 南京农业大学 学撤 2 0 0 1 2 4 3 2 3 2 6 H U A N GQ i n g c h u n Z H O UG u o m i n g Y EZ h o n g y i n E f f e c to f A m i c a r t h i a z o lt ot h eC e l l o fX a n t h o m o n a sc i t r i JJ J o u r n a lo f N a n j i n gA 酣 u h u r a lU n i v e r s i t y 2 0 0 1 2 4 3 2 3 2 6 1 0 石志琦 沈寿阔 徐朗莱 等 蛇床子素对植物病原真菌抑 制机制的初步研究 J 农药学学报 2 0 0 4 6 4 2 8 3 2 S H IZ h i q i S H E NS h o u g u o X UL a n g l a i e ta 1 I n h i b i t i o n M e c h a n i s mo fO s t h o lt oP l a n tF u n g u sP a t h o g e n s J C h i n e s e J o u r n a lo fP e s t i c i d eS c i e n c e 2 0 0 4 6 4 2 8 3 2 1 1 李合生 植物生理生化实验原理和技术 M 北京 高等教 育m 版社 2 0 0 0 1 9 4 L IH e s h e n g P l a n tP h y s i l o l g i c a la n dB i o c h e m i c a lE x p e r i m e n t T h e o r ya n dT e c h n o l o g y M B e i j i n g H i g h e rE d m a t l o nP r e s s 2 0 0 0 1 9 4 1 2 冯俊丽 朱旭芬 微生物几丁质酶的分子生物学研究 J 浙江大学学报 2 0 0 4 3 0 1 1 0 2 1 0 8 F E N GJ u n l i Z H UX u f e n M o l e c u l a rB i o l o g yo fM i c r o b i a l C h i t i n a s e J J o u r n a lo fZ h e j i a n gU n i v e r s i t y 2 0 0 4 3 0 i 1 0 2 1 0 8 1 3 谭宏亮 袁均林 贺红武 膦酸酯单钠盐对丙酮酸脱氧酶活 性的影响 J 化学与生物科学 2 0 0 5 2 2 6 4 击 T A NH a n g l i a n g Y U A NJ u n l i n H EH a n g w n E f f e c t so f M e t h y l p h o s p h o n a t e M o n o s o d i u mo n P y r u v a t eD e h y d r e g e n a s e J C h e m i s t r y B i o e n g i n e e r i n g 2 0 0 5 2 2 6 4 6 1 4 刘绪峰 一 4 氯一1 萘氧基乙酰氧基 烃基膦酸酯的合成与 植调活性 J 应用化学 2 0 0 5 2 2 1 4 0 埘 L I UX u f c n g S y n t h e s i sa n dP l a n tG r o w t hR e g u l a t i o nA c t i v i t yo f 仪一 4 C h l o m l n a p h t h y l o x yA c e t o x y A l k y lP h o s p h o n a t e s J C h i n e s eJ o u r n a lo fA p p l i e dC h e m i s t r y 2 2 1 4 0 4 4 1 5 S A R A P U KJ B I E I E C K IK T R E L Az I n f l u e n c eo fS o m eN e w A m i n o p h o 叩h o n a t e so nE l e c t r i c a lP r o p e r t i e sa n dS t a b i l i t yo fP l a s m aM e m b r a n e so fP l a n tC e l l s J A c t ss B a tP a l 2 0 0 2 7 1 3 2 2 3 2 2 6 16 B R U N OGB D O N Z E L L IG I n t e r a c t i o no fA m o n i u m R e d u c i n g S u g a ra n dC h i t i nR e g u l a t e st h eE x p r e s s i o no fC e l lW a UD e g r a d i n gE n z y m e si nT r i e h o d e r m aA t r o v i r i d eS t r a i nP I J A p p lE n v i r e nM i c r o b 2 0 0 1 6 7 5 6 4 3 5 6 4 7 万方数据 N 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 氨基 3 三氟甲基苯基 N 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 氨基 3 三氟甲基苯基 O O 二 2 烷氧基乙基 亚膦酸酯对小麦赤霉病原菌的抑制活O O 二 2 烷氧基乙基 亚膦酸酯对小麦赤霉病原菌的抑制活 性及作用机制的初步探究性及作用机制的初步探究 作者 黄银久 刘芳 吴守伟 赵莉 HUANG Yin jiu LIU Fang WU Shou