丹龙醒脑片对脑血栓形成大鼠脑血管通透性及对花生四烯酸代谢的影响.pdf

77 6 C HI NE S E J OURNAL OF I NT EGR Aq I VE ME DI CI NE ON C AR DI O一 CE RE B ROVAS CUL AR DI S E AS E S e p t e mb e r 2 00 5 Vo1 3 No 9 丹龙醒脑片对脑血栓形成大鼠脑血管通透性 及对花生四烯酸代谢的影响D 刘旺华 周小青 李花 邓常青 刘建新 摘 要 目 的 探 讨 丹 龙 醒 脑 片 D L X NP 对 实验性 脑 血栓 形 成 大 鼠 保护作 用及 对花 生 四烯 酸 AA 代 谢 的影响 方法用结扎 颈外动脉 同时 颈 内动脉 注射 复合 血栓诱 导剂的方法 建立 实验性 脑血 栓形成大鼠模 型 用 伊 文思 兰法检测 脑血栓形成后伊文思 兰的渗 出量 用放 免 法 RI A 检 测 血 浆血栓 素 B 2 T I 6一酮前 列腺 素 F 1 6一K e t o P GF 1 含 量 结 果 模 型组与 空 白组 相 比 脑 组织伊 文 思 兰 吸 光 度 值 2 0 血 浆 TX B 2 6 一K e t o P GF 含 量 明显升 高 P 0 0 5或 P 0 叭 与模 型 组相 比 丹 龙 醒 脑 片 大剂 量 组 脑 组 织伊 文 思 兰 吸 光 度 值 2 1 血 浆 6一Ke t o P GF 1 含量明显 降低 P 0 0 5 丹龙 醒脑 片 中剂量组脑组织伊文思 兰吸光度值 2 l J 血 浆 Tx 6一K e t o P GF 1 含 量 亦 明 显 降 低 P 0 0 l5 或 P 0 叭 结论丹龙醒 脑 片对 血栓诱 导剂诱 导的脑血栓形成具有抑制作 用 可防止脑 血栓 形成后 血 脑脊 液屏 障通透 性的增加 关键词 丹龙 醒脑 片 脑血 栓 血 脑脊 液屏障 花生四烯酸 大鼠 Th e Effe c t s o f Da nI O n g xi n gn aO pi a n o n Cer ebr al Th r o mb o s i s an d Me t ab oI i S m O f Ar a ch i d o n i c Ac i d i n Ra t s Mo d el s Li u W a ng hu a Zh o u Xi a o qi ng Li Hu a e t al Di a gn o s i s I n s t i t u t e o f Tr a d i t i o n a l C h i n e s e Me d i c i n e Hu n a n TC M C o l l e g e C h a n g s h a 4 1 0 0 0 7 Ab s t r a c t Ob j e c t i v e To i n v e s t i g a t e r e g u l a t o r y e f f e c t s o f Da n l o n g x i n g n a o p i a n DL XNP o n me t a b o l i s m o f a r a c h i d o n i c a c i d a n d i t s p r o t e c t i o n e f f e c t s a g a i n s t c e r e b r a l t h r o mb o s i s i n r a t s Me t h o d s Th e c e r e b r a l t h r o mb o s i s mo d e l wa s p e r f o r me d b y l i g a t i o n o f t h e b r a n c h o f e x t e r n a l j u g u l a r a r t e r i a a n d i n j e c t i n g t h e c o t h r o mbos i s i n d u c e r 1 mL k g i n t o t h e i n t e r n a l c a r o t i d a r t e r i a Th e Ev e n s b l u e e x t r a v a s a t i o n i n b r a i n we r e o b s e r v e d t h e con c e n t r a ti o n s o f TXB 2 a n d 6一Ke t o P GF I i n p l a s ma we r e d e t e c t e d b y RI A Re s u l t s Co m p a r e d wi t h t he n o r ma l g r o up E v e n s b l u e e x t r a v a s a t i o n i n b r a i n and t h e con c e n t r a t i o ns o f TX B 2 and 6一K e t o P I i n p l a s ma i n c r e a s e d P 0 0 5 o r P 0 0 1 i n mode l g r o u p Co mp a r e d wi t h t h e mod e l g r o u p t h e c o n c e n t r a t i o n s o f 6一 k e t o P GF1 i n p l a s ma a n d t h e Ev e n s b l u e e x t r a v a s a t i o n o f t h e h i g h d o s e d DL XNP g r o u p d e c r e a s e d P 0 0 5 t h e c o n c e n t r a t i o n s o f TXB 2 a n d 6一k e t o P GF1 i n p l a s ma a n d t h e E v e n s b l u e e x t r a v a s a t i o n o f t h e mi d d l e d o s e DLXNP g r o u p d e c r eas e d P 0 O 1 o r P 0 0 5 C o n c l u s i o n DL XNP c o u l d p r e v e n t t h e f o rm a t i o n o f c e r e b r a l t hr o mbo s i s a n d de c r e a se t he p e rm e a b i l i t y o f c e r e b r a l v e s s e l f o l l o wi n g t h e f o r ma t i o n o f c e r e b r a l t h r o mbo s i s wh i c h ma y b e d u e t o t h a t DL XNP c o u l d i n h i b i t t h e me t a bo l i s m o f a r a c h i d o n i c a c i d Ke y wo r d s Da n l o n g x i n g n a o p i a n c e r e b r a l t h r o mbo s i s b l o o d b r a i n b a r r i e r a r a c hi d o ni c a c i d mo u se 中图分类号 R 2 8 5 6 R 7 4 3 3 2 文献标识码 A 文章编号 1 6 7 2 1 3 4 9 2 0 0 5 0 9 0 7 7 6 0 3 脑血栓形成 的发 生和发展与前列 环素类 化合物 P G s 有 着 密切的关系 花生四烯酸 a r a c h i d o n i c a c i d A A 是 P 的先质脂 肪酸 故 体内 A A代谢 的变化 将会 对脑 血栓形 成 的发生 和发 展 起重要 的作用 AA本 身及 其代 谢产 物 亦直接 或 间接 地影 响脑 血栓形成及继发性脑损伤 的发生 A A 的两种 主要代谢 产物 为 前列环素 P GI 2 和血栓素 A 2 T X A 2 两者 作用正好 相反 正常 情况下处于动态平衡 二者失衡则可促进脑血栓 和脑 水肿形成 引起 局部血流特别是微循 环灌 注下降 导致 缺血 的脑细胞 发生 一 系列代谢和功能上的改变以及脑细胞的损害和死亡 从而出 现相应 的神经 功能缺损 本 实验用 二磷 酸腺苷 凝 血酶 和 肾上 腺 素配成复合血栓诱导剂 通 过颈 内动脉 注射法 以建立脑 血栓 模 型 观察丹龙醒脑 片对 脑血栓 形成后 血脑 脊液屏 障 的保 护作 用以及对花 生四烯酸代谢的调节作用 1 材料与方法 1 1 实 验 材 料 1 1 1 实验动物清洁级 S p r a g u e D a w l e y大鼠 6 0只 雄性 体重 2 6 0 g 2 9 0 g 由中南 大学湘雅 校区动物学 部提供 合格证 号 医动字第 2 0 0 1 0号 1 1 2 实验药 品丹 龙醒脑 片 由湖南 中医学 院药学 院药剂教 研室提供 批号 2 0 0 3 0 9 1 8 肠溶性阿 司匹林 为湖南 南光药业有 限公 司产品 每 片 5 0 m g 批 号 2 0 0 3 0 7 1 7 1 1 3 主要试剂5 一二磷 酸腺苷 5 一A D P Na 2 为 F l u k a 公司产品 批 号 2 6 3 1 3 8 3 8 7 凝 血酶 Th r o mb i n 为 S i g ma公 司 产品 批 号 3 6 F 9 4 7 8 1 L一 肾上 腺 素 L Ad r e n a l i n e 为 F l u k a 公 司产 品 批 号 4 2 9 4 1 3 1 1 1 2 0 2 血栓 素 B 2 T 放 免测 试 盒 批号 2 0 0 3 1 2 1 5 6一酮 一前列腺 素 F l 6一Ke t o P GF l 放 免测试盒 批号 2 0 0 3 1 2 1 5 均 购 自苏州 大学 血栓 研究室 伊文 思兰 E v e n s b l u e 为 F l u k a 产 品 批号 8 2 1 1 0 2 其余试剂均 为市售分 析纯 1 1 4 主要仪器 一1 2 0 0 7放射免疫计数器 中国科学技 1 本课题 为湖南 省科技厅社会发展科研计划基金资助项 目 N o c o s s y l 0 1 2 1 2 维普资讯 中西医结合心脑血管病杂 志 2 0 0 5年 9月第 3卷第 9 期 7 7 7 术大学科技 实 业 总公 司 中佳光 电仪器 分 公 司生 产 D U一6 4 0 型紫外 可见 分光 光度 计 美 国 贝克曼 库 尔特公 司生产 A B 2 0 4 WO型 电子 天 平 瑞 士 梅 特 勒 一托 力 多有 限 公 司 DY 8 9 1 型 电 动玻 璃 匀 浆 机 宁 波 新 芝 科 器 研 究 所 生 产 TG L 1 6 型高速冷冻离心机 湘仪总厂离心机厂 A F I O 0型电子 制冰 机 意大利斯科茨曼公 司生产 1 2 实验方法 1 2 1 动物分组 给 药剂量 及方式先按性 别 体重分层 再随 机分 为 6组 即空 白组 模 型组 丹 龙醒脑 片大剂 量组 4 g k g 丹龙醒脑 片中剂量组 2 g k g 丹 龙醒脯 片小剂 量组 1 g k g 阿司匹林 组 0 0 3 g k g 每 组 各 1 0只大 鼠 灌 胃给 药 共 2 次 灌 胃体积为 1 0 0 g 体重 l mL 于造模 前 l 2 h 给药 1 次 之后 禁食 8 h 次 日造模 前 1 h给 药第 2次 给 药剂 量 及途径 同 前 空 白组和模 型组用 等量蒸馏水灌 胃 1 2 2 实验方法末 次给药 1 h后 进 行脑 血栓 形成 实验 实验时腹腔注射 1 0 水合氯醛 0 3 5 g k g 麻醉 分离 右颈总动 脉 左颈总动脉 左侧颈外动脉 穿线备用 先结扎左侧颈外动 脉 然后结扎左颈总动脉近心端 用大鼠动脉夹在距远心端离结 扎处约 1 c m的地方夹闭 以便再通 在左颈总动脉结扎处 与夹闭 处之间剪一小 口 以5号针头从小 口向头部方向进针注射复合 血栓诱导剂 注射时打开动脉夹使血管再通 注射完毕再夹闭 除空白组外 其余各组由左颈总动脉剪口处注入复合血栓诱导 剂 二磷 酸腺苷 1 2 5 mm o l L 凝 血酶 1 2 5 1 0 U L 肾上腺素 1 g L 1 0 0 2 0 0 5 1 0 0 g 体重 0 1 mL 空 白组 注入 等量生理 盐 水 1 0 rai n后 注入 0 2 伊 文思兰 1 0 0 g体重 0 5 mL 再 过 5 rai n后 由右颈总动脉插管采血 3 mL 加入装有 2 E D T A N a 2 0 3 mL的塑料试管 即刻混匀 于 4 保存 然后迅速断头 取 大脑备用 1 2 3 观察指标 脑 血栓程度 评价 取大脑 用 生理盐水 洗 去残血 滤纸吸干 分析天平称重后 剪成碎片 置于电动匀浆器 中 加入 0 5 N 1 5 mL及丙酮 3 5 mL 制成匀浆液 将 匀浆 液倒 入 加 盖 试 管 中 密 封 放 置 3 h 4 0 0 0 r rai n离 心 l 0 rai n 取上 清液 3 mL移入 试 管 然 后再 以 5 0 0 0 r rai n离心 l 0 mi n 取上 清液 以生理 盐水 调零 用紫外可 见分光 光度计在 6 2 0 n m处 以 1 c n 1 光径 比色 测定 吸光 度 A 值 以 吸光度 A 6 2 0 与 脑重比例表示伊文思兰的含量 以此表示呐血栓的严重程度 血浆 Tx 和 6一k e t o P GF 1 的测定 取以 血液标本 3 5 0 0 r rai n 4 离心 1 5 rai n 分离血浆 一 8 6 保 仔 以放免法测定 操作按试剂盒 说明书 1 2 4 统计学处理用 S P S S l 1 0皈统 汁软件进 行统计 数据 用均数 标 准差 i s 表示 多 组 比较 用 单向方差 分析 组 间两 两比较 方差齐时用 L S D检验 厅 蔗不 齐时用 u n n e t t S T3 检验 2 结果 2 1 丹龙醒脑片对脑血栓形成大鼠脑组织伊 义思兰吸光度 A 6 2 0 的影响 见表 1 与空白组相比 模型组 A 6 2 值明显升高 P 0 0 5或 P 0 0 1 与模型组相比 丹龙醒脑片中 大剂量 组 阿司匹林组 2 f1 值明显降低 p0 0 5 2 2 丹龙醒脑片对脑血栓形 成大 鼠 1 x 6 一K e t o 的影 响 见表 1 与空 白组相比 模型组血浆 TX l 6 一K e t o f 1 含 量明显升高 P 0 0 5或 P 0 1 与模 型组 相比 丹龙醒脑 片 中剂量组 阿司匹林组 血浆 TX 6 K e t o P G F l 含量 明显 降 低 P 0 0 1 或 P 0 0 5 丹龙醒脑片大剂越组 6 一K e t o P G F l 含 量明显降低 P 0 0 5 与阿司匹林组 比 丹龙醒脯片小 大剂 量组血浆 T 3 2 6 Ke t o P G F 1 含量和丹龙醒脑 片中剂量组 血 浆 6 一K e t o P GF 1 含量明显升 高 P 0 0 5或 P 0 0 1 表 1 丹龙醒脑片对大 鼠脑组织伊 文思兰 2 o 和血浆 Tx B 2 6一Ke t o P GF I 的影响 与空 白组 比较 1 P 0 0 5 2 P 0 01 与模型组 比较 3 P 0 0 5 4 P 0 0 0 1 与阿 司匹林组 比较 5 P 0 0 5 6 P 0 0 1 3 讨论 本实验采用颈 内动脉 注射 复合血栓诱导剂方法模拟 脑血 栓 形成病理过程 在 临床 病理过 程 中 脑血 栓是受 多种 因素作用 经多种途径而诱发形成 的 血管内皮损伤 血管 收缩 血小板 聚 集与释放 纤维蛋白凝固等参与这一过程 因此 单纯以一种致 栓剂 不能真正全面的模拟脑血栓形成 的病 理 造模手术如果 不 结扎 颈外动脉 那 么血栓诱导剂和伊文思兰 在这 里就 会分流 就 不能保证二者进入颅 内 影响造模的效果 而且这样造成 的脑血 栓模 型伊 文思兰渗入脑组织 的含 量时 多时少 实验 结果 的重 复 性较 差 因此 用二磷 酸腺 苷 凝血酶 和肾t腺素配成复合血 栓 诱导剂 通过颈内动脉注射法以建立脑血栓模型 采用这种造 模方法能更好地模拟病理过程 反映脑血栓形成时的实际情况 使模型更加完善 结果更加可靠 在脑血栓形成 中血小 板 和花 生 四烯酸 代 谢异 常起 重要 作 用 在血管损伤处血小 板和血管 内皮细胞被激 活释放出花生 四 烯酸 在环氧 化酶作用 下 生成环 内过氧化 物 然后分别 在血小 板血栓索合成酶和血管内皮细胞的前列环素合成酶作用下生成 TX A 2 和 P GI TX A 2 是作 用强 烈 的血 管 收缩 因 子 能 使脑 动 脉痉挛 血管通 透性增加 并能使血 小板迅速 聚集 促进 脑血栓 和脑水肿形成 引起局部血流特别是 微循环灌注下降 导致缺血 的脑细胞发生一 系列代 谢和功能 上的改变以及脑细胞的损害 和 死亡 P GI 是一种内源性血小板聚集的抑制剂 也是一种强烈 的血管扩张因子 P GI 从血管 内皮表面释放可阻止血小板血 栓的形成 在生理状态下 TX A 2 和 P GI 2 处于动态平衡 从而有 维普资讯 C H1 N J S E J OURN AL OF I N I E GR A一 1 I V E MEDI CI N E ON CA RDI O 一 C ER EB R OVAS C UL AR DI S EAS E S e p t e mb e r 2 0 0 5 Vo 1 3 No 9 利于血流通畅 二者失衡 则可促 进脑 血栓 形成 TX A 2和 P GI 2 的半 衰期很短 但 它们 的代谢产 物 TX B 2 6 K e t o P G F 1 比较 稳定 测 定 二 者 的 含 量 可 直 接 反 映 机 体 TX A2和 P GI 的水 平 2 J 本实验采用 复合 血栓 诱导剂 复制 实验 性脑 血栓 大 鼠模 型 造模后血 中 T 6 一K e t o P GF 1 含量 明显升 高 P 0 0 5 或 P 0 0 1 说明在复合血栓 诱 导剂 的作用下 血 小板 和血管 内皮细胞均被 激活 合成 TX A 2 和 P GI 2 增 多 丹龙醒脑 片 中剂 量组血浆 T X B 2 6 一K e t o P G F I 含量 明显低于模 型组 P 0 0 1 或 P 0 0 5 丹龙醒脑片大剂量组 6 一Ke t o P G F l 含量亦 明显低 于模型组 P 0 0 5 表明丹 龙醒 脑片 能抑制 复合 血栓 诱 导剂 导致 的 TX A2 和 P GI 2 升 高 具有抗血栓形成 的功效 本实验观察 了脑血栓 大鼠模 型脑血管 血脑 脊液屏障 的通 透性 变化 以及丹龙 醒脑片对脑血栓形成后脑血管通透性 的保护 作用 正常情况下 伊文思兰不能通过血脑脊 液屏障 只有 在病 理情况下影响了脑血管的通透性 伊文思兰才能透过血脑脊液 屏障而进入脑组织 因此 通过测定脑 组织 中伊文思兰 的含量可 以评价脑血管的通透性 从 而衡 量脑血栓 的程 度 造模 后模 型 组脑组织 2 0 值 明显升高 P 0 0 1 表 明模 型组 脑血管通 透 性增 大 丹龙醒脑 片中 大剂量组 阿司匹林组 2 0 值与模 型组 相比明显降低 P 0 0 5 表 明丹龙 醒 脑片对 脑血 栓形 成后 脑 血管通透性的升高有抑制作用 其作用可能是通过对抗脑血栓 形成而发挥的 参考文献 1 Z h o u YH S h e n J J Wa n g R G e t a 1 E f f e c t s o f c i r m a r iz i n e o n r a b b i t p l a t e l e t a g g r e g a t io n a n d e x p e r i me n t a l c e r e b r a l t h r o mtx s i s i n r a t s J A c t a P h a r maS in 1 9 8 8 2 3 5 3 3 2 3 3 4 1 2 J HU an C G C h u Z Ya n gZ E f f ect s o f b e r t e r i n e o n s y n t h e s is o f p l a t e l e t T X A2 and p l a s ma P GI 2 i n r a b b i t s J Ac t a P h a r ma c o l S in 1 9 9 1 1 2 6 5 2 6 5 2 8 作者简介 刘 旺华 1 9 7 3 一 男 毕业于湖南中医学院 医学硕 t 现 工作 于湖南中医学院中医诊断研究所 邮编 4 1 0 0 0 7 周小青 李 花 邓常青 刘建新 工 作于湖南中医学院中医诊断研究所 收稿 日期 2 0 0 5 0 5 1 6 本文编辑 郭怀印 回阳通脉法治疗心肌梗死并发休克的临床观察D 郦永平 杨书侠 程率芳 陈晓虎 宫剑滨 张启高 摘要 目的 寻 求中 医回阳通脉法与常规西 医疗 法治疗心肌梗 死并发休 克的 ll盘 床 疗效 降低病死 率 提 高存 活率 方法将 4 0例 心 肌梗死并发休克病人分 治疗组 与对照组 对 照组 采用西 医常规综合治疗 治疗组在西 医疗 法的基础上 加 用中医回阳通脉 法治疗 观 察厥 脱的症状 变化及体 温 脉 搏 尿量 血压等指标 结果 治疗组 总有效 率为 8 0 其 中治愈 率 4 5 有效 率 1 5 显效 率 2 5 无效率 病死 率 2 0 明显优 于对照组 结论 中医回阳通脉 法与西 医疗 法治疗本病 有 明显 的效果 既 能降低病人 的病死 率 提 高 存 活率 又能改善症 状与预后 关键 词 心肌梗 死 休克 回阳通脉 法 中图分 类号 R 5 4 2 2 R 2 5 6 2 文献标识 码 B 文章编号 1 6 7 2 1 3 4 9 2 0 0 5 0 9 0 7 7 8 0 3 心肌梗死并发休克是临床常见急危重症之一 病死率高 抢 高 收缩压 8 0 mmH g 1 m r a a g 0 1 3 3 k P a 或高血压病 救和治疗亦颇 为棘 手 近年来 采用 中西医结合方法救治本病 病人血压下降 超过 8 0 mr n I I g 或 收缩 压 1