纯培养下拟茎点霉分生孢子的形成及意义.pdf

菌 物 学 报 23 3 375 380 2004 Mycosystema 纯培养下拟茎点霉分生孢子的形成及意义 罗利娟 1 2 习平根1 姜子德 1 戚佩坤1 1华南农业大学植物病理学系 广州 510642 2中山出入境检验检疫局 中山 528400 摘 要 以 18 种共 23个拟茎点霉菌株为材料 比较了在 25 12h 光照 40w日光灯 d 条件下 不同培养基上甲 乙型分生孢子的形成情况 结果表明 苜蓿煎汁 Czapek 培养基能促使多数拟 茎点霉菌株形成甲 乙两型分生孢子 其形态及大小也与自然寄主上的相一致 根据纯培养获得 的形态特征对原始描述缺乙型分生孢子特征记载的 Phomopsis durionis homopsis sterculicola Phomopsis macadamii Phomopsis lucumicola 和 Phomopsis tinea 进行了补充描述 关键词 苜蓿煎汁 Czapek 培养基 甲型分生孢子 乙型分生孢子 中图分类号 Q939 96 文献标识码 A 文章编号 1672 6472 2004 03 0375 0380 拟茎点霉属 Phomopsis Sacc Bubak是腔孢纲的一个大属 能引起许多重要的植物病害 如 茄子褐纹病 芦笋茎枯病 芒果褐腐病等 尽管 Sutton 1980 指出在拟茎点霉分生孢子器内通 常形成主要呈纺锤形和钩状的甲 乙 二类分生孢子 但其甲 乙型分生孢子的产生 因环 境 采集时间及着生部位等诸种原因常不稳定 往往只见到甲型分生孢子 故给鉴定和分类带来 不少困难 鉴于真菌纯培养下的形态特征是真菌分类鉴定的重要手段 因此找到能促进子实体产 生的培养基及培养条件至关重要 且只有所形成的子实体形态特征稳定 才能在分类中具应用价 值 为进一步了解纯培养下的形态在拟茎点霉属真菌分类 鉴定上的意义 本研究完成如下工作 1 材料与方法 1 1 菌种 供试菌株均为本研究室采集 分离 见表 1 1 2 培养基 PDA 马铃薯 200g 葡萄糖 20g 琼脂 17 20g 加水到 1000ml OMA 燕麦片 30g 琼脂 17 20g 加水到 1000ml Czapek 方中达 1998 苜蓿杆 OMA 苜蓿杆 WA 苜蓿煎汁 Czapek 罗利娟等 2004 1 3 菌株的培养 将拟茎点霉菌株接于上述培养基 置于 25 12h 光照 40w 日光灯 d 条件下培养 每两 天检查一次载孢体及分生孢子的形成情况 罗利娟等 2004 1 4 载孢体玻片的制作及镜检 自培养基上挑出载孢体 使用冰冻切片机 AS620CRYO TOME SHANDON 进行切片 乳 基金项目 国家自然科学基金项目 39870001 39899400 和高等学校骨干教师资助计划项目的部分内容 通讯作者 E mail zdjiang 收原稿日期 2003 06 01 收修改稿日期 2003 12 01 376 菌 物 学 报 23 卷 酚油为浮载剂 OLYMPUS CX40 型显微镜下观察和测量甲 乙型分生孢子 表 1 实验菌株及其来源 Table 1 Source of tested isolates of Phomopsis 序号 No 种名 Species 寄主植物 部位 Host plant part 来源 Source 1 Phomopsis cassiae de Camara Twig of Cassia fistula L Guangzhou Guangdong 2 P cassifolia Z D Jiang et P K Chi Leaf of Cassia fistula L Guangzhou Guangdong 3 P bombacis Z D Jiang et P K Chi Twig of Bombax malabaricum DC Guangzhou Guangdong 4 P durionis Syd Leaf of Bombax malabaricum DC Guangzhou Guangdong 5 P myricae Y J Huang et P K Chi Twig of Myrica rubra Lour Sieb et Zucc Fengshun Guangdong 6 P myricina Y J Huang et P K Chi Leaf of Myrica rubra Lour Sieb et Zucc Guangzhou Guangdong 7 P euphorbiae Sacc Traverso Twig of Euphorbia pulcherrima Willd Guangzhou Guangdong 8 P euphorbiae Sacc Traverso Leaf of Euphorbia pulcherrima Willd Guangzhou Guangdong 9 P vexans Sacc et Syd Harter Fruit of Solanum melongena L Guangzhou Guangdong 10 P vexans Sacc et Syd Harter Stem of Solanum melongena L Guangzhou Guangdong 11 P vexans sacc et Syd Harter Leaf of Solanum melongena L Guangzhou Guangdong 12 P mangiferae Ahmad Fruit of Mangifera indica L Guangzhou Guangdong 13 P mangiferae Ahmad Twig of Mangifera indica L Guangzhou Guangdong 14 P mangiferae Ahmad Leaf of Mangifera indica L Guangzhou Guangdong 15 P cytosporella Penz et Sacc Twig of Citrus grandis L Osbeck Sihui Guangdong 16 P destructum Rao Agrawal et Saks ena Fruit of Psidium guajava L Guangzhou Guangdong 17 P psidii de Camara Leaf of Psidium guajava L Guangzhou Guangdong 18 P asparagus Sacc Bubak Stem of Asparagus officinalis L Fogang Guangdong 19 P sterculicola Z D Jiang et P K Chi Leaf of Sterculia lychnocarpa Hance Guangzhou Guangdong 20 P macadamiae Z D Jiang et P K Chi Leaf of Macadamia ternifolia F Muell Guangzhou Guangdong 21 P lucumicola Z D Jiang et P K Chi Leaf of Lucuma nervosa A DC Guangzhou Guangdong 22 P tinea Sacc Died Twig of Viburnum odoratissimum Ker Guangzhou Guangdong 23 P dysoxyli Sacc Petrak Leaf of Khaya senegalensis Desr A Juss Guangzhou Guangdong 2 结果与分析 2 1 不同培养基上甲 乙型分生孢子的形成情况 相同的培养条件下 不同的培养基上拟茎点霉产生的分生孢子类型不同 在苜蓿杆 WA 苜 蓿杆 OMA 上 几乎所有菌株都只产生甲型孢子 在 Czapek 培养基上 大多数菌株产生乙型孢 子 在 PDA 培养基上 只产生甲型孢子或不能形成载孢体 在苜蓿煎汁培养基上 也只有少数几 个菌株形成甲 乙型分生孢子 而在 OMA培养基和苜蓿杆煎汁 Czapek 上 多数菌株可产生甲 乙型分生孢子 尤以后者为佳 只有 4 个菌株不产生乙型分生孢子 见表 2 2 2 OMA 和苜蓿煎汁 Czapek 培养基上孢子形成情况的进一步比较 在 OMA 和苜蓿煎汁 Czapek 培养基上 8 个菌株均产生 两类孢子 但孢子形成所需的 时间有异 在苜蓿煎汁 Czapek 培养基上 一般 6 7 d 载孢体开始形成 16 18 d 后挑取载孢体压 3 期 罗利娟等 纯培养下拟茎点霉分生孢子的形成及意义 377 片便可见到 两类孢子 而在 OMA 培养基上 载孢体虽 6 7 d 开始形成 但 16 d 左右一般 只能检查 孢子 到 25 d 左右才可见到 孢子 见表 3 2 3 苜蓿煎汁 Czapek 培养基上与自然寄主上的分生孢子形态及大小比较 6 个菌株在自然寄主上和苜蓿煎汁 Czapek 培养基上产生的分生孢子形态和大小比较结果显 示 相同菌株在自然寄主植物上产生的分生孢子与苜蓿煎汁 Czapek 培养产生的形态与大小基本 一致 可能与纯培养下营养和环境条件一致有关 培养条件下产生的分生孢子的形态大小较均一 2 4 关于 5 种拟茎点霉的补充描述 菌株 4 19 20 21 和 22 在寄主植物上的原始描述为 乙型分生孢子缺 Uecker 1988 戚佩坤 2000 但在苜蓿煎汁 Czapek 培养基上可产生乙型分生孢子 故需对该 5 种的形态描述 进行修正 表 2 供试菌株于不同培养基上形成甲 乙 型孢子情况 Table 2 The status of conidium formation of tested isolates on different media 菌株号 Isolate No 寄主植物 Host plant OMA Czapek PDA 苜蓿煎汁 Alfalfa extract 苜蓿杆 OA Alfalfa stem OA 苜蓿杆 WA Alfalfa stem WA 苜蓿煎汁 Czapek Alfalfa extract Czapek 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 表示不产生载孢体 No conidiomata produced 378 菌 物 学 报 23 卷 表 3 8 个菌株在 OMA和苜蓿煎汁 Czapek 培养基上形成 孢子数量及所需时间的比较 Table 3 Comparisons of amount and time of conidium formation among 8 isolates of Phomopsis on OMA and alfalfa extract Czapek OMA 形成时间 d Formation time d 苜蓿煎汁 Czapek Alfalfa extract Czapek 形成时间 d Formation time d 菌株号 Isolate No 载孢体 Conidomata 两类孢子 conidia 载孢体 Conidomata 两类孢子 conidia 3 6 7 25 7 8 20 4 8 9 20 9 10 18 10 9 10 25 9 10 18 12 5 6 20 6 7 16 13 5 6 20 6 7 16 15 5 6 20 6 7 16 16 6 7 25 9 10 18 17 6 7 25 7 8 18 18 6 7 25 7 8 20 代表孢子数目的相对多少 Relative amount of conidia 表 4 6 个拟茎点霉菌株在自然寄主和苜蓿煎汁 Czapek 培养基上形成 孢子形态和大小的比较 Table 4 Comparisons of shape and size of conidia among 6 isolates of Phomopsis on natural host and alfalfa extract Czapek 自然寄主 Natural host 苜蓿煎汁 Czapek Alfalfa extract Czapek 菌株 Isolate 1 纺锤形 fusiform 5 8 9 2 2 0 3 0 直或弯 straight or curve 19 30 0 6 1 0 纺锤形 fusiform 6 0 7 3 1 8 2 0 直或弯 straight or curve 17 23 0 7 1 0 3 纺锤形 fusiform 5 0 8 2 1 8 2 1 钩状 hook like 19 24 0 6 0 8 纺锤形 fusiform 5 5 7 0 1 7 2 0 钩状 hook like 17 22 0 8 1 2 7 椭圆形 ellipsoid 5 5 7 2 2 0 2 5 直或弯 straight or curve 15 20 0 7 1 1 椭圆形 ellipsoid 5 8 7 2 2 0 2 2 直或弯 straight or curve 16 22 0 7 1 2 10 纺锤形 fusiform 5 2 8 0 1 8 2 2 直或弯 straight or curve 13 28 1 5 2 0 纺锤形 fusiform 7 0 7 8 2 0 2 3 直或弯 straight or curve 17 21 0 8 1 2 15 椭圆形 ellipsoid 6 0 10 3 0 4 0 直或弯 straight or curve 18 49 1 0 2 5 椭圆形 ellipsoid 4 9 6 8 1 8 2 0 直或弯 straight or curve 20 26 1 0 1 5 17 纺锤形 fusiform 4 8 6 2 1 3 2 0 直或弯 straight or curve 15 22 0 6 1 0 纺锤形 fusiform 5 0 6 8 1 5 2 0 直或弯 straight or curve 15 23 0 7 1 0 2 4 1 榴莲拟茎点霉 Phomopsis durionis Hyd 寄主组织上载孢体球形或近球形 109 166 64 135 m 分生孢子梗较粗 分隔 分枝或不分枝 10 15 2 2 3 5 m 甲型分生孢子单胞无色 宽纺锤形 多顶端尖 基部钝圆 具 2 个大而明显的油球 6 9 1 7 2 3 m 蓿煎汁 Czapek 培养基上 乙型分生孢子钩状 13 21 0 7 1 0 m 3 期 罗利娟等 纯培养下拟茎点霉分生孢子的形成及意义 379 2 4 2 萍婆生拟茎点霉 Phomopsis sterculicola Z D Jiang et P K Chi 自然寄主上载孢体真子座型 叶两面生 扁球形或近球形 134 190 105 151 m 分生孢子梗无色 圆柱形 具隔 直立 简单或有时分枝 8 18 1 5 2 3 m 甲型分生孢子单胞 无色 纺锤形 具 0 2 个小油球 5 7 6 1 5 2 0 m 苜蓿煎汁 Czapek 培养基上 乙型分生孢子单胞无色 线形 顶端钩状 19 29 1 0 1 3 m 2 4 3 澳洲坚果拟茎点霉 Phomopsis macadamiae Z D Jiang et P K Chi 自然寄主上载孢体真子座 型 叶两面生 埋生 成熟后外露 三角形至扁球形 150 210 78 160 m 分生孢子梗无色 侧向分枝 少数不分枝 15 23 1 8 2 1 m 甲型分生孢子无色 单胞 纺锤形 往往顶端尖 基部钝圆 6 5 8 3 1 4 2 0 m 苜蓿煎汁 Czapek 培养基上 乙型分生孢子单胞 无色 线形 直或稍弯 15 23 0 8 1 1 m 2 4 4 蛋黄果生拟茎点霉 Phomopsis lucumicola Z D Jiang et P K Chi 自然寄主上载孢体真子座 型 叶两面生 三角形或扁球状 167 208 100 146 m 分生孢子梗无色 圆柱状 分隔 分 枝或不分枝 10 15 1 7 2 1 m 甲型分生孢子无色 纺锤形 无油球 5 7 5 1 4 1 8 m 苜蓿煎汁 Czapek 培养基上 乙型分生孢子单胞 无色 线形 有的顶端呈钩状 19 26 0 8 1 1 m 2 4 5 荚迷拟茎点霉 Phomopsis tinea Sacc Died 菌株 21 自然寄主上载孢体真子座型 块状或 三角形 单腔 双腔 不规则腔或旋转腔 425 660 240 370 m 分生孢子梗无色 分隔 伞 状分枝 13 16 1 6 2 3 m 甲型分生孢子无色 单胞 纺锤形 顶端尖 基部钝圆 有的中 部稍凹陷 含 2 个油球 5 8 3 1 7 2 1 m 苜蓿煎汁 Czapek 培养基上 乙型分生孢子单胞无 色 线形 直 13 17 1 0 1 3 m 3 结论与讨论 苜蓿杆煎汁 Czapek 是适合拟茎点霉真菌产生甲乙两型分生孢子的培养基 在腔孢纲真菌的 培养研究中多采用 OMA 和 PDA Punithalingam 1969 Boerema 1976 Sutton 1980 本研究 结果也表明 OMA 不失为拟茎点霉真菌产生甲乙两型分生孢子的一种较好培养基 但与苜蓿杆煎 汁 Czapek 相比 后者不但可诱导更多的拟茎点霉菌株产生甲 乙两型分生孢子 而且需要的培 养时间也短 苜蓿杆煎汁 Czapek 培养基能诱导拟茎点霉产生甲 乙两型分生孢子可能与该培养 基含的营养和微量元素均较全面有关 本研究中菌株 2 5 18 和 23 在培养条件下不产生乙型分 生孢子 可能是其本身已失去了产生乙型分生孢子的能力 或者与菌株的多代培养 保存时间 转管次数等有关 这些都有待于今后进一步研究 乙型孢子的性状理应作为拟茎点霉属真菌分类鉴定的重要依据 比较形态学是真菌分类 鉴 定的基础 拟茎点霉也毫不例外 该属真菌种类繁多 只有进行多个性状的综合比较才可能更客 观地反映种间的亲缘关系 拟茎点霉种的形态描述 也通常将自然寄主上乙型分生孢子的有无作 为一项重要内容 Uecker 1988 本研究结果表明 拟茎点霉种能否产生乙型分生孢子 不能单 凭寄主上的情况 鉴于纯培养下产生的分生孢子与自然寄主