野菊花中绿原酸提取工艺的研究.doc

野菊花中绿原酸提取工艺的研究日期：2008-12-11来源：肇庆学院，广东 肇庆 526061 作者：刘艳清，汪洪武 字体：大 中 小 【摘要】 目的优选野菊花中绿原酸的提取工艺。方法设计正交实验，以绿原酸含量为考察指标对提取工艺进行优化。结果水浴提取法最优工艺为：液固比为12：1的70%乙醇于80水浴提取40 min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到0.35%。超声的最佳提取条件为：液固比为15：1的60%乙醇预浸渍40 min，超声提取45 min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到0.36%。超声法优于水浴法。结论以该工艺提取绿原酸，保证了较高的绿原酸质量分数，优化了野菊花中绿原酸的提取工艺。 【关键词】 野菊花；绿原酸；正交实验；分光光度法；提取工艺Studies on the Optimum Extraction Technology of Chlorogenic Acid from Flos Chrysanthemi Indici with Orthogonal DesignLIU Yanqing, WANG Hongwu（Department of Chemistry, Zhaoqing University, Zhaoqing 526061，China）Abstract：ObjectiveTo obtain optimum extraction technology of chlorogenic acid from Flos Chrysanthemi Indici.MethodsThe extraction processes for chlorogenic acid from Flos Chrysanthemi Indici. with water bath extraction and ultrasonic wave were investigated using the content of chlorogenic acid as index. The optimal extraction conditions were determined with orthogonal design. ResultsFor water bath extraction, F. Chrysanthemi Indici was extracted with 12 times the mass of 70% ethanol and refluxed at 80 for 40 min. The content of flavonoids was 0.35%. For ultrasonic wave extraction, F. Chrysanthemi Indici was extracted with 15 times the mass of 60% ethanol perimpregnating for 40 min and extracted for 45 min. The content of flavonoids was 0.35 %. ConclusionThe processing method is feasible.Key words：F. Chrysanthemi Indici.; Chlorogenic acid; Orthogonal design; Spectrophotometry; Extracting technology 野菊花（Flos Chrysanthemi Indici）又名野黄菊、苦薏，为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序。其性味苦辛，微寒，归肝、心经。具有清热解毒之功能。常用于疔疮痈肿，目赤肿痛，头痛眩晕等病症1。绿原酸是野菊花中的主要活性成分之一。据报道，绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗脂质过氧化等多种药理活性，并具有显著增强胃肠蠕动和促进胃液分泌的药理作用2。鉴于绿原酸具有多种生理活性，对野菊花绿原酸的研究具有重要意义。 为了有效提取绿原酸，探索从野菊花中提取绿原酸的最优化工艺条件，笔者采用正交实验分别考察了水浴提取和超声波辅助提取两种提取方法对野菊花中绿原酸提取工艺进行正交优化，以期找到最佳的制备工艺。1 仪器与材料1.1 仪器UV/VIS 916型分光光度计(澳大利亚GBC)，ZK-82A型真空干燥箱(上海实验仪器总厂)，FZ102型微型植物试样粉碎机(河北省黄骅市振兴机电仪器厂)，SX8200H型台式超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，HH-S2系列恒温水浴锅(江苏省金坛市环宇科学仪器厂)。1.2 材料绿原酸标准品购自中国药品生物制定检定所，野菊花购自邦健药房（50 下烘干3 h，粉碎后备用），其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备准确称取绿原酸对照品5.2 mg置于250ml量瓶中，用70 %的乙醇溶液溶解，定容即得。2.2 测定波长的选择取对照品溶液1 ml，置于10 ml量瓶中，用70 %的乙醇定容。以70 %乙醇溶液为参比液，于紫外分光光度计上在200400 nm范围内进行扫描最大吸收波长，结果在329.6 nm处有最大吸收峰，由此选择329.6 nm作为测定波长。2.3 方法学考察2.3.1 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 ml于10只10 ml量瓶，以70%乙醇定容。于紫外分光光度计上在=329.6 nm处测定其吸光度。以吸光度A为纵坐标，绿原酸浓度C为横坐标，绘制标准曲线。经线性回归得回归方程为：A51.133C0.005 8，r =0.999 7，结果显示绿原酸在0.4164.576 gL-1范围内具有良好的线性关系。2.3.2 精密度实验精确称取野菊花约1 g，加入10 ml在70水浴提取60 min，准确吸取提取液1 ml，置于10 ml量瓶中，以70%乙醇定容。以70%乙醇作空白，测定其吸光度。连续测定6次，RSD=0.72 %，表明仪器精密度较好。2.3.3 稳定性实验准确吸取“2.3.2”项所得提取液1 ml，置于10 ml量瓶中，以70%乙醇定容。以70%乙醇作空白，分别于0，10，20，30，40，50 min测定其吸光度，连续测定6次，RSD=0.38%，表明提取液在1 h内较稳定。2.3.4 重复性实验精密称取野菊花粉末约1 g，按“2.3.2”项法平行制备3份提取液，按“2.3.2”项方法实验，RSD=0.25%，说明方法重复性较好。2.3.5 加样回收率实验 向已知含量的野菊花中加入不同量的绿原酸对照品进行实验，用紫外分光光度计测定其吸光度，得出绿原酸含量。平均回收率为100.89 %，RSD为1.45 %，表明方法回收率较好。2.4 正交实验设计3，42.4.1 水浴提取法在粒度、提取工艺相同的条件下，考察水浴温度、乙醇浓度、液固比、提取时间等因素，选用L9(34)正交表安排实验。见表1。表1 水浴提取因素水平（略）2.4.2 超声波提取法在粒度、提取工艺相同条件下，考察浸渍时间、乙醇浓度、液固比、超声时间等因素，选用L9(34)正交表安排实验。见表2。表2 超声波法因素水平（略）2.5 野菊花的测定5精密称取野菊花约1 g，置于100 ml圆底烧瓶中，按“2.4”项进行正交实验，提取液抽滤，滤液定量转移至100 ml量瓶中，70%乙醇定容。精密吸取滤液1 ml于10 ml量瓶中，按标准曲线制备方法测定其吸光度，由标准吸收曲线计算出绿原酸含量。结果见表3。表3 正交实验方案及结果分析（略）2.6 方差分析由表3可知，水浴提取法的最佳提取条件为：A3B2C2D1，即液固比为121的70%乙醇于80水浴提取40 min。在此条件下，绿原酸含量达到0.35%。从极差分析知各因素对绿原酸提取的影响大小顺序分别是提取温度液固比乙醇浓度提取时间。 超声提取法的最佳提取条件为：A2B2C2D3，即液固比为151的60%乙醇预浸渍40 min，超声提取45 min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到0.36%。从极差分析知各因素对绿原酸提取的影响大小顺序分别是乙醇浓度浸渍时间超声时间液固比。3 结论 通过正交实验，确定了水浴提取法的最佳提取条件为：液固比为121的70%乙醇于80水浴提取40 min。在此条件下，绿原酸含量达到0.35%。超声提取法的最佳提取条件为：液固比为151的60%乙醇预浸渍40 min，超声提取45 min。在此条件下，绿原酸的质量分数达到0.36%。 水浴法与超声法中，影响绿原酸的提取的主要因素基本相同，所不同的是超声条件下提取效果优于水浴。其原因可为：超声的空化作用对细胞膜的破坏有助于绿原酸的释放与溶出；超声波使浸提剂和提取物不断振荡，有助于溶质的扩散；超声的热效应使水介质温度基本维持在60，对样品有水浴的效果。【参考文献】 1国家药典委员会.中国药典,部S.