缓冲液配制.doc

Tris缓冲液（TBS和THB）的配制（一）TBS的配制0.05 M TBS ( pH7.4 ) 的配制： Tris ( 三羟甲基胺基甲烷 ) 12.1g NaCl 17.5g 加蒸馏水 1500ml 磁性搅拌下滴加浓HCl至pH为7.4，再加蒸馏水至2000ml，即可。 如需含1%Triton X-100，则在滴加HCl前先加入20ml Triton X-100。（二）THB的配制 A液 ( 0.2 M Tris )：( MW 121.14 ) 称取2.428克 Tris，溶于100毫升蒸馏水中。 B液 ( 0.1 N HCl)： 取37% HCl ( 比重1:19 ) 0.84毫升，加入蒸馏水中，使成100毫升。 不同pH ( 7.19 9.10 ) 的0.05 M THB配制：按下表，取A液25ml加B液Xml，补加蒸馏水至100ml。B=XpHB=XpH 45.07.1925.08.1442.57.3622.58.2341.47.4020.08.3240.07.5417.58.4138.47.6015.08.5137.57.6612.58.6235.07.7710.08.7432.57.877.58.9230.07.965.09.1027.58.05免疫组织化学中，常用pH7.6的THB。 磷酸盐缓冲液（PB）的配制（1）A液（0.2M磷酸二氢钠水溶液）： NaH2PO4H2O 27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。（2）B液（0.2M磷酸氢二钠水溶液）： Na2HPO47H2O 53.6g (或Na2HPO412 H2O 71.6g或Na2HPO42 H2O 35.6g ) 加蒸馏水溶解，加水至1000ml。（3）不同pH值磷酸盐缓冲液（PB）缓冲液的配制 A液X ml (参照下表) 中，加入B液Y ml，为0.2M PB。若再加蒸馏水至200ml则成0.1M PB。PHX mlY mlpHX mlY ml5.793.56.56.945.055.05.892.08.07.039.061.05.990.010.07.133.067.06.087.712.37.228.072.06.185.015.07.323.077.06.281.518.57.419.081.06.377.522.57.516.084.06.473.526.57.613.087.06.568.531.57.710.090.06.662.537.57.88.591.56.756.543.57.97.093.06.851.049.08.05.394.7 若先分别配成0.1M，1/15M 和1/200 M的A液和B液，可按下表配成相应浓度所需pH值的PBKH2PO4或NaH2 PO4H2O (ml )Na2HPO4 (ml )pH ( M/10 )pH( M/15 )pH( M/200 )4645.675.745.944555.785.836.064465.865.916.144375.945.996.224286.026.076.304196.086.146.3640106.126.196.4239116.176.246.4738126.236.286.5737136.286.326.6136146.336.376.6535156.396.416.6834166.416.456.7233176.456.496.7532186.496.536.7931196.536.566.8230206.556.596.8829216.586.636.9128226.616.686.9527236.656.727.0026246.706.767.0525256.766.817.0924266.816.867.1323276.846.917.1622286.896.947.1821296.896.967.2020306.916.987.2219316.947.017.2518326.977.037.2617337.007.057.3116347.027.077.3415357.067.117.3814367.107.157.4113377.147.207.4512387.177.247.4511397.247.287.5110407.307.337.599417.367.407.658427.427.497.707437.497.547.756447.577.617.805457.657.697.873477.817.858.052487.927.978.15常用储存液的配制溶液配制方法注释PBS将8.0g NaCl、0.2gKCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，将pH调整至7.4，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温保存可配成10x储存液TBS将8.0g NaCl、0.2g KCl、3gTris，溶解于800ml蒸馏水中，用1mol/LHCl将pH调整至8.0，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温保存10% NaN3将10g NaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存活体实验或在辣根过氧化物酶反应中不可使用NaN33% BSA/PBS100ml PBS中加入3g BSA（组分V）使溶解，再加入0.2ml10% NaN31mol/L Tris将121gTris 溶解于800ml蒸馏水中，用浓HCl调整至所需pH，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温保存500mmol/L EDTA将186g EDTA.Na2.2H20溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将pH调整至8.0，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存100%（W/V）三氯醋酸（TCA）将227ml蒸馏水加到含500g TCA的瓶中1.5mol/L Tris（pH8.8）将181.5gTris 溶解于800ml蒸馏水中，用浓HCl调整至pH至8.8，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温保存1mol/L Tris（pH6.8）将12.1gTris 溶解于80ml蒸馏水中，用浓HCl调整至pH至6.8，补充蒸馏水至100ml，分装，高压灭菌，室温保存 10% SDS将10g SDS溶解于100ml蒸馏水中，室温保存10%过硫酸铵（APS）将0.5g SDS溶解于5ml蒸馏水中，4保存每周配制新鲜溶液4%多聚甲醛在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛（EM级）溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60加热（打开瓶盖）使其溶解，冷却至室温，调整pH为7.4使用前新鲜配制NP-40裂解液配制1L需30ml 5mol/L NaCl、1