芦荟组织培养.doc

实验十、芦荟的组织培养（自选实验）前言：芦荟属（学名：Aloe）通称芦荟，原产于地中海、非洲，为独尾草科多年生草本植物，据考证的野生芦荟品种300多种，主要分布于非洲等地。这种植物颇受大众喜爱，主要因其易于栽种，为花叶兼备的观赏植物。因此芦荟具有积极重要的经济价值。摘要：本实验以芦荟的芽为外植体进行组织培养，通过不定芽萌发途径再生植株。诱导培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；(4)继代培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L；关键词：芦荟茎段 外植体 诱导 培养1、实验目的芦荟的常规繁殖同许多植物一样有有性繁殖和无性繁殖两种。由于芦荟雌雄花开放时间不一致，授粉不亲和，故而结实少，并且种子细小，再加上芦荟有些品种只开花不结果，因而有性繁殖速度慢,因而无法满足芦荟种植业发展和开发芦荟资源对种苗的要求。芦荟的组织培养不仅可在短期内繁殖大量规格一致、种性稳定的芦荟种苗，还具有可以保持芦荟资源的永续利用。2、材料和步骤:2.1材料1、芦荟幼嫩茎段2、诱导培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶3、继代培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶4、生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶5、PH： 5.8-62.2步骤2.2.1外植体消毒方法用自来水冲洗芦荟茎段表面的泥土，用干净的手将幼嫩芦荟苗的叶片大部分摘除，只留下约1cm左右的叶段。将芦荟茎段切成1cm长，用70%酒精消毒15-30 s，用灭菌水冲洗1次后，放入 0.15%升汞消毒约10min，灭菌水冲洗3-4次，滤干水分，准备接种。2.2.2诱导培养将芦荟茎段放到无菌工作台的无菌纸上，用消毒刀剥去几层外裹的叶片，然后切成两半，按生长极性方向植入诱导培养基。每瓶诱导分化培养基接种1小块，共接7瓶。每周观察记录一次。2.2.3培养条件：在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次 。3、实验结果与分析：3.1对芦荟茎段进行诱导时，污染率14.3%，诱导率为100%。说明本实验中用的诱导培养基适宜，消毒时间合适。此法可以对芦荟进行大规模的生产提供参照。芦荟茎段诱导培养结果统计表接种瓶数诱导数污染数诱导率污染率771100%14.3%3.2由于自选材料时间有限，没有进行继代培养和生根培养。3.3结果图片： 4、注意事项1、配制培养基时，要严格精确地称取各种化学试剂。2、实验时一定要注意无菌操作，万不可引入杂菌污染培养基。3、观察记录时，要注意拿组培瓶的方式，手要握住组培瓶的下方而不要握住组培瓶的盖子。4、观察记录时要仔细，认真描述并做好记录。细胞工程自选试验开题报告：芦荟组织培养一、基本背景芦荟属（学名：Aloe）通称芦荟，原产于地中海、非洲，为独尾草科多年生草本植物，据考证的野生芦荟品种300多种，主要分布于非洲等地。这种植物颇受大众喜爱，主要因其易于栽种，为花叶兼备的观赏植物。芦荟是百合科芦荟属多年生常绿多肉质草本植物。据科学研究，发现芦荟中有不少成分对人体皮肤有良好的营养滋润作用，且刺激性少，用后舒适，对皮肤粗糙、面部皱纹、疤痕、雀斑、痤疮等均有一定疗效。此外芦荟对轻度的撞伤、挫伤、香港脚、冻伤、皮肤龟裂、疣子等都有一定的疗效。根据现代研究显示，其叶含芦荟大黄素、异芦荟大黄素及芦荟苦味素等，药理实验有泻下、抗癌作用。芦荟花性寒，味苦涩，有清热、止咳、止血功效，可治疗咳嗽、吐血。而且芦荟还有极高的营养价值，食用芦荟的发展把对芦荟的研究带入了一个新的研究阶段，尤其是对芦荟组织培养技术发展有了极大地推动作用。二、实验设备和药品1、 所需设备高压灭菌锅、超净工作台、培养瓶、称量仪器、移液管、锥形瓶、量筒、镊子、解剖刀、支架、酒精灯、牛皮纸、牛皮袋2、 药品（1）大量元素、钙盐、微量元素、铁盐、有机元素、蒸馏水、BA、IBA、 NAA 、蔗糖 、卡拉胶（2）75%酒精、0.1%升汞（加吐温）、95%酒精3、 材料幼嫩芦荟的芽三、实验内容及方法1研究方法：对芦荟茎尖、吸芽进行灭菌处理，然后接入无菌培养瓶进行组织培养，快速繁殖试管苗。采集芦荟截取根尖、吸芽外植体消毒在超净工作台接种放入培养室培养继代培养生根培养2.试验方法及步骤： 1 )愈伤组织培养 将准备好的芦荟幼苗在清水中冲洗数次，剪去叶片和大部分茎段，取茎尖部分，再冲洗1-2次，淋干。在超净台上，先用75%的乙醇将茎尖浸泡30-60s，再用升汞浸5-l0min，最后用无菌水冲洗数次。用解剖刀取出包括茎尖生长点的组织切块，接种到愈伤组织诱导培养基上。培养条件为:每天光照 10-12h，光照度为 1000一2000Lx，温度(25士)2。大约15-25d后，试管中接种的外植体就会长出新芽3 )生根培养 当培养瓶中的幼苗叶片长到3cm左右时，将幼苗在无菌条件下取出，放入装有生根培养基的培养瓶中培养，培养条件同分化培养。大约半个月后，幼苗即可生根。 3.可行性分析：外植体接种到诱导培养基上培养10天后，顶芽开始伸长生长，到25天左右在组织块的基部开始长出腋芽，并且在每个外植体的嫩茎组织基部长出多个小突起，45-50天后小突起和腋芽逐渐长成7-9个绿色单芽，此时芽约有2.0-2.5cm可进行下一步的培养。将长至3厘米高以上的无根增殖苗由丛生芽块上单芽切下转到生根培养基上，7天后在苗的基部形成白色的突起，并逐渐伸长，至12天可形成明显的幼根，逐渐长成完整的小植株，小苗长至7cm以上时即可移栽。四、可能出现的问题及解决方法:1、要注意严格遵守灭菌操作程序，防止被环境中的微生物的污染，这是组织培养的关键。2、在培养中，如果出现杂菌污染，应立即将该污染培养瓶中的培养物倒掉并将培养瓶洗净，烘干备用。3、对于愈伤组织或试管苗长势良好，仅有局部杂菌污染的试管或培养瓶，也可在无菌条件下，将愈伤组织或试管苗取出，重新放入装有相应培养基的试管或培养瓶中，继