阿司匹林对血小板聚集和血栓的影响.doc

阿司匹林对血小板聚集和血栓的影响实验目的：验证阿司匹林抗血小板的聚集及抗血栓作用 熟悉血栓的形成因素研究背景：血栓形成可导 致急性心肌梗死、 中风、肺栓塞等心、 脑、肺循环疾病， 是外科手术中常见 的并发症，也是介 入性血管形成术后 再闭塞的重要因素 血小板活化在 心脑血管疾病发病 中占有重要地位, 抗血小板聚集药已 作为常规治疗用于 心脑血管疾病1，在正常的循环血液中, 血小板处于静息状 态,而在某些生理或病理状态下, 血小板可 以被激活。 2， 血小板激活是指血小板在刺激物(诱导剂) 作用下发生的各种改变, 如变形、粘附和 聚集等, 其中血小板的活化聚集是血小板 的重要改变形式。实验原理：在活体的心脏和血管内，血液发生凝固或血液中某些有 形成分凝集形成固体质块的过程，称为血栓形成，当心血 管内皮细胞损伤后，内皮下胶原组织暴露，在炎症细胞产 生的趋化、粘附及细胞因子作用下，血小板粘附在破裂处 ，粘附后血小板活化，释放血栓素A2（TXA2）、二磷酸 腺苷（ADP）、凝血酶等，使血小板板聚集，并和凝血终 产物纤维蛋白交联，最终导致血栓形成。在血栓形成过程 中血小板起关键作用，TXA2是活化血小板的重要因素， 通过环氧化酶（COX）抑制剂匹林减少TXA2的合成，发 挥抗血小板作用，从而发挥其抗血栓用实验动物：36只健康家兔1.52.5Kg，雌雄不拘。主要试剂、药品和仪器：仪器： 哺乳类动物手术器械一套，兔固定台，动脉插 管，细丝线，婴儿称，注射器（5ml,10ml各4支），离 心管，离心机，兔灌胃器，722分光光度计。 试剂和药品： 阿司匹林结晶（临用前以50mmol L NaCO溶解后再用0.1mol HCl 调节 pH 7.0），花生 L 四烯酸(arachidonie acid，AA)，25%乌拉坦溶液， 10mg/L肝素，生理盐水实验方法与步骤1：Asp对血栓形成的影响：家兔12只，禁食12 小时，随机分成对照、Asp二组，每组6只。Asp 以300mg/kg每隔30分钟连续灌胃给药3次，对照 组用生理盐水等体积灌胃。第3次灌胃半小时后 以 AA 75 mg/kg静脉注射，立即观察家兔的呼 吸，活动状态并记录15分钟内家兔死亡数。2：Asp对AA 激活的血小板聚集的影响： （1）健康家兔24只, 随机分成4组, 每组6只。 A 组:生理盐水作为空白对照组; B-D组:10、50和 300mg/kgASP组。 （2）给药前于颈总动脉取血1ml/1次, 然后按 上述分组分别沿兔耳缘静脉给药后, 分别于30，60,120和180min取血。各时间点所取血液用3.5mg/ml肝素抗凝（血与抗凝剂的体积比是9:1），收集与塑料离心管中，以900r.min离心9min,取上层液即为富血小板血浆（PRP）,剩余血液再以2500r.min离心10min取上层液的贫血小板血浆（PPP）3，比色：用722型分光度光度计560nm波长比色，用PPP 300ul 调零，于比色管中加入PRP 300ul,加入诱导剂：AA终浓度0.35mmol/l,并记录300s 内的最大吸光度值实验结果：阿司匹林抗血栓作用存活数死亡数对照组实验组阿司匹林对血小板凝集的影响组别 剂量 最大吸光度值 AA 30 60 120 180对照组B组C组D组预期结果：1，asp对血栓形成的影响：对照组的家兔死