细菌形态、放线菌形态观察.doc

细菌形态、放线菌形态观察实验材料和方法：材料：菌种 Staphylococcus arueus Escherichia coli Bacillus subtilis Proteus vulgaris 细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）其他 显微镜、载玻片、盖玻片、染色试剂等1、细菌特殊结构的观察（根据实验指导提供的方法） 细菌芽孢 细菌鞭毛 细菌荚膜2. 细菌形态观察（活体染色）制片：在载玻片上滴一滴无菌水，取菌，涂片，制成菌悬液，盖上盖玻片后用吸水纸吸去水后观察。观察：低倍镜 高倍镜 3. 放线菌的观察 玻璃纸观察法：观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检，这种方法既能保持放线菌的自然生长，也便于观察不同生长期的形态特征。 在载玻片上滴一滴水后，从培养皿中剪取一小块玻璃纸,菌面朝上放于载玻片上，盖上盖玻片后观察。 制片法：在载玻片上滴一滴水后，从培养皿玻璃纸下面的培养基中取一小块菌放于载玻片上，然后取一盖玻片盖上后轻轻压一下后、再放上一片滤纸压一下，再观察。印片法：取一洁净载玻片置于火焰上微热后，盖在菌苔上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢子丝或孢子）粘附（“印”）在后一块载玻片的中央，有印迹的一面朝上，通过火焰23次固定。实验结果：1、大肠杆菌和变形杆菌都是周身鞭毛的细菌。若在正常情况下，经染色后菌体呈深褐色，鞭毛呈褐色。但是实验当天我们并为观察到鞭毛。2、芽孢杆菌经染色后，我们可以观察到呈绿色的芽孢，其中菌体是红色的。芽孢一般长在菌体中间，（有的菌体长在两端，但不是本实验的情况）。也有出芽后的芽孢。若不染色，也可观察到芽孢，芽孢在显微镜下较菌体光亮。3、本实验没有采用标准菌株褐球固氮菌，而选取了自己本组培养基内较水亮的菌株作为观察对象，并为观察到荚膜。4.本实验采用的实验材料为细黄链霉菌，即链霉菌属中的一种放线菌，放线菌有三种不同形态的菌丝，分别是基内菌丝（营养菌丝）、气生菌丝、孢子丝。其中在显微镜下观察下，基内菌丝色浅、较细，气生菌丝色深、较粗，孢子丝呈现一串串的念珠状，粗细程度似气生菌丝。下图为手绘三种菌丝图：5、观察活动细菌的运动中，我们选用变形杆菌为实验材料，在光镜下，可以看到呈杆状的细菌左右晃动或是逆水流游动的景象。分析： 1、在取菌落到载玻片上的蒸馏水中时，注意不能搅动，轻轻晃动即可。因为鞭毛属于细菌的附属结构，比较脆弱，若用力搅动，会使其断裂，从而无法观察。鞭毛是细菌的运动“器官”，直径通常是0.010.02m。这一尺度已超过了显微镜的分辨力，因此需要对其染色才能观察到。在鞭毛染色过程中，媒染剂吸附并沉积在细菌鞭毛上，使其直径加粗，从而能在光学显微镜下被观察到。实验过程中可能在晃动细菌过程中或是染色过程中操作不当，没观察到鞭毛。判断一个未知的菌落的细菌是否含有鞭毛，有两种方法：1、菌落较薄，且扩散得大；2、通过接种穿刺的方法，如果在接种线周围比较浑浊，则可能含有带鞭毛的细菌。2、芽孢是一些细菌长到一定阶段在菌体中形成的休眠体，壁厚，通透性低，不易着色。所以本实验选用着色能力强的染色剂孔雀绿对其着色，该染色剂在加热调节下能进入到菌体和芽孢中，进入菌体的染料经水洗后脱色，而芽孢内的染料难以洗脱，故使芽孢染上色。3、荚膜是细菌细胞外的一层胶状粘液物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽，与燃料的亲和力低。通常采用衬托染色法染色，使菌体和背景之间形成一透明圈。本实验采用红墨水作为染料，使其菌体着色。在显微镜下菌体颜色应该比较暗，在周围呈现一圈明亮的透明圈即为荚膜。4、观察放线菌菌丝时注意调节光线的强弱。基内菌丝（substrate mycelium）：也称营养菌丝，生长于培养基内，主要功能是吸收营养物质和排泄代谢废物，营养菌丝一般无隔膜，内含有许多核质体，直径约为0.2-0.8m，但长度差别很大。气生菌丝（aerial mycelium）：营养菌丝发育到一定时期，长出培养基外伸向空间的菌丝称为气生菌丝。它叠生于营养菌丝上，以至可覆盖整个菌落表面，在光学显微镜下菌丝较粗、颜色较深，直径约为1-1.4 m。孢子丝（sporophore）：放线菌生长发育到一定阶段，在其气生菌丝上分化出可形成孢子的菌丝，该菌丝称为孢子丝。孢子丝的形状和在气生菌丝上的排列方式，随菌种而异，有直形、波曲、螺旋状等之分。孢子丝发育到一定阶段可形成孢子。由于孢子含有不同色素，成熟的孢子堆也表现出特定的颜色，而且在一定条件下比较稳定故也是鉴定菌种的依据之一。放线菌观察时不同方法的侧重点：玻璃纸观察法可以看到三种菌丝，但是基内菌丝和气生菌丝较多，孢子丝不常见；制片法主要用来观察基内菌丝；印片法主要用来观察气生菌丝，但也有一部分的孢子