14-3-3ξ基因复制外显子转录后加选择性剪接互斥剪接硕士论文.doc

果蝇14-3-3基因选择性剪接机制的研究【摘要】 真核生物基因在转录后需要经过一系列复杂的后加工过程才能够成为具有正常生物学功能的成熟mRNA,后加工过程包括加帽、加尾、RNA编辑和选择性剪接等。而前体mRNA的选择性剪接则显著增大了蛋白质的多样性,以及基因表达的复杂程度。真核生物的内含子有一个明显的特征,就是在很多物种中其5和3剪切位点的基本序列都具有相对很高的保守性,内含子从mRNA前体转录产物中的去除和随后外显子的连接称作mRNA前体的剪接,它是构成真核基因表达和基因调控水平的一个重要方面。选择性剪接在真核生物蛋白质组的扩展以及新功能的产生中起着积极的作用,其多种剪接形式在功能调控水平上受到越来越多的重视,特别是通过改变生物大分子的局部结构导致的细微调控对重要功能产生的影响。14-3-3蛋白家族的成员形成了一组分子量为30kDa的高度保守的酸性蛋白,在许多器官和组织中广泛表达。14-3-3现已被证实是一个二聚体蛋白家族,能够调控蛋白质之间的相互作用。其作用涉及细胞信号通路,细胞周期进程的调控,胞内靶向作用,细胞骨架结构和转录等方面。二聚体结构的特定组成成分可能会影响与14-3-3相互作用的蛋白,这种相互作用的调控通常包括相互.更多还原【Abstract】 Eukaryotic Pre-mRNAs always undergoes series of post-transcriptional modification in order to become functional mRNAs, including 5cap processing,3polyadenylation, RNA editing and alternative splicing et al. The alternative splicing of pre-mRNAs dramatically increases the diversity of proteins and the complexity of genes expression. A notable feature of eukaryotic pre-mRNA introns is the relatively high level of conservation of the primary sequences of 5and 3splice sites over a great range of.更多还原 【关键词】 14-3-3基因； 复制外显子； 转录后加工； 选择性剪接； 互斥剪接； 【Key words】 14-3-3gene； duplicated exons； post-transcriptional processing； alternative splicing； mutually exclusive splicing； 致谢 6-7 摘要 7-8 Abstract 8-9 缩略语 10-13 第一章 选择性剪接 13-20 1.1 选择性剪接的普遍性 13 1.2 mRNA选择性剪接的基本机制 13-16 1.3 mRNA选择性剪接的调控机制 16-17 1.3.1 选择性剪接的顺式调控 16 1.3.2 选择性剪接的反式调节 16 1.3.3 RNA编辑对选择性剪接的调控作用 16-17 1.4 选择性剪接的几种常见形式 17 1.5 互斥剪接一种特殊的选择性剪接 17-19 1.5.1 互斥外显子 17-18 1.5.2 互斥剪接 18-19 1.6 mRNA选择性剪接的生物学意义 19 1.7 选择性剪接与疾病 19-20 第二章 14-3-3蛋白 20-26 2.1 概述 20 2.2 发现和命名 20-21 2.3 14-3-3家族的发生和序列保守性 21-22 2.3.1 假基因 21 2.3.2 14-3-3序列和结构的独特性 21-22 2.4 14-3-3二聚体的结构及其相互作用 22 2.5 14-3-3结合基序 22-24 2.6 总结 24-26 第三章 实验方案 26-28 3.1 实验目的与意义 26 3.2 研究内容 26-27 3.2.1 D.melanogaster14-3-3基因的克隆 26 3.2.2 对目的片段进行PCR定点突变 26 3.2.3 构建突变体的pMT/V5表达载体并在果蝇细胞中进行表达 26-27 3.3 技术路线 27-28 第四章 D.melanogaster14-3-3外显子5选择性剪接的研究 28-69 4.1 材料与试剂 28-30 4.2 实验方法 30-51 4.2.1 目的基因序列的搜索及引物设计和合成 30-31 4.2.2 模板制备 31-36 4.2.3 嵌合外显子上游内含子区的点突变载体的构建 36-44 4.2.4 外显子上部分序列突变体的构建 44-48 4.2.5 将构建好的pMT/V5突变体转染果蝇S2细胞 48-51 4.3 结果与分析 51-66 4.3.1 果蝇基因组的提取和目的基因片段的扩增 51-53 4.3.2 嵌合外显子上游内含子区的点突变对选择性剪接的影响 53-60 4.3.3 外显子上部分序列突变对选择性剪接的影响 60-66 4.4 讨论 66-69 参考文献【索购全文】Q联系Q：138113721 1030850491 全文提供服务费：2