抗核周因子的检测及其在类风湿关节炎中的意义.doc

抗核周因子的检测及其在类风湿关节炎中的意义2010-03-24 钱龙曾庆馀黄少弼肖征宇许杰洲谢素和 【摘要】目的了解抗核周因子(APF)对类风湿关节炎(RA)的诊断价值，并探讨其与RA病情的关系。方法以健康人颊粘膜细胞为抗原，采用间接免疫荧光法检测143例RA、184例其他风湿病患者和168例正常人的血清APF；RA病人的红细胞沉降率(ESR)、类风湿因子(RF)、抗鼠食管角质层抗体(AKA)、抗RA 33抗体、医生和患者病情活动性评价、压痛及肿胀关节指数、放射学病情进展改进的Sharp评分也同时评估。结果以110为阳性阈值，APF对RA诊断的敏感性为67.8%(97/143)，对照组9例阳性，特异性97.4%；41例早期RA检出率为65.9%(27/41)；APF阳性RA的RF阳性率及滴度较阴性者高(79.3%对51.9%，180对152)，ESR、医生和患者病情活动性评价、AKA阳性率也高于阴性组；抗RA33抗体阳性率Sharp评分在两组间无差异。结论APF有助于RA的诊断及早期诊断，可能是RA病情活动性及严重性指标之一。 【关键词】抗核周因子自身抗体关节炎，类风湿 Detection of antiperinuclear factor and its clinical significance QIAN Long,ZENG Qingyu,HUANG Shaobi,et al.Anhui Provincial Hospital,Hefei,230001 【Abstract】ObjectiveTo determine the significance of antiperinuclear factor (APF) in the diagnosis of rheumatoid arthritis (RA),and its relationship with disease activity and severity.MethodsBased on the antigenic substrate in human bucca mucosa cells,APF was measured with indirect immunofluorescence technique in 143 patients with RA,184 with miscellaneous rheumatic diseases and 168 healthy individuals.The erythrocyte sedimentation rate (ESR),C-reactive protein,RF,antibodies to the stratum of rat oesophagus (AKA),anti-RA33 antibodies,patients and physicians global assessment of disease activity,tender joint count,swollen joint count and modified Sharps radiological progression scores were compared between APF positive and negative RA patients.ResultsAt the titer of 110,APF was detected in 67.8% (97/143) of RA patients,and 9 cases of control group.The diagnostic specificity for RA was 97.4%.The occurrence of APF in the early RA was 65.9% (27/41).The patientss and physicians global assessment of disease activity,ESR,AKA,RF positive rate and its mean titer in APF-positive RA cases were significantly higher than those in APF-negative ones.ConclusionAPF is a valuable diagnostic tool and a useful additional marker for RA,and might be a useful prognostic marker and a test of the disease activity of RA,especially it is helpful in the early diagnosis of RA. 【Key words】Antiperinuclear factorAutoantibodiesArthritis,rheumatoid 1964年Neinhuis和Mandema首次以人颊粘膜上皮细胞为抗原底物，用间接免疫荧光法(IIF)检测类风湿关节炎(RA)血清中的抗核周因子(APF)。并证实APF对RA有较高的诊断价值1。其后一些学者进一步研究了它对RA的临床意义，结果不一。本研究旨在了解APF对RA的诊断价值、APF与RA病情的关系，并探讨APF与类风湿因子(RF)以及新近发现的对RA特异性较高的抗鼠食管角质层抗体(AKA)、抗RA33抗体的关系。 1资料与方法 1.1一般资料 试验组为1994年3月1998年3月汕头大学医学院附属医院就诊的RA患者143例，诊断符合1987年ARA修订的RA分类标准。其中早期RA(病程短于1年，X线骨质无侵蚀者)41例。采血时尚不够ARA分类标准，经624个月随访而确诊的RA 8例。所有病例采血时记录其关节表现(压痛指数、肿胀指数等，参照28关节计数法2)，关节外表现(类风湿结节、类风湿肺等)，同期实验指标包括血沉(ESR)、血清C-反应蛋白(CRP)、血清免疫球蛋白，病情活动性采用医生和病人自我评价3，骨关节放射学进展用改进的Sharp评分4。对照组包括其他风湿病患者184例，正常对照组168例。 1.2APF的检测 1.2.1抗原底物的制备：小块海绵刮起健康成人颊粘膜细胞，磷酸生理缓冲液(PBS，0.01 mmol/L，pH 7.4)冲洗，用0.5% Triton X-100处理后离心。PBS洗涤2次，用移液器吸取细胞混悬液逐滴加于载玻片，每滴约20 l。室温干燥后即可用于检测。为了了解供体细胞的检出情况，另取15例正常人颊粘膜细胞，分别于4 和30 干燥保存，备用。 1.2.2IIF法检测APF：以PBS稀释的110待检血清与抗原底物在室温下孵育90分钟，PBS洗涤(10分钟3次)，加入120 PBS稀释的异硫氰酸荧光素标记的羊抗人IgG抗体，室温下孵育30分钟。PBS洗涤(10分钟3次)，风干后以11甘油/PBS液(内含0.5 mg/L溴化乙啶)封片，于荧光显微镜下观察。 1.2.3结果判断：当至少1个底物细胞胞浆内核周出现典型圆或椭圆、匀质且与胞浆分界清楚的荧光颗粒时为阳性(见插页图第2页图1)。所有阳性血清作倍比稀释。 1.3其他抗体的检测 IgG型RF的检测采用乳胶凝集法。AKA以IIF法，用68周龄Wistar大鼠中1/3食管组织冰冻切片作底物，角质层出现线性或板层状荧光为阳性5。抗RA33抗体采用免疫印迹法检测，抗原为Hela细胞核蛋白质提取物6。 1.4数据统计和分析 均数用t检验；率的比较有2检验；等级资料用等级和检验。 2结果 2.1底物的选择和保存：15例供体中，12例(80%)颊粘膜细胞可与阳性血清产生核周荧光。6例阳性血清，分别以4 和30 保存底物检测，两周内均能检出阳性结果，1月时仅4 保存底物中1例转为阴性。 2.2对RA诊断的敏感性和特异