雪莲注射液防治骨关节炎的作用及其机制探讨摘要.doc

雪莲注射液防治骨关节炎的作用及其机制探讨（转载）【摘要】本研究内容分为六部分： 第一部分：目的：本课题将结合现代医学试验的理论与方法，运用Hulth造模法制作兔OA动物模型，运用雪莲注射液对膝骨关节炎动物模型进行干预，通过对软骨和滑膜标本大体观察、对软骨细胞成分、基质的光镜和电镜下观测，以及从细胞因子、透明质酸、氧自由基代谢等多方面指标的改变，探索雪莲注射液防治OA的作用机理，为临床使用提供理论支持 方法： 1.体内实验：动物随机编为4组，A组、B组、C组和D组，A、B、C组建立骨关节炎动物模型，D组正常喂养。 2.体外试验：分离培养软骨细胞，传代细胞分、组，组给予不同浓度雪莲注射液刺激，a组予不同浓度雪莲注射液干预24小时再予脂多糖(LPS，Lipopolysaccharide)刺激，b组先予脂多糖(LPS)刺激24小时再予不同浓度雪莲注射液干预，72小时后收集上清液检测IL-1 水平。 结果： 1.X片观察：C组与D组相比，关节内侧间隙明显变窄，关节面粗糙，变形，关节边缘有明显骨赘，软骨下骨骨密度明显增高，说明造模成功 2.光镜、电镜观察发现，A组动物在各个时间点的软骨结构、细胞排列和形态、软骨基质对Safranin-O异染性均优于B、C组 3.雪莲注射液能够降低骨关节炎模型动物关节液与体外培养软骨细胞分泌IL-1的水平 4.A组在各时段的HA水平与D组之间没有显著性差异(P0.05)，A组与B、C组各时段的HA水平有显著(P0.05)，B、C组和D组的HA水平有显著性差异(P0.05)，B、C组间没有显著性差异。 5.除D组以外，各组12周时血清中NO含量均高于6周时；24周时血清中NO含量均高于12周时NO的表达均逐渐升高，说明NO是参与膝OA发病进程的重要介质，病变的程度越重则含量越高；A组在各时点血清中NO含量均低于B组和C组(P0.05)，说明雪莲注射液能有效抑制骨性关节炎发病病理过程中的一氧化氮的产生；试验显示A组动物滑膜组织中SOD活性显著高于B、C组(P0.05)，而MDA含量显著低于B、C组(P0.05)。 结论：雪莲注射液能对软骨细胞蛋白多糖PG表型的表达具有维持和保护作用，使破坏的胶原纤维与弹力纤维得到修复，使软骨细胞的代谢恢复正常，进而维持其结构的完整性，延缓关节软骨退变；有效抑制IL-1、NO的生物活性，增强SOD的生物活性，改善微循环，降低骨内压，从而达到保护关节软骨的目的；促进滑膜细胞产生透明质酸和调节关节液中微量元素，恢复关节滑液和关节组织基质的流变学特性，缓解滑膜炎症，减轻软骨破坏，改善关节功能；其主要成分黄酮总甙具有抗炎、镇痛、消肿的作用，直接对抗炎性介质，改善关节的内环境，改善微血管状态，降低毛细血管通透性，减少渗出，消除滑膜及周围组织炎症，降低细胞因子、金属蛋白酶水平，使组织代谢恢复正常，延缓关节软骨的退变过程。 第二部分：目的：探讨雪莲注射液对膝骨关节炎模型动物软骨组织形态学的影响，试图从形态学角度阐明雪莲注射液治疗骨关节炎的作用机理 方法：健康日本大耳兔60只，随机编为4组即雪莲注射液实验组组(A组)、生理盐水对照组(B组)、空白对照组(C组)和正常组(D组)，每组15只。 结果：(1)X片观察：C组与D组相比，关节内侧问隙明显变窄，关节面粗糙变形，关节边缘有明显骨赘，软骨下骨骨密度明显增高，说明造模成功(2)光镜、电镜观察发现，A组动物在各个时间点的软骨结构、细胞排列和形态、软骨基质对Safranin-O异染性均优于B、C组。 结论：(1)从CR平片和光镜、电镜观察比较可以判断，兔膝骨性关节炎模型建立成功(2)雪莲注射液能够促进软骨细胞合成代谢，促进软骨基质蛋白多糖(PG)的合成，对关节软骨具有保护作用。 第三部分：目的：探讨雪莲注射液对膝骨关节炎模型动物关节液中白介素1水平的影响，从而探讨雪莲注射液治疗骨关节炎的作用机理。 方法：体内试验：健康日本大耳兔60只，随机编为4组印雪莲注射液实验组(A组)、生理盐水对照组(B组)、空白对照组(C组)和正常组(D组)，每组15只。 结果：雪莲注射液能够降低骨关节炎模型动物关节液与体外培养软骨细胞分泌IL-1的水平。 结论：雪莲注射液可以通过抑制白介素-1的水平对骨关节炎起防治作用。 第四部分：目的：探讨雪莲注射液对膝骨关节炎模型动物软骨组织胶原表达的影响，从而探讨雪莲注射液治疗骨关节炎的作用机理。 方法：健康日本大耳兔60只，随机编为4组即雪莲注射液实验组(A组)、生理盐水对照组(B组)、空白对照组(C组)和正常组(D组)，每组15只 结果：A组在各时点I型胶原阳染面积低于B组和C组，型胶原阳染面积高于B组和C组D组在各时点关节软骨仅在表层存在少量I型胶原阳性染色表达。 结论：应用雪莲注射液早期干预在翻译水平能有效缓解基质胶原降解破坏的程度，延缓OA的发生发展。 第五部分：目的：探讨雪莲注射液对膝骨关节炎模型动物关节液中透明质酸含量的影响，从而探讨雪莲注射液治疗骨关节炎的作用机理。 方法：健康日本大耳兔60只，随机编为4组即雪莲注射液实验组(A组)、生理盐水对照组(B组)、空白对照组(c组)和正常组(D组)，每组15只 结果：雪莲注射液能够促进骨关节炎模型动物关节液中透明质酸含量的提高 结论：雪莲注射液可以通过提高关节液中透明质酸的水平对骨关节炎起防治作用 第六部分：目的：探讨中药雪莲注射液对膝骨性关节炎模型动物氧自由基代谢的影响，从而探讨雪莲注射液治疗骨关节炎的作用机理。 方法：健康日本大耳兔60只，随机编为4组即雪莲注射液实验组(A组)、生理盐水对照组(B组)、空白对照组(C组)和正常组(D组)，每组15只 结果： (1)除D组以外，各组12周时血清中NO含量均高于6周时；24周时血清中NO含量均高于12周时NO的表达均逐渐升高，说明NO是参与膝OA发病进程的重要介质，病变的程度越重则含量越高 (2)A组在各时点血清中NO含量均低于B组和C组(P0.05)，说明雪莲注射液能有效抑制骨性关节炎发病病理过程中的一氧化氮的产生。 (3)试