饲料营养价值的测定.doc

A. 水分的测定饲料中的水分有两种存在形式，游离水和结合水。饲料分析中经常测定总水分，采用干燥失重的方法。对于不同饲料，干燥的方法应考虑其理化性质而有所区别。尽管饲料中的水分营养价值不大，但是测定饲料中的水分可得出饲料干物质的含量，这与饲料的能量含量密切相关，因此水分的测定意义重大。本方法依据GB643586 饲料中水分的测定，它适用于配合饲料和单一饲料水分含量的测定，但不适用于做饲料的奶制品、动植物油中的水分测定。 1.方法原理 试样在(1052)烘箱内和常压条件下烘干至恒重的质量为水分。2.仪器设备(1)植物样品粉碎机或研钵；(2)试验筛：孔径0.42mm（40目）(3)分析天平：分度值00001g；(4)称量皿：玻璃或铝质，直径40mm、高25mm(5)电热式恒温烘箱：控制2；(6)干燥器：变色硅胶干燥剂3样品的制备(1)选取有代表性的原始样品不少于1000g。按四分法缩分到250g，风干或以60烘干，用植物样品粉碎机碾细，过0.42mm试验筛(注意一定要将样品全部过筛，并混合均匀)。封入样品袋，放在阴凉处保存，以备测定。(2)如果饲料样品是含多汁的鲜样，如青贮、牧草等，无法直接粉碎，应进行预干燥处理：称取200-300g(准确至0.01g)鲜样，在105烘箱中烘杀15min，立即把温度降至65，烘6-8h，取出，在空气中冷却4h，称量。失重即初水分w0(H20)。将得到的烘干样，粉碎，过筛，装袋，以备测定。4测定步骤(1)将称量皿洗净，在(1052) 烘箱内烘干12h，取出在干燥器内冷却30min，用分析天平称量。再放入烘箱烘干30min，冷却，称量，直至两次称量之差小于00005g为恒重。(2)用分析天平称取2-5g样品，均匀平摊在已恒重的称量皿中，厚度小于05cm。不盖称量皿盖，在(1052) 恒温烘箱内烘干24h。取出，盖上称量皿盖，放在干燥器内冷却30min，称量，同样再烘1h，冷却、称量。直至两次称量之差小于0002g为恒重。5结果计算(1)饲料中水分含量按公式(31)计算W(H2O)=(m1-m2)/(m1-m0)*100式中： W(H2O)饲料中水分的质量分数，； m1105烘干前试样和称量皿总质量， m2一105烘干后试样和称量皿总质量，m0105烘干的称量皿质量，g。 (2)每个试样应取两个平行样测定，以算术平均值为测定结果。两个平行样的相对误差应小于0.2。 B.饲料中总总磷的测定一 范围本方法规定了用钼黄分光光度法测定饲料中总磷量。本方法适用于饲料原料(除磷酸盐外)及饲料产品。二原理将试样中有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的(NH4)PO4NH4VO316MoO3络合物，在波长400nm 下进行比色测定。三试剂实验用水应符合GB/T 6682 中三级水的规格，本方法中所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯。1 盐酸溶液，1+1。2 硝酸， 约1.40g/mL。3 高氯酸， 约1.68g/mL。4 钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，加水200mL 加热溶解，冷却后再加入250mL 硝酸，另称取钼酸铵25g, 加水400mL 加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容至1000mL，避光保存， 若生成沉淀，则不能继续使用。5 磷标准液，将磷酸二氢钾在105干燥1h，在干燥器中冷却后称取0.2195g 溶解于水，定量转入1000mL 容量瓶中，加硝酸3mL，用水稀释至刻度，摇匀，即为50g/mL 的磷标准液。四仪器设备1 实验室里样品粉碎机或研钵。2 分析筛，孔径0.42mm (40 目)。3 分析天平，感量0.0001g。4 分光光度计，可在400nm 下测定吸光度。5 比色皿，1cm。6 高温炉，可控温度在(55020)。7 瓷坩埚，50mL。8 容量瓶，50、100、1000mL。9 移液管，1.0、2.0、5.0、10.0mL。10 三角瓶，250mL。11 凯氏烧瓶，125、250mL。12 可调温电炉，1000W。6五试样制备取有代表性试样至少2kg，用四分法将试样缩分至250g，粉碎过0.42mm 孔筛，装入样品瓶中，密封保存备用。六 操作步骤1 试样的分解1.1 干法不适用于含磷酸氢钙Ca(H2PO4)2的饲料称取2g5g 试料(精确至0.0002g)于坩埚中，在电炉上小心炭化，再放入高温炉，在550下灼烧3h(或测定粗灰分后连续进行)，取出冷却，加入10mL 盐酸和硝酸数滴，小心煮沸约10min，冷却后转入，100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。1.2 湿法称取0.5g5g 试料(精确于0.0002g)于凯氏烧瓶中，加入硝酸30mL，小心加热煮沸至烟逸尽，稍冷， 加入高氯酸10mL，继续加热至高氯酸冒白烟(不得蒸干)，溶液基本无色，冷却，加水30mL，加热煮沸，冷却后，用水转移水100mL 容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，为试料分解液。1.3 盐酸溶解法(适于微量元素顶混料)称取0.2g1g 试料(精确至0.0002g)于100mL 烧杯缓缓中入盐酸10mL，使其全部溶解，冷却后转入100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试料分解液。2 工作曲线准确移取磷标准液0.0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mL 于50mL 容量瓶中，各加10mL 钒钼酸铵显色剂，用水稀释到刻度，摇匀，常温下放置10min 以上，以0.0mL 溶液为参比，用1cm 比色皿，在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光度，以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。3 试料的测定准确移取试料分解液1.0mL10.0mL(含磷量50g750g)于50mL 容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10mL，用水稀释到刻度，摇匀，常温下放置10min 以上，用1cm 比色皿在400nm 波长下测定试样分解液的吸光度，在工作曲线上查得试样分解液的磷含量。七结果计算1 测定结果按式(1)计算：X=m1V/104V1m(1)式中：X以质量分数表示的磷含量，%;m1由工作曲线查得试样分解液磷含量，g;V试样分解液的总体积，mL;m试样的质量，g;V1试样测定的移取试样分解液体积，mL;2 结果表示每个试样取每个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，所得结果应表示至小数点后两位。C. 饲料中粗纤维的测定1 适用范围 本标准适用于各种饲料和单一饲料。 2 原理 用固定量的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醚、乙醇除去醚溶物，经高温 灼烧扣除矿物质的量，所余量称粗纤维。它不是一个确切的化学实体，只有在公认强制 规定的条件下，测出的概略养分。其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。 3 仪器和设备 3.1 实验室用样品粉碎机或研钵。 3.2 分样筛: 孔径0.45mm(40目)。 3.3 分析天平: 感量0.0001g。 3.4 电热恒温箱: 可控制温度在130。 3.5 高温炉: 电加热, 有高温计且可控制炉温在550-600。 3.6 消煮器: 有冷凝球的高型烧杯(500ml)或有冷凝管的锥形瓶。 3.7 过滤装置: 抽真空装置、吸滤瓶及漏斗。 3.8 滤器: 200目不锈钢网或尼龙网, 或G2号玻璃滤器。 3.9 古氏坩锅: 30ml, 预先加入30ml酸洗石棉悬浮液, 再抽干, 以石棉厚度均匀、 不透光为宜。 3.10 干燥器, 以氯化钙(干燥试剂)或变色硅胶为干燥剂。 4 试剂 4.1 硫酸(GB 625-77): 分析纯, 0.2550.005N, 每100ml含硫酸1.25g, 应用氢氧 化钠标准溶液标定。 4.2 氢氧化钠(GB 629-81): 分析纯, 0.3130.005N, 每100ml含氢氧化钠1.25g, 应用邻苯二甲酸氢钾法标定, 不含或微含碳酸钠。 4.3 酸洗石棉: 市售或自制(中等长度酸洗石棉在1:3的盐酸中煮沸45min, 过滤后于 550 灼烧16h, 用0.255N硫酸浸泡且煮沸30min, 过滤且用水洗净酸, 同样用0.313N氢 氧化钠溶液煮沸30min, 过滤, 用少量硫酸溶液洗一次, 再用水洗净, 烘干后于550灼 烧2h, 其空白试验结果为每克石棉含粗纤维值小于1mg。 4.4 95%乙醇 (GB 679-80): 化学纯。 4.5 乙醚 (HG 3-1002-79): 化学纯。 4.6正辛醇：分析纯，防泡剂。 5 试样的选取和制备 取具有代表性试样, 粉碎至40目, 用四分法缩减至200g，放入密封容器，防止试样 成分变化和变质量。 6 测定步骤 称取1-2g试样，准确至0.0002g，用乙醚脱脂（含脂肪小于1可不脱脂，含脂肪 %不是必须的, 但建议脱脂。含脂肪在10以上必须脱脂，或用测脂肪后的试样 残渣），放入消煮器，加浓度准确为0.255N的且已沸腾的硫酸溶液200ml和滴正辛醇， 立即加热， 应使其在2min内沸腾，且连续微沸301min，注意保持硫酸浓度不变，试样不就离开溶液沾到瓶壁上（可补加沸蒸馏水）。随后过滤，用沸蒸馏水洗至不含酸， 取下不溶物，放入原容器中，加浓度准确且已沸腾氢氧化钠溶液200ml，同样准确微沸 30min。立即在铺有石棉的古氏坩埚*上抽滤， 先用硫酸溶液25ml洗涤，再用沸蒸馏水 洗至洗液为中性。用乙醇15ml洗残渣, 再将古氏坩埚和残渣放入烘箱, 于1302下烘 干2h, 在干燥器中冷却至室温, 称重。再于55025 的高温炉中灼烧30min, 于干燥 容器中冷却至室温后称重。 7 测定结果的计算 7.1 计算见下式: 21 粗纤维（）=100 式中：1130烘干后坩埚及试样残渣重，g； 2550灼烧后坩埚及试样残灰重, g; 试样(未脱脂时)重量, g。 7.2 重复性 每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 粗纤维含量在10以下，允许相差(绝对值)为0.4。 粗纤维含量在10以上，允许相对偏差为4。 * 铺两层玻璃纤维有利于过滤。D.饲料中粗脂肪的测定一、适用范围：本方法适用于各种单一、混合、配合饲料和预混料。二、原理：索氏脂肪提取器中用乙醚提取风干试样中的脂肪，计算样品的失重。其中失重除脂肪外，还有有机酸、磷脂、脂溶性维生素、叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或乙醚提取物。三、仪器设备：1、实验室用样品粉碎机或研钵。2、分析筛：孔径0.45mm（40目）。3、分析天平：感量0.0001g。4、电热恒温水浴锅：室温100。5、干燥箱：50200。6、索氏脂肪提取器（带球形冷凝器）：100或150ml。7、滤纸：中速、脱脂。8、干燥器：用变色硅胶为干燥剂。9、棉线绳。四、试剂： 无水乙醚（分析纯）。五、试样的选取和制备： 取具有代表性试样，用四分法缩减至50g，粉碎至40目。六、测定步骤：1、将棉线绳剪成适当大小置于无水乙醚中浸泡24小时（注意密闭、防火）后取出，晒干备用。将滤纸置于 105干燥箱中干燥2小时，取出称其恒重。2、将待测试样粉碎过40目后，取适量于135干燥箱内干燥40分钟，制成风干样品。3、用分析天平精确称取2.5g风干试样，置于预先标号恒重的滤纸中包好，并用处理好的棉线绳系好。4、滤纸包放于抽提管内，在抽提瓶中加入60100ml无水乙醚，在4045的水浴中加热，使乙醚回流。待3小时左右（油高的5小时）用滤纸检查抽提管流出的乙醚，挥发后不留下油迹为抽提终点。5、取出试样后，置于恒重的铝盒内，于135干燥箱内，恒重40分钟，并将棉线剪去，置于干燥器中冷却30分钟后，称重。七、测定结果的计算和表达：1、风干样中粗脂肪含量：EE%= M0-（M3-M2-M1）100 M0其中：M0为风干试样重，g。 M1为滤纸恒重，g。 M2为铝盒恒重，g。 M3为烘后铝盒+滤纸包重，g。2、原样中粗脂肪含量：EE%=（1-原样中水份含量）风干样中粗脂肪含量3、重复性：每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。粗脂肪含量在10%以上（含10%）允许相对偏差为3%；粗脂肪含量在10%以下时，允许相对偏差为5%。E.饲料中维生素B1的测定方法适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、维生素预混料中维生素B1的测定。萃取液的浓度范围为0.020.2g/mL(不适用在有吸附硫胺素或影响硫色素荧光干扰物质的情况下)。2 引用标准GB 6682 实验室用水规格3 方法原理试样中的维生素B1(即硫胺素C12H17ON4SCl)经稀酸消化、酶分解、吸附剂的吸附分离提纯后，在碱性条件下被铁氰化钾氧化生成荧光色素硫色素，用正丁醇萃取。硫色素在正丁醇中的荧光强度与试样中维生素B1的含量成正比，依此进行定量测定。4 试剂和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。4.1 盐酸溶液，0.1mol/L：将8.5mL盐酸(GB 622)用水稀释至1000mL。4.2 硫酸溶液，0.05mol/L：将2.8mL浓硫酸(GB 625)加入水中，稀释至1000mL。4.3 乙酸钠溶液，2.0mol/L：取164g无水乙酸钠(GB 694)或272g结晶乙酸钠(CH2COONa3H2O GB 693)溶于水，稀释至1000mL。4.4 淀粉酶悬浮液，100g/L：用2.0mol/L乙酸钠溶液(4.3)悬浮10g淀粉酶制剂(Takadiastase，或相当活性的其他磷酸酯酶)，稀释至100mL，使用当日制备。4.5 氯化钾(GB 646)溶液，250g/L。4.6 酸性氯化钾溶液：将8.5mL浓盐酸加入至氯化钾溶液(4.5)中，惭稀释至1000mL。4.7 氢氧化钠(GB 629)溶液，150g/L。4.8 铁氰化钾(GB 644)溶液，10g/L。4.9 碱性铁氰化钾溶液：4.0mL的铁氰化钾溶液(4.8)与氢氧化钠溶液(4.7)混合使之成100mL，此液4h内使用。4.10 冰乙酸(GB 676)溶液，30mL/L。4.11 人造沸石(Q/HG 12-445-63，6080目)使用前必需活化，方法如下：将适量人造沸石置于大烧杯中，加入10倍容积的热乙酸溶液(4.10)，用玻璃棒均匀搅动10min，使沸石在乙酸溶液中悬浮，待沸石沉降后，弃去上层乙酸液。重复上述操作两次。换用5倍其容积的热氯化钾溶液(4.5)搅动清洗两次，每次15min。再用热乙酸溶液洗10min。最后用热蒸馏水清洗沸石至无氯离子(用10g/L硝酸银水溶液检验)。用布氏漏斗抽滤，100烘干，贮于磨口瓶中备用。使用前，检查沸石对硫胺素标准溶液的回收率，如达不到 92%，需重新活化沸石。4.12 硫胺素标准溶液4.12.1 硫胺素贮备液：盐酸硫胺素纯品(中国药典参照标准)，于五氧化二磷干燥器24h，称取0.0500g，溶解于ph4.54.3的20%(V/V)乙醇溶液中并定容至500mL，盛于棕色瓶中低温保存。该溶液每毫升含0.1mg硫胺素。4.12.2 硫胺素贮备液：取硫胺素贮备液(4.12.1)10mL用酸性20%乙醇溶液定容至100mL，盛于棕色瓶中低温保存。该溶液每毫升中含10g硫胺素。4.12.3 硫胺素标准工作液：取贮备液(4.12.2)2mL与65mL盐酸溶液(4.1)和5mL乙酸钠溶液(4.3)混合，用水定容至100mL。现用现配。该溶液每毫升中含0.2g硫胺素。4.13 硫酸奎宁(Q/HG 22-797-68)溶液4.13.1 硫酸奎宁贮备液：称取硫酸奎宁0.1000g，用0.05mol/L硫酸(4.2)溶解并定容至1000mL，贮于棕色瓶中低温保存。若溶液混浊则需重新配制。该溶液每毫升中含0.1mg硫酸奎宁。4.13.2 硫酸奎宁工作液：取贮备液(4.13.1)3mL，用0.05mol/L硫酸定容至 1000mL，盛于棕色瓶中，低温保存。该溶液每毫升中含0.3g硫酸奎宁。4.14 正丁醇(HG 3-1012)，其荧光强度不超过硫酸奎宁工作液的4%，否则需用全玻璃蒸馏器重蒸馏，取114118馏份。4.15 无水硫酸钠(HG 3-123)。5 仪器、设备5.1 荧光分光光度计，备1cm石英比色杯。5.2 电热恒温水浴。5.3 电热恒温箱。5.4 实验室用样品粉碎机。5.5 分析天平：感量0.0001g。5.6 注射器：10mL。5.7 吸附分离柱：全长235mm，外径长度如下：上端贮液槽容量约为50mL，35mm70mm;中部吸附管8mm130mm;下端35mm;下端35mm拉成毛细管。5.8 反应瓶：具塞离心管25mL。6 试样的制备选取有代表性的饲料样品，至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，过0.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。7 分析步骤7.1 称样：称取单一饲料、配合饲料或浓缩饲料12g(约含硫胺素420g)，精确至0.001g。维生素预混料0.250.5g，精确至0.0001g，置于100mL容量瓶中。7.2 提取7.2.1 水解：将0.1mol/L盐酸(4.1)65mL加入试样瓶(7.1)中，经沸水浴加热30min，开始加热510min内不时摇动容量瓶，以防结块。或于12112315磅高压釜中加热30min。7.2.2 酶解：冷却容量瓶至50以下，加5mL淀粉酶悬浮液(4.4)，摇匀。该试液的pH约为4.04.5，将容量瓶于4550恒温箱中保温3h，取出冷却调整pH4.5，用水稀释至100mL。7.2.3 过滤：将试液通过无灰滤纸过滤弃去初滤液5mL，收集滤液于锥形瓶中。预混料提取液需逐级稀释，使之含硫胺素约为0.2g/mL。7.3 提纯7.3.1 制备吸附柱：取1.5g活化人造沸石(4.11)置于50mL小烧杯中，加入3%乙酸溶液(4.10)浸泡。将脱脂棉置于吸附柱底部，用玻璃棒轻压。然后将乙酸浸泡的沸石全部洗入柱中(勿使吸附柱脱水)，过柱流速1mL/min为宜。再用10mL近沸的洗柱一次。7.3.2 吸25mL提取液(7.2.3)，慢慢加入制备好的吸附柱中，弃去滤液，用每份5mL近沸的水洗柱三次，弃去洗液。7.3.3 用25mL 6070酸性氯化钾(4.6)分三次连续加入吸附柱，收集洗脱液于25mL容量瓶中，冷却后用酸性氯化钾定容，混匀。7.3.4 同时用25mL硫胺素标准工作液(4.12.3)。重复7.3.17.3.3操作，作为外标。7.4 氧化与萃取(以下操作避免紫外光照射)7.4.1 于两只反应管中各吸入5mL洗脱液(7.3.3)，记作A、B。7.4.2 向B管加3mL氢氧化钠溶液(4.7)，再向A管中加3mL氧化剂碱性铁氰化钾溶液(4.9)，轻轻旋摇。依次立即向A管加15mL正丁醇加塞，剧烈地振摇15s，再向B管加入15mL正丁醇加塞。共同振摇90s，静置分层。7.4.3 用注射器吸去下层水相，向各反应管加入约2g无水硫酸钠(4.15)，旋摇，待测。7.4.4 同时将5mL作为外标的洗脱液(7.3.4)，置入另两只反应管，相应地记作C、D，按7.4.17.4.3操作。7.5 测定7.5.1 用硫酸奎宁工作液(4.13.2)调整荧光仪，使其稳定于一定数值，作为仪器工作的固定条件。7.5.2 于激发波长365nm，发射波长435nm处测定各反应管中萃取液(7.4.3)和(7.4.4)的荧光强度。8 分析结果的计算和表述8.1 计算公式硫胺素(维生素B1)含量以mg/kg(或g/kg)表示，按下式计算：硫胺素(VB1mg/kg)=(T-T0)/(S-S0)C(V2/V1)(V0/m)式中：TA管试液的荧光强度;T0B管试液空白的荧光强度;SC管标准溶液的荧光强度;S0D管标准溶液空白的荧光强度;C硫胺素标准工作液浓度，g/mL;0提取液总体积，mL;V1分取提取液过柱的体积，mL;V2酸性氯化钾洗脱液体积，mL;m试样质量，g。8.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数3位。9 重复性同一分析者对同一试样同时或快速连续进行两次测定，所得结果之间的差值;在硫胺素含量小于或等于5.0mg/kg时，不得超过平均值的15%。在硫胺素含量大于5.0mg/kg时，不得超过平均值的10%。在硫胺素含量大于50mg/kg时不得超过平均值的5%F.饲料中粗蛋白测定方法1 主题内容与适用范围本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2 引用标准GB 601化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备3 原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。4 试剂4.1 硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98，无氮。4.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3920）或硫酸钠（HG 3908），均为化学纯，磨碎混匀。4.3 氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40水溶液（m/V）。4.4 硼酸（GB 628）：化学纯，2水溶液（m/V）。4.5 混合指示剂：甲基红（HG 3958）0.1乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 31220）0.5乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。4.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。4.6.1 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。4.6.2 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。4.7 蔗糖（HG 31001）：分析纯。4.8 硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。4.9 硼酸吸收液：1硼酸水溶液1 000mL，加入0.1溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1甲基红乙醇溶液7mL，4氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。5 仪器设备5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。5.2 分样筛：孔径0.45mm（40目）。5.3 分析天平：感量0.0001g。5.4 消煮炉或电炉。5.5 滴定管：酸式，10、25mL。5.6 凯氏烧瓶：250mL。5.7 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。5.8 锥形瓶：150、250mL。5.9 容量瓶：100mL。5.10 消煮管：250mL。5.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。6 试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。7 分析步骤7.1 仲裁法7.1.1 试样的消煮称取试样0.51g（含氮量580mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化剂（4.2），与试样混合均匀，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，将 凯氏烧瓶（5.6）置于电炉（5.4）上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力 （360410）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。7.1.2 氨的蒸馏（蒸馏步骤的检验见附录A）7.1.2.1 常量蒸馏法将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入60100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶（5.6）中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3），轻轻摇动凯氏烧瓶（5.6），使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏12min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。7.1.2.2 半微量蒸馏法将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶（5.8）内。蒸汽发生器 （5.7）的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液1020mL注入蒸馏装置（5.7）的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液（4.3），小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏