高考生物一轮复习 专题26 基因工程课件2.ppt

专题26基因工程 高考生物 新课标 专用 1 2017北京理综 5 6分 为了增加菊花花色类型 研究者从其他植物中克隆出花色基因c 图1 拟将其与质粒 图2 重组 再借助农杆菌导入菊花中 五年高考 下列操作与实验目的不符的是 a 用限制性核酸内切酶ecor 和连接酶构建重组质粒b 用含c基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织 将c基因导入细胞c 在培养基中添加卡那霉素 筛选被转化的菊花细胞d 用分子杂交方法检测c基因是否整合到菊花染色体上 答案c本题主要考查基因工程的相关知识 由于c基因两端及质粒上均存在限制酶ecor 的酶切位点 因此 可采用限制酶ecor 和dna连接酶构建重组质粒 用含c基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织 即农杆菌转化法 可以将c基因导入细胞 由于质粒上存在潮霉素抗性基因 标记基因 因此 可以在培养基中添加潮霉素 筛选被转化的菊花细胞 c符合题意 可用分子杂交方法检测c基因是否整合到菊花染色体上 2 2018课标全国 38 15分 回答下列问题 1 博耶 h boyer 和科恩 s cohen 将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达 该研究除证明了质粒可以作为载体外 还证明了 答出两点即可 2 体外重组的质粒可通过ca2 参与的方法导入大肠杆菌细胞 而体外重组的噬菌体dna通常需与组装成完整噬菌体后 才能通过侵染的方法将重组的噬菌体dna导入宿主细胞 在细菌 心肌细胞 叶肉细胞中 可作为重组噬菌体宿主细胞的是 3 真核生物基因 目的基因 在大肠杆菌细胞内表达时 表达出的蛋白质可能会被降解 为防止蛋白质被降解 在实验中应选用的大肠杆菌作为受体细胞 在蛋白质纯化的过程中应添加的抑制剂 答案 1 体外重组的质粒可以进入受体细胞 真核生物基因可在原核细胞中表达 2 转化外壳蛋白 或答噬菌体蛋白 细菌 3 蛋白酶缺陷型蛋白酶 解析本题主要考查基因工程的相关知识 1 体外重组的质粒可以进入受体细胞 且重组质粒在不同细胞中能正常表达 说明目的基因在不同细胞中的表达机制相同 生物界共用一套遗传密码 2 基因工程中 受体细胞为大肠杆菌细胞时 常用ca2 处理大肠杆菌 使之处于感受态 即ca2 参与的转化法 噬菌体dna与外壳蛋白组装成完整噬菌体 因噬菌体的宿主是细菌 故只有细菌可作为重组噬菌体的宿主细胞 3 为防止目的基因表达的蛋白质被破坏 可选用不能合成蛋白酶的大肠杆菌作为受体细胞 在蛋白质纯化过程中加入蛋白酶的抑制剂可以保护蛋白质不被水解 知识归纳目的基因导入受体细胞的方法 1 若受体细胞为植物细胞 基因枪法 花粉管通道法 农杆菌转化法 2 若受体细胞为动物细胞 显微注射法 3 若受体细胞为大肠杆菌 感受态细胞法 3 2018课标全国 38 15分 某种荧光蛋白 gfp 在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光 这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达 某科研团队将某种病毒的外壳蛋白 l1 基因连接在gfp基因的5 末端 获得了l1 gfp融合基因 简称为甲 并将其插入质粒p0 构建了真核表达载体p1 其部分结构和酶切位点的示意图如下 图中e1 e4四种限制酶产生的黏性末端各不相同 回答下列问题 1 据图推断 该团队在将甲插入质粒p0时 使用了两种限制酶 这两种酶是 使用这两种酶进行酶切是为了保证 也是为了保证 2 将p1转入体外培养的牛皮肤细胞后 若在该细胞中观察到了绿色荧光 则说明l1基因在牛的皮肤细胞中完成了和过程 3 为了获得含有甲的牛 该团队需要做的工作包括 将能够产生绿色荧光细胞的移入牛的中 体外培养 胚胎移植等 4 为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中 某同学用pcr方法进行鉴定 在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的 填 mrna 总rna 或 核dna 作为pcr模板 答案 1 e1和e4甲的完整甲与载体正确连接 2 转录翻译 3 细胞核去核卵母细胞 4 核dna 解析 1 构建基因表达载体时 使用的限制酶不能破坏融合基因 选用产生不同黏性末端的两种限制酶 可以防止自身环化 并且保证融合基因和质粒正确连接 2 在牛的皮肤细胞中观察到绿色荧光 说明l1基因已经表达 即在该皮肤细胞中完成了转录和翻译过程 3 培育转基因的克隆牛需将含目的基因的细胞的细胞核移入牛的去核卵母细胞中 4 为检测克隆牛的不同组织细胞中是否含有融合基因 需提取不同组织细胞的核dna作为pcr模板 用pcr方法进行鉴定 4 2018江苏单科 32 8分 为生产具有特定性能的 淀粉酶 研究人员从某种海洋细菌中克隆了 淀粉酶基因 1656个碱基对 利用基因工程大量制备 淀粉酶 实验流程见图 请回答下列问题 1 利用pcr技术扩增 淀粉酶基因前 需先获得细菌的 2 为了便于扩增的dna片段与表达载体连接 需在引物的端加上限制性酶切位点 且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点 主要目的是 3 进行扩增时 反应的温度和时间需根据具体情况进行设定 下列选项中的设定与引物有关 的设定与扩增片段的长度有关 填序号 变性温度 退火温度 延伸温度 变性时间 退火时间 延伸时间 4 下图表示筛选获得的工程菌中编码 淀粉酶的mrna的部分碱基序列 5 augccaucaacaaauacuaacacuu 3 图中虚线框内mrna片段包含个密码子 如虚线框后的序列未知 预测虚线框后的第一个密码子最多有种 5 获得工程菌表达的 淀粉酶后 为探究影响酶活性的因素 以浓度为1 的可溶性淀粉为底物测定酶活性 结果如下 根据上述实验结果 初步判断该 淀粉酶活性最高的条件为 答案 8分 1 基因组dna 2 5 使dna片段能定向插入表达载体 减少自连 3 4 813 5 ph为8 5 缓冲液为50mmol ltirs hcl 解析 1 由题干信息可知某种海洋细菌含有 淀粉酶基因 因此在扩增 淀粉酶基因前需先从细菌中提取细菌的基因组dna 2 由于引物的作用是引导子链的延伸 将脱氧核苷酸连接到引物上时 是与引物的3 端相连的 由此确定需在引物的5 端加上限制性酶切位点 常在两条引物上加入不同的限制酶切位点的主要目的是使dna片段能定向插入表达载体 防止自身相连 3 进行pcr扩增时 退火的温度与引物长短和碱基种类有关 延伸时间长短的设定与扩增片段的长度有关 4 密码子是指mrna上决定一个氨基酸的三个相邻的碱基 该mrna上5 端为aug 起始密码子 因此可依据三个碱基是一个密码子来分析图中虚线框中的碱基 可得出共有8个密码子 由于虚线框后的第一个密码子已经固定为u 因此还有2个碱基未知 共可能有的种数为4 4 16 又因为uag uga uaa为终止密码子 因此决定氨基酸的密码子最多有13种 5 据表格数据可知 淀粉酶在ph为8 5 缓冲液为50mmol ltris hcl的条件下相对活性为99 5 初步判断此条件下酶活性最高 5 2018天津理综 10 14分 甲型流感病毒为rna病毒 易引起流感大规模流行 我国科学家在2017年发明了一种制备该病毒活疫苗的新方法 主要环节如下 1 改造病毒的部分基因 使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力 以病毒rna为模板 逆转录成对应dna后 利用技术扩增 并将其中某些基因 不包括表面抗原基因 内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列 与改造前的基因相比 改造后的基因表达时不能合成完整长度的 因此不能产生子代病毒 将该改造基因 表面抗原等其他基因分别构建重组质粒 并保存 2 构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞 设计合成一种特殊trna的基因 其产物的反密码子能与 1 中的终止密码子配对结合 并可携带一个非天然氨基酸 uaa 将该基因与连接后导入宿主细胞 提取宿主细胞的进行分子杂交鉴定 筛选获得成功表达上述trna的转基因宿主细胞 3 利用转基因宿主细胞制备疫苗 将 1 中的重组质粒导入 2 中的转基因宿主细胞 并在补加的培养基中进行培养 则该宿主细胞能利用上述特殊trna 翻译出改造病毒基因的完整蛋白 产生大量子代病毒 用于制备疫苗 特殊trna基因转录时 识别其启动子的酶是 单选 a 病毒的dna聚合酶b 宿主的dna聚合酶c 病毒的rna聚合酶d 宿主的rna聚合酶 4 上述子代病毒不能在正常宿主细胞中增殖 没有致病性 因此不经灭活或减毒即可制成疫苗 与不具侵染性的流感病毒灭活疫苗相比 该病毒活疫苗的优势之一是可引起免疫 增强免疫保护效果 答案 共14分 1 pcr多肽 或蛋白质 2 载体总rna 3 非天然氨基酸 uaa d 4 细胞 解析本题主要考查基因工程的相关知识 1 利用pcr技术体外扩增dna 若将基因中个别编码氨基酸的序列替换为编码终止密码子的序列 则改造后的基因转录合成的mrna中 终止密码子提前出现 将不能控制合成完整长度的多肽 或蛋白质 2 目的基因只有与载体连接后才能导入宿主细胞 可提取宿主细胞的总rna进行分子杂交鉴定 以筛选获得成功表达题述trna的转基因宿主细胞 3 由 2 知 转基因宿主细胞含有的特殊trna基因转录的tr na 该trna的反密码子可与终止密码子配对 并可携带非天然氨基酸 uaa 所以培养基中需补加非天然氨基酸 uaa 病毒中的基因进行转录时 识别其启动子的酶是宿主的rna聚合酶 4 因该病毒疫苗具有侵染性 故可引起细胞免疫 疑难突破 1 由 1 中 个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列 可知 改造后的基因表达时不能合成完整长度的多肽 2 由 2 中特殊trna能与终止密码子配对结合 并可携带一个非天然氨基酸 uaa 可知 转基因宿主细胞可利用非天然氨基酸uaa 所以培养基中需加入非天然氨基酸uaa 3 灭活了的病毒已不具有侵染性 因此 只能引起体液免疫 而具侵染性的病毒可引起细胞免疫 6 2017课标全国 38 15分 真核生物基因中通常有内含子 而原核生物基因中没有 原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的rna序列的机制 已知在人体中基因a 有内含子 可以表达出某种特定蛋白 简称蛋白a 回答下列问题 1 某同学从人的基因组文库中获得了基因a 以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白a 其原因是 2 若用家蚕作为表达基因a的受体 在噬菌体和昆虫病毒两种载体中 不选用作为载体 其原因是 3 若要高效地获得蛋白a 可选用大肠杆菌作为受体 因为与家蚕相比 大肠杆菌具有 答出两点即可 等优点 4 若要检测基因a是否翻译出蛋白a 可用的检测物质是 填 蛋白a的基因 或 蛋白a的抗体 5 艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明dna是遗传物质做出了重要贡献 也可以说是基因工程的先导 如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示 那么 这一启示是 答案 1 基因a有内含子 在大肠杆菌中 其初始转录产物中与内含子对应的rna序列不能被切除 无法表达出蛋白a 2 噬菌体噬菌体的宿主是细菌 而不是家蚕 3 繁殖快 容易培养 4 蛋白a的抗体 5 dna可以从一种生物个体转移到另一种生物个体 解析本题主要涉及基因文库与cdna文库的差异 基因工程的步骤 基因工程产物的检测方法等知识 意在考查考生提取知识 分析和归纳知识的能力 1 真核生物和原核生物的基因结构不同 真核生物的基因中存在内含子等不能编码蛋白质的序列 原核生物的基因中不存在内含子 真核生物在基因表达时 转录出的rna需要将内含子对应的rna序列切除后才可进行翻译 从人的基因组文库中获得的基因a中含有内含子 而作为原核生物的大肠杆菌不能切除内含子对应的rna序列 故基因a在大肠杆菌中无法表达出蛋白a 2 病毒对宿主细胞的侵染具有特异性 噬菌体是专门侵染细菌的病毒 不能侵染家蚕细胞 故可选用可感染家蚕的昆虫病毒作为载体 3 与真核生物相比 大肠杆菌等原核生物具有繁殖快 容易培养 遗传物质相对较少等优点 因此在基因工程中常用原核生物作为受体细胞 4 检测基因a是否翻译出蛋白a 一般用抗原 抗体杂交的方法 即用蛋白a的抗体与从细胞中提取的蛋白质进行杂交 观察是否出现杂交带 5 肺炎双球菌转化实验的实质是s型菌的dna进入r型菌体内 并可在r型菌体内完成表达 这证明了dna可以从一种生物个体转移到另一种生物个体 为基因工程奠定了理论基础 知识拓展真核生物基因中通常有内含子 原核生物的基因中不含有内含子 原核生物不能切除内含子转录的rna序列 故基因工程中不能将真核生物的基因直接导入原核生物 而常使用反转录的方法先获得真核生物的cdna 不含内含子 再进行下一步操作 7 2017课标全国 38 15分 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分 几丁质酶可催化几丁质水解 通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内 可增强其抗真菌病的能力 回答下列问题 1 在进行基因工程操作时 若要从植物体中提取几丁质酶的mrna 常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料 原因是 提取rna时 提取液中需添加rna酶抑制剂 其目的是 2 以mrna为材料可以获得cdna 其原理是 3 若要使目的基因在受体细胞中表达 需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞 原因是 答出两点即可 4 当几丁质酶基因和质粒载体连接时 dna连接酶催化形成的化学键是 5 若获得的转基因植株 几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中 抗真菌病的能力没有提高 根据中心法则分析 其可能的原因是 答案 1 嫩叶组织细胞易破碎防止rna降解 2 在逆转录酶的作用下 以mrna为模板按照碱基互补配对的原则可以合成cdna 3 目的基因无复制原点 目的基因无表达所需启动子 4 磷酸二酯键 5 目的基因的转录或翻译异常 解析本题主要考查基因工程的相关知识 考查学生获取知识 分析与归纳知识等能力 1 从植物体中提取mrna需要破碎组织细胞 嫩叶比老叶的组织细胞易破碎 mrna提取效率高 由于植物组织中存在的rna酶能将rna分解 所以实验过程中要添加rna酶抑制剂以降低rna酶的活性 保护提取的rna不被分解 2 cdna是在逆转录酶的作用下 以mrna为模板 按照碱基互补配对的原则合成的 3 由于目的基因无复制原点 也无基因表达所需的启动子和终止子 所以需与质粒构建重组质粒后再导入受体细胞 4 dna连接酶可以催化两个dna片段的黏性末端或平末端连接形成磷酸二酯键 5 几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中 但是转基因植株抗真菌病的能力没有提高 说明转基因植株体内不存在抗菌活性蛋白 即几丁质酶基因的转录或翻译过程出现异常 从而导致几丁质酶基因没有正常表达合成抗菌活性蛋白 知识归纳走出基因工程的5大易混点 1 限制酶具有特异性 即一种限制酶只能识别特定的碱基序列 并在特定的位点上进行切割 限制酶不切割自身dna的原因是原核生物dna分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰 2 切取目的基因与切割载体时 只能 使用 同一种酶 在获取目的基因和切割载体时通常用同一种限制酶 以获得相同的黏性末端 但如果用两种不同限制酶切割后形成的黏性末端相同 在dna连接酶的作用下目的基因与载体也可以连接起来 为了避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接 可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒 使目的基因和载体各具有两个不同的黏性末端 3 启动子 起始密码子 终止子 终止密码子 启动子 一段有特殊结构的dna片段 位于基因的首端 它是rna聚合酶识别 结合的部位 终止子 一段有特殊结构的dna短片段 位于基因的尾端 作用是使转录过程停止 起始密码子和终止密码子位于mrna上 分别控制翻译过程的启动和终止 4 目的基因的插入位点不是随意的 基因表达需要启动子与终止子的调控 所以目的基因的插入位点应在启动子与终止子之间 若目的基因插在启动子内部 启动子将失去原功能 5 基因工程操作过程中只有第三步 将目的基因导入受体细胞 没有碱基互补配对现象 第 一步用pcr或人工合成法获得dna过程中存在碱基互补配对 第二步黏性末端连接时存在碱基互补配对 第四步分子杂交及基因表达时存在碱基互补配对 8 2017课标全国 38 15分 编码蛋白甲的dna序列 序列甲 由a b c d e五个片段组成 编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成 如图1所示 回答下列问题 1 现要通过基因工程的方法获得蛋白乙 若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的dna序列 ttcgcttct caggaagga 则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙 原因是 2 某同学在用pcr技术获取dna片段b或d的过程中 在pcr反应体系中加入了dna聚合 酶 引物等 还加入了序列甲作为 加入了作为合成dna的原料 3 现通过基因工程方法获得了甲 乙 丙三种蛋白 要鉴定这三种蛋白是否具有刺激t淋巴细胞增殖的作用 某同学做了如下实验 将一定量的含t淋巴细胞的培养液平均分成四组 其中三组分别加入等量的蛋白甲 乙 丙 另一组作为对照 培养并定期检测t淋巴细胞浓度 结果如图2 由图2可知 当细胞浓度达到a时 添加蛋白乙的培养液中t淋巴细胞浓度不再增加 此时若要使t淋巴细胞继续增殖 可采用的方法是 细胞培养过程中 培养箱中通常要维持一定的co2浓度 co2的作用是 仅根据图1 图2可知 上述甲 乙 丙三种蛋白中 若缺少 填 a b c d 或 e 片段所编码的肽段 则会降低其刺激t淋巴细胞增殖的效果 答案 1 编码乙的dna序列起始端无atg 转录出的mrna无起始密码子 2 模板dntp 3 进行细胞传代培养维持培养液的ph c 解析本题主要考查基因工程技术和动物细胞培养技术的相关知识 1 由题干中编码蛋白乙的dna序列可知 编码乙的dna序列起始端无atg 转录出的mrna上没有起始密码子aug 2 pcr需要的条件包括引物 耐高温的dna聚合酶 dna模板 四种游离的脱氧核苷酸等 3 动物细胞培养中 细胞具有贴壁生长以及接触抑制的特点 当细胞浓度达到a时 若要使t淋巴细胞继续增殖 需要在培养基中加入胰蛋白酶 或胶原蛋白酶 处理贴壁生长的细胞并分瓶进行传代培养 动物细胞培养过程中 需要在培养箱中通入一定浓度的co2 co2的作用是维持培养液的ph 由图2可知 加入蛋白丙刺激t淋巴细胞增殖的效果明显比加入蛋白甲 乙时低 结合图1中蛋白丙与蛋白甲 乙的dna序列可知 缺少c片段所编码的肽段 会明显降低蛋白刺激t淋巴细胞增殖的效果 知识拓展认识dntpdntp是脱氧核糖核苷三磷酸的缩写 是dctp datp dgtp dttp的统称 d 代表脱氧 n 代表变量a t c g中的一种 dntp可作为生物dna合成以及pcr过程的原料 9 2017天津理综 9 12分 玉米自交系 遗传稳定的育种材料 b具有高产 抗病等优良性状 但难以直接培育成转基因植株 为使其获得抗除草剂性状 需依次进行步骤 试验 获得抗除草剂转基因玉米自交系a 技术路线如下图 1 为防止酶切产物自身环化 构建表达载体需用2种限制酶 选择的原则是 单选 ti质粒内 每种限制酶只有一个切割位点 g基因编码蛋白质的序列中 每种限制酶只有一个切割位点 酶切后 g基因形成的两个黏性末端序列不相同 酶切后 ti质粒形成的两个黏性末端序列相同a b c d 2 下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果 据表可知 细胞脱分化时使用的激素是 自交系的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体 3 农杆菌转化愈伤组织时 t dna携带插入其内的片段转移到受体细胞 筛选转化的愈伤组织 需使用含的选择培养基 4 转化过程中 愈伤组织表面常残留农杆菌 导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长 含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达 其产物能催化无色物质k呈现蓝色 用k分别处理以下愈伤组织 出现蓝色的是 多选 a 无农杆菌附着的未转化愈伤组织 b 无农杆菌附着的转化愈伤组织c 农杆菌附着的未转化愈伤组织d 农杆菌附着的转化愈伤组织 5 组织培养获得的转基因植株 核dna中仅插入一个g基因 进行自交 在子代含g基因的植株中 纯合子占 继续筛选 最终选育出抗除草剂纯合自交系a 答案 共12分 1 a 2 2 4 d乙 3 除草剂 4 bd 5 解析 1 利用双酶切可有效防止出现限制酶切割后的产物 目的基因 载体 发生自身环化及目的基因与载体的任意连接现象 这要求每种限制酶在ti质粒内只有一个切割位点 含目的基因的dna片段被两种限制酶切割形成的黏性末端碱基序列不同 2 细胞脱分化形成愈伤组织 表格信息显示 使用了2 4 d促使细胞脱分化 作为转化受体的幼胚 不仅要易脱分化 而且还要易再分化生芽 生根 故乙的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体 3 构建的基因表达载体中有抗生素抗性基因和除草剂抗性基因 除草剂抗性基因位于t dna片段上 因利用农杆菌转化法转基因时 只有t dna整合到植物细胞染色体dna上 故需使用含除草剂的培养基筛选转化的愈伤组织 4 因 含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达 只有细胞内含有报告基因 成功转化 的愈伤组织 用k处理后出现蓝色 故选bd 5 转基因植株相当于携带g基因的杂合子 转基因植株自交 后代有3 4植株携带g基因 其中纯合子占1 3 易错警示转基因植物培育过程中 筛选成功转化的植物受体细胞的标准利用农杆菌转化法完成植物细胞转基因时 因只有ti质粒的t dna整合到受体细胞染色体dna上 故筛选转化的植物受体细胞只能借助t dna片段上的特殊基因作为筛选标准 而ti质粒上的非t dna片段未导入植物受体细胞 在对转化后的受体细胞筛选时不以此作为选择标准 10 2017江苏单科 33 8分 金属硫蛋白 mt 是一类广泛存在的金属结合蛋白 某研究小组计划通过多聚酶链式反应 pcr 扩增获得目的基因 构建转基因工程菌 用于重金属废水的净化处理 pcr扩增过程示意图如下 请回答下列问题 1 从高表达mt蛋白的生物组织中提取mrna 通过获得用于pcr扩增 2 设计一对与mt基因两端序列互补配对的引物 引物1和引物2 为方便构建重组质粒 在引物 中需要增加适当的位点 设计引物时需要避免引物之间形成 而造成引物自连 3 图中步骤1代表 步骤2代表退火 步骤3代表延伸 这三个步骤组成一轮循环 4 pcr扩增时 退火温度的设定是成败的关键 退火温度过高会破坏的碱基配对 退火温度的设定与引物长度 碱基组成有关 长度相同但的引物需要设定更高的退火温度 5 如果pcr反应得不到任何扩增产物 则可以采取的改进措施有 填序号 升高退火温度 降低退火温度 重新设计引物 答案 8分 1 逆转录cdna 2 限制性核酸内切酶碱基互补配对 3 变性 4 引物与模板gc含量高 5 解析本题主要考查目的基因的获取及pcr技术的有关知识 1 依据题中表述现象分析 mrna合成目的基因的过程应为逆转录过程 由mrna直接逆转录形成的dna为cdna 2 构建重组质粒时需要限制酶和dna连接酶 因此推测在引物中需要增加适当的限制酶识别的位点 设计引物时需要注意避免引物1和引物2之间形成碱基互补配对 3 图中步骤1代表变性 4 退火温度过高会破坏引物与模板链之间的碱基互补配对 由于含g c碱基对多的dna稳定性强 因此在pcr过程中设置的温度应视g c的含量而定 5 温度过高不利于引物与模板结合 引物设计不合理也会影响pcr扩增反应 知识归纳关于引物的几个问题 引物是一小段dna或rna 它能与dna母链的一段碱基序列互补配对 其长度通常为20 30个核苷酸 由于pcr利用了dna的热变性原理 因此温度的高低直接影响dna变性 复性和延伸的过程 特别是复性的过程也即题中的退火过程 它关乎引物是否能与模板链结合 只有结合后才有可能进行 延伸 结合dna结构特点 a与t之间有2个氢键 c与g之间有3个氢键的知识分析 引物中含碱基不同耐温程度不同 其中含c g较多的引物 pcr扩增时温度可适当提高 11 2016课标全国 40 15分 0 587 某一质粒载体如图所示 外源dna插入到ampr或tetr中会导致相应的基因失活 ampr表示氨苄青霉素抗性基因 tetr表示四环素抗性基因 有人将此质粒载体用bamh 酶切后 与用bamh 酶切获得的目的基因混合 加入dna连接酶进行连接反应 用得到的混合物直接转化大肠杆菌 结果大肠杆菌有的未被转化 有的被转化 被转化的大肠杆菌有三种 分别是含有环状目的基因 含有质粒载体 含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌 回答下列问题 1 质粒载体作为基因工程的工具 应具备的基本条件有 答出两点即可 而 作为基因表达载体 除满足上述基本条件外 还需具有启动子和终止子 2 如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选 在上述四种大肠杆菌细胞中 未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的 其原因是 并且和的细胞也是不能区分的 其原因是 在上述筛选的基础上 若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落 还需使用含有的固体培养基 3 基因工程中 某些噬菌体经改造后可以作为载体 其dna复制所需的原料来自于 答案 1 能自我复制 具有标记基因 2 二者均不含有氨苄青霉素抗性基因 在该培养基上均不生长含有质粒载体含有插入了目的基因的重组质粒 或答含有重组质粒 二者均含有氨苄青霉素抗性基因 在该培养基上均能生长四环素 3 受体细胞 解析 1 质粒作为载体应具备的基本条件有 能自我复制 具有标记基因 含有一至多个限制酶切割位点等 2 由题意可知 未被转化的和仅含环状目的基因的细胞中均不含有氨苄青霉素抗性基因 所以在含有氨苄青霉素的培养基上均不能生长 质粒载体上含有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因 插入了目的基因的重组质粒中仅含有氨苄青霉素抗性基因 所以含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞均能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 但前者可以在含有四环素的培养基上生长而后者不能 所以可用含有四环素的培养基 筛选出含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落 3 噬菌体属于病毒 病毒增殖过程中所需的原料 酶等均来自于受体细胞 评分细则 1 能自我复制 具有复制原点 具有复制起始位点 具有标记基因 具有抗性基因 具有限制性核酸内切酶酶切位点 限制酶酶切位点 以上每个得分点2分 任选2个即可得4分 答出一点给2分 2 二者均不含氨苄青霉素抗性基因ampr 在该培养基上均不生长 2分 不含抗性基因为关键词 含有质粒载体 2分 含插入了目的基因的重组质粒 含重组质粒 2分 此两问不分先后顺序 二者均含氨苄青霉素抗性基因ampr 在该培养基上均能生长 2分 含有抗性基因为关键词 四环素 tet 1分 中英文均可得分 3 受体细胞 宿主细胞 2分 12 2016课标全国 40 15分 0 442 图 a 中的三个dna片段上依次表示出了ecor bamh 和sau3a 三种限制性内切酶的识别序列与切割位点 图 b 为某种表达载体的示意图 载体上的ecor sau3a 的切点是唯一的 图 a 图 b 根据基因工程的有关知识 回答下列问题 1 经bamh 酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被酶切后的产物连接 理由是 2 若某人利用图 b 所示的表达载体获得了甲 乙 丙三种含有目的基因的重组子 如图 c 所示 这三种重组子中 不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有 不能表达的原因是 图 c 3 dna连接酶是将两个dna片段连接起来的酶 常见的有和 其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是 答案 1 sau3a 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端 每空2分 共4分 2 甲和丙 2分 甲中目的基因插入在启动子的上游 丙中目的基因插入在终止子的下游 二者的目的基因均不能被转录 3分 其他合理答案可酌情给分 3 e colidna连接酶t4dna连接酶t4dna连接酶 每空2分 共6分 其他合理答案可酌情给分 解析 1 分析图 a 可知 限制酶sau3a 与bamh 切割dna后形成的黏性末端相同 故经这两种酶切割得到的产物可以用dna连接酶进行连接 2 构建基因表达载体时 为保证目的基因能在宿主细胞中成功表达 目的基因应插入在启动子和终止子之间 据此可判断甲 丙均不符合要求 目的基因均不能表达 3 常见的dna连接酶有e colidna连接酶和t4dna连接酶 其中t4dna连接酶既能连接黏性末端又能连接平末端 评分细则 1 第一空答其他两种酶不给分 第二空答 两种酶切割后形成的黏性末端可互补 给全分 2 第二空原因答作 目的基因应插入至启动子与终止子之间 也给分 3 第一空 第二空顺序可颠倒 第三空答案唯一 13 2016天津理综 7 12分 人血清白蛋白 hsa 具有重要的医用价值 只能从人血浆中制备 如图是以基因工程技术获取重组hsa rhsa 的两条途径 1 为获取hsa基因 首先需采集人的血液 提取合成总cdna 然后以cdna为模板 使用pcr技术扩增hsa基因 下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向 请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向 2 启动子通常具有物种及组织特异性 构建在水稻胚乳细胞内特异表达rhsa的载体 需要选择的启动子是 填写字母 单选 a 人血细胞启动子b 水稻胚乳细胞启动子c 大肠杆菌启动子d 农杆菌启动子 3 利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中 需添加酚类物质 其目的是 4 人体合成的初始hsa多肽 需要经过膜系统加工形成正确空间结构才有活性 与途径 相比 选择途径 获取rhsa的优势是 5 为证明rhsa具有医用价值 须确认rhsa与的生物学功能一致 答案 12分 1 总rna 或mrna 2 b 3 吸引农杆菌移向水稻受体细胞 有利于目的基因成功转化 4 水稻是真核生物 具有膜系统 能对初始rhsa多肽进行高效加工 5 hsa 解析本题主要考查基因工程的相关知识 1 总cdna是以mrna为模板逆转录合成的 所以需要提取人的总rna或mrna pcr扩增的原理是dna复制 dna复制时 两条子链的延伸方向相反 所以引物的位置及方向如答案所示 2 要使rhsa基因在水稻胚乳细胞内特异性表达 需要选择水稻胚乳细胞的启动子 3 酚类物质可吸引农杆菌移向水稻受体细胞 使农杆菌ti质粒上的t dna转移到受体细胞并整合到受体细胞染色体的dna上 有利于目的基因成功转化 4 大肠杆菌为原核生物 无内质网和高尔基体 不能对多肽进行高效加工 而水稻是真核生物 具有内质网和高尔基体 可对多肽链进行高效加工 5 要证明rhsa具有医用价值 须确认rhsa与hsa的生物学功能一致 易错警示注意pcr技术的原理是dna复制 dna复制时 两条母链分别作为模板 新合成的两条子链延伸的方向相反 由此确定引物的位置及扩增方向 14 2015课标 40 15分 0 4173 已知生物体内有一种蛋白质 p 该蛋白质是一种转运蛋白 由305个氨基酸组成 如果将p分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸 240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸 改变后的蛋白质 p1 不但保留p的功能 而且具有了酶的催化活性 回答下列问题 1 从上述资料可知 若要改变蛋白质的功能 可以考虑对蛋白质的进行改造 2 以p基因序列为基础 获得p1基因的途径有修饰基因或合成基因 所获得的基因表达时是遵循中心法则的 中心法则的全部内容包括的复制 以及遗传信息在不同分子之间的流动 即 3 蛋白质工程也被称为第二代基因工程 其基本途径是从预期蛋白质功能出发 通过和 进而确定相对应的脱氧核苷酸序列 据此获得基因 再经表达 纯化获得蛋白质 之后还需要对蛋白质的生物进行鉴定 答案 1 氨基酸序列 或结构 1分 其他合理答案也给分 2 pp1 每空2分 共4分 dna和rna 或遗传物质 2分 dna rna rna dna rna 蛋白质 或转录 逆转录 翻译 3分 3 设计蛋白质的结构推测氨基酸序列 每空2分 共4分 功能 1分 解析 1 蛋白质的功能与结构相关 若要改变蛋白质的功能 需要对其结构进行改造 2 确定目的基因的碱基序列后 可通过对现有基因进行改造或者重新合成来获得目的基因 中心法则的内容包括遗传信息的复制 转录 逆转录和翻译 3 蛋白质工程的基本途径是从预期蛋白质功能出发 通过设计蛋白质的结构和推测氨基酸序列 进而确定相对应的脱氧核苷酸序列 获得蛋白质之后要对蛋白质的生物功能进行鉴定 解题关键理清蛋白质工程的基本途径 中心法则的全部内容图解是解答本题的关键 以下为教师用书专用 15 2014课标 40 15分 0 5599 植物甲具有极强的耐旱性 其耐旱性与某个基因有关 若从该植物中获得该耐旱基因 并将其转移到耐旱性低的植物乙中 有可能提高后者的耐旱性 回答下列问题 1 理论上 基因组文库含有生物的基因 而cdna文库中含有生物的基因 2 若要从植物甲中获得耐旱基因 可首先建立该植物的基因组文库 再从中出所需的耐旱基因 3 将耐旱基因导入农杆菌 并通过农杆菌转化法将其导入植物的体细胞中 经过一系列的过程得到再生植株 要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达 应检测此再生植株中该基因的 如果检测结果呈阳性 再在田间试验中检测植株的是否得到提高 4 假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交 子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3 1时 则可推测该耐旱基因整合到了 填 同源染色体的一条上 或 同源染色体的两条上 答案 15分 1 全部 2分 部分 2分 其他合理答案也给分 2 筛选 2分 其他合理答案也给分 3 乙 2分 表达产物 2分 其他合理答案也给分 耐旱性 2分 4 同源染色体的一条上 3分 解析 1 基因组文库包含某种生物的全部基因 cdna文库又称为部分基因文库 含有生物的部分基因 2 植物甲基因组文库中有该种植物的全部基因 从中可筛选出耐旱基因 3 植物乙的耐旱性低 所以植物乙体细胞作为受体细胞 要确定耐旱基因是否正确表达 应检测该基因的表达产物 对于个体水平的检测 应在干旱的田间进行试验 检测植物乙耐旱性是否得到了提高 4 将耐旱基因看作a 不耐旱基因看作a aa aa 耐旱与不耐旱数量比为3 1 则耐旱基因整合到了同源染色体的一条上 评分细则 1 全部 2分 答 所有 全套 整套 也得分 部分 2分 2 筛选 2分 筛选中 筛 有别字扣一分 答 选择 也得分 3 乙 2分 表达产物 2分 答 转录和翻译的产物 得分 只答出 转录 或 翻译 不得分 4 同源染色体的一条上 3分 16 2013课标 40 15分 0 653 阅读如下资料 资料甲 科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中 得到了体型巨大的 超级小鼠 科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草 资料乙 t4溶菌酶在温度较高时易失去活性 科学家对编码t4溶菌酶的基因进行了改造 使其表达的t4溶菌酶第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸 在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键 提高了t4溶菌酶的耐热性 资料丙 兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体 科学家将兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙体内 成功产出兔甲的后代 证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育 回答下列问题 1 资料甲属于基因工程的范畴 将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用法 构建基因表达载体常用的工具酶是和 在培育有些转基因植物时 常用农杆菌转化法 农杆菌的作用是 2 资料乙中的技术属于工程的范畴 该工程是指以分子生物学相关理论为基础 通 过基因修饰或基因合成 对进行改造 或制造一种的技术 在该实例中 引起t4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的序列发生了改变 3 资料丙属于胚胎工程的范畴 胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到种的 生理状态相同的另一个雌性动物体内 使之继续发育成新个体的技术 在资料丙的实例中 兔甲称为体 兔乙称为体 答案 1 显微注射限制性内切酶dna连接酶农杆菌可感染植物 将目的基因转移到受体细胞中 2 蛋白质现有的蛋白质新蛋白质氨基酸 3 同供受 解析 1 将目的基因导入动物细胞的常用方法是显微注射法 由于农杆菌可感染植物 并且其ti质粒上的t dna可整合到受体细胞染色体dna上 故培育转基因植物时常用农杆菌转化法 2 资料乙中的技术对t4溶菌酶完成了改造 这种对现有蛋白质进行改造或制造一种新蛋白质的技术属于蛋白质工程 3 资料丙中兔甲和兔乙的作用分别是提供早期胚胎和接受并孕育胚胎 两者在胚胎工程中分别被称为供体和受体 17 2012课标 40 15分 根据基因工程的有关知识 回答下列问题 1 限制性内切酶切割dna分子后产生的片段 其末端类型有和 2 质粒运载体用ecor 切割后产生的片段如下 aattc gg cttaa为使运载体与目的基因相连 含有目的基因的dna除可用ecor 切割外 还可用另一种限制性内切酶切割 该酶必须具有的特点是 3 按其来源不同 基因工程中所使用的dna连接酶有两类 即dna连接酶和dna连接酶 4 反转录作用的模板是 产物是 若要在体外获得大量反转录产物 常采用技术 5 基因工程中除质粒外 和也可作为运载体 6 若用重组质粒转化大肠杆菌 一般情况下 不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞 原因是 答案 1 黏性末端平末端 2 切割产生的dna片段末端与ecor 切割产生的相同 其他合理答案也可 3 大肠杆菌t4 4 mrna 或rna cdna 或dna pcr 5 噬菌体动植物病毒 其他合理答案也可 6 未处理的大肠杆菌吸收质粒 外源dna 的能力极弱 其他合理答案也可 解析此题考查基因工程应用的相关知识 1 dna分子经限制酶切割产生的dna片段末端通常有黏性末端和平末端两种类型 2 为使运载体与目的基因相连 应使二者被切割后产生的末端相同 故用另一种限制酶切割产生的末端必须与ecor 切割产生的末端相同 3 根据酶的来源不同 dna连接酶分为e colidna连接酶和t4dna连接酶 4 以rna为模板 合成dna的过程称为逆转录 若要体外获得大量dna分子 可以使用pcr技术 5 在基因工程中 通常利用质粒作为运载体 另外噬菌体和动植物病毒也可作为运载体 6 大肠杆菌作为受体细胞时 常用ca2 处理 使之成为能吸收周围环境中dna分子的感受态细胞 1 2018山东聊城一模 38 屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖 寄生于人体细胞内的疟原虫是疟疾的病原体 科学家通过紫外线处理大量青蒿幼苗后 偶然发现一株高产高效植株 进行基因测序发现该植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变 1 如果用高产青蒿关键酶基因的mrna反转录产生的cdna片段与载体连接后储存在一个受体菌群中 这个受体菌群叫做青蒿的 获得的cdna与青蒿细胞中该基因碱基序列 填 相同 或 不同 在提取rna时需要向提取液中添加rna酶抑制剂 其目的是 2 将获得的突变基因导入普通青蒿之前 先构建基因表达载体 图1 2中箭头表示相关限制酶的酶切位点 请回答 a组2016 2018年高考模拟 基础题组 三年模拟 非选择题 用图中的质粒和外源dna构建重组质粒时不能使用sma 切割 原因是 构建重组质粒时 在其目的基因前需要添加特定的启动子 启动子的作用是 3 基因表达载体导入组织细胞后 要通过植物组织培养技术培育出青蒿幼苗 该技术的关键步骤是 鉴定该基因工程是否成功还要进行实验 但是不能直接在培养基上培养疟原虫观察 其原因是 答案 1 cdna文库 或部分基因文库 不同防止rna的降解 2 sma 会破坏质粒的抗性基因及外源dna中的目的基因rna聚合酶识别和结合位点 3 脱分化和再分化接种疟原虫营寄生生活 解析 1 用高产青蒿关键酶基因的mrna反转录产生的cdna片段与载体连接后储存在一个受体菌群中 这个受体菌群叫做青蒿的cdna文库或部分基因文库 由关键酶基因转录形成的mrna没有与关键酶基因的非编码区和内含子对应的片段 所以获得的cdna与青蒿细胞中该基因碱基序列不同 为防止rna的降解 在提取rna时 需要向提取液中添加rna酶抑制剂 2 题图显示 质粒的抗生素抗性基因和目的基因中均存在sma 的识别位点 若使用sma 切割质粒和外源dna 则会破坏质粒的抗性基因及外源dna中的目的基因 因此构建重组质粒时不能使用sma 切割 启动子是rna聚合酶识别和结合位点 驱动基因转录出mr na 3 植物组织培养技术的关键步骤是脱分化和再分化 鉴定该基因工程是否成功还要进行接种实验 但是不能直接在培养基上培养疟原虫观察 其原因是疟原虫营寄生生活 2 2018山东青岛一模 38 2017年冬季我国北方再次爆发流感 专家指出接种流感病毒疫苗仍是预防的有效措施 流感病毒为rna病毒 m基因编码流感病毒表面抗原 m蛋白 请回答下列问题 1 由病毒的rna通过可获得病毒dna 若要通过pcr技术扩增m基因 关键是设计m基因对应的 2 构建m基因表达载体所用的工具酶是 为保证目的基因的表达 重组载体上应含有特定的 复制原点 启动子 标记基因 它能被受体细胞的所识别 以便于催化转录过程 3 若要将m基因表达载体导入大肠杆菌细胞内 以大量生产疫苗 通常先用钙离子处理大肠杆菌 其目的是 4 新型疫苗 dna疫苗 是将含m基因的重组表达载体直接导入人体内 在人体细胞内通过m基因的表达产生 刺激机体通过免疫过程产生 提高机体的免疫能力 答案 1 逆转录引物 2 限制酶和dna连接酶启动子rna聚合酶 3 使大肠杆菌处于能吸收周围环境中dna分子的状态 感受态 4 m蛋白抗体和记忆细胞 解析 1 rna通过逆转录形成dna pcr技术扩增目的基因的关键是设计m基因对应的引物 2 构建基因表达载体需要的工具酶为限制酶和dna连接酶 基因表达载体上必须含有启动子 启动子是rna聚合酶的识别位点 以启动目的基因的转录过程 3 将目的基因导入大肠杆菌时 一般要先用钙离子处理大肠杆菌 以使大肠杆菌处于能吸收周围环境中dna分子的状态 即感受态 4 m基因的表达产物是m蛋白 m蛋白会刺激机体通过免疫过程产生抗体和记忆细胞 提高机体的免疫能力 3 2018湖北七市教科研协作体一模 38 基因工程是从分子水平对基因进行操作 从而实现人们定向改造生物 得到人们所需要的生物性状或生物产品的技术 目的基因的获取是基因工程的第一步 常见的方法是构建基因组文库 请分析并回答下列问题 1 构建基因组文库的一般步骤 提取某种生物体内的 用适当的限制酶处理 得到一定范围大小的dna片段 dna片段分别与载体结合 得到重组载体 将重组载体导入的群体中储存 基因组文库构建完成 2 与基因组文库相比 cdna文库的基因数相对要少 其原因是 3 载体与dna片段结合前 需要使用同种的限制酶处理 其目的是 4 受体菌被导入重组dna分子之前 常用处理 提高导入的成功率 答案 1 全部dna或全部基因受体菌 2 cdna文库只能收集到生物发育到某时期已发生转录的基因 而基因组文库能收集到全部基因 3 获得与dna片段相同的黏性末端 4 ca2 解析 1 构建基因组文库的一般步骤为 提取某种生物体内的全部dna或全部基因 用适当的限制酶处理 得到一定范围大小的dna片段 dna片段分别与载体结合 得到重组载体 重组载体导入受体菌的群体中储存 基因组文库构建完成 2 cdna文库只能收集到生物发育到某时期已发生转录的基因 而基因组文库能收集到全部基因 因此与基因组文库相比 cdna文库的基因数相对要少 3 载体与dna片段结