【步步高】高考生物一轮复习 第十一单元 第40讲 无菌操作技术实践教学案 苏教版 (1).DOCVIP

【步步高】2015届高考生物一轮复习 第十一单元 第40讲 无菌操作技术实践教学案 苏教版1涵盖范围本单元包括选修1全部内容无菌操作技术实践、发酵技术实践、酶的应用技术实践和生物化学与分子生物技术实践。2考查内容及形式(1)微生物的培养与应用多以简答题形式考查。(2)酶的应用，常与必修1中酶的本质、特性等知识有机结合考查。(3)植物的组织培养技术常与植物有效成分提取相结合考查。(4)发酵技术实践应用多以简答题形式考查。(5)酶的应用、生物化学与分子生物学技术多以选择题形式考查。3复习指导(1)复习线索以转基因微生物培养酶生产酶应用为线索，系统复习微生物的分离与培养、酶的应用技术实践。以技术手段、技术流程为主线，复习发酵、组织培养、有效成分及dna、蛋白质等有关知识。(2)复习方法列表比较法dna、蛋白质的分离。实践联系发酵技术、植物有效成分提取技术。实验联系植物组织培养、微生物培养实验过程。第40讲无菌操作技术实践考纲要求1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择利用。4.植物的组织培养。考点一微生物培养基的配制、无菌操作和接种技术重要程度：1 培养基的定义及分类(1)概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。(2)营养成分：碳源、氮源、水、无机盐等。(3)分类：按所含化学成分，培养基可分为天然培养基和固体培养基。2 无菌操作与接种技术(1)灭菌和消毒灭菌是指采用强烈的物理学或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长和繁殖能力的方法。消毒：用较为温和的物理学方法或化学方法杀灭物体上绝大多数微生物的方法。(2)灭菌的方法：干热灭菌或湿热灭菌(如高压蒸汽灭菌等)。(3)无菌操作微生物接种技术的关键培养基、试管、培养皿、接种器械在接种前都需要灭菌。操作人员及操作环境要求消毒。(4)接种技术划线接种平板划线法斜面划线法：主要用于试管中的斜面培养基涂抹平板接种涂抹平板法：用无菌玻璃刮铲将菌种涂在培养基表面混合平板法：将菌种混合于培养基中倒平板穿刺接种用带有菌种的接种针垂直刺入培养基后拔出3 培养基的配制(1)配制原则：为所培养微生物的生长和繁殖或积累代谢产物提供所需的营养基质。(2)配制过程(以大肠杆菌的接种与分离为例)：配制培养液调节ph分装包扎灭菌搁置斜面。1 消毒和灭菌的不同点比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能2 涂抹平板法和混合平板法的异同(1)过程如图(2)结果不同涂抹平板法：细菌菌落通常仅在平板表面生长。混合平板法：细菌菌落出现在平板表面及内部。(3)目的相同：分离各种目的微生物。易错警示(1)平板分离法是微生物分离的最常用方法，其中涂抹平板法和混合平板法可定量地测定微生物。(2)倒平板的适宜温度是50 左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。(3)平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。1 下列有关微生物培养与应用的说法，正确的是()a天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基b接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理c大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段d分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源答案c解析天然培养基是成分不明确的培养基，并不是不需加工配制的培养基；实验者的双手需进行消毒处理；分离分解尿素的细菌时，尿素是唯一的氮源而不是唯一的碳源。2 有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有_和_等。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。答案(1)原油选择(2)平板划线法涂抹平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰解析(1)可以将所需要的微生物从混杂的微生物群中分离出来的培养基为选择培养基。欲筛选出能降解原油的菌株，则培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，能降解原油的细菌才能在只含原油这一碳源的培养基上生存。(2)分离纯化菌种时，接种的方法有平板划线法和涂抹平板法，其目的都是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单菌落，以便于纯化菌种。(3)降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。(4)实验室常用的灭菌方法有干热灭菌(如培养皿)和高压蒸汽灭菌(如培养基)等。无菌技术要求整个实验操作都要在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。考点二微生物的筛选和计数重要程度：1 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用涂抹平板法。(3)实验流程：土壤取样样品的稀释微生物的培养与观察细菌的计数。2 分解纤维素的微生物的分离(1)土壤中能分解纤维素的微生物种类很多，有细菌、真菌等，它们能分泌纤维素酶，将纤维素分解成小分子糖类物质以满足自身生命活动的需要，同时也能改善土壤的结构，提高土壤的肥力。(2)纤维素分解菌的筛选原理 纤维素分解菌 红色复合物红色消失，出现透明圈筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。实验流程土壤取样：富含纤维素的环境选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度梯度稀释：制备系列稀释液涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落1 筛选菌株的原则是：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、ph等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。2 探究菌株筛选原理的不同点土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，ph升高，说明细菌能分解尿素选择培养基的成分：纤维素作为唯一的碳源鉴定方法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈3 在微生物的筛选与计数实验中，设置对照实验的目的是：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。4 怎样设置证明培养基未被污染的对照？用空白培养基作对照。5 怎样设置证明选择培养基选择作用的对照？用牛肉膏蛋白胨培养基接种等量同种菌液作对照。易错警示(1)为了使结果接近真实值，应设置三个或三个以上的平板，计算出菌落平均数。 (2)计算时明显偏离实际值(本组实验其他平板计数值)的要舍弃掉后求平均值。(3)对照实验的设计首先要明确设计的目的，分析出实验的自变量之后才能准确设计。1 下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是()a微生物培养前，需对培养基进行消毒b测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法c分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度d分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源答案a解析微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度，因为不同的微生物在土壤中的含量不同；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源。2 自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。实验步骤：(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果，你选用_法接种样品。(3)适宜温度下培养。结果分析：(1)测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是_，其理由是_。a一个平板，统计的菌落数是230b两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240c三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平均值260d四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和250，取平均值250(2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是_(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 ml)。(3)用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的数量_，因为_。答案实验步骤：(2)涂抹平板结果分析：(1)d在设计实验时，一定要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否合理(2)2.34108(3)多当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落解析实验步骤：为了得到更加准确的结果，应用涂抹平板法接种样品。结果分析：(1)选取多个菌落数相差不大的平板计数，取其平均值。(2)2340.11052.34108。(3)因为菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式：每克样品中的菌株数(cv)m，其中，c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，v代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，m代表稀释倍数。操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。考点三植物组织培养技术重要程度：1 原理：植物细胞具有全能性。2 植物组织培养的基本过程(1)脱分化：由已经分化的植物细胞或组织产生愈伤组织的过程。(2)再分化：在一定条件下继续培养脱分化的愈伤组织，可以重新诱导根、芽等器官的分化。(3)愈伤组织：是一种具有分生能力的薄壁细胞。3 植物激素与植物组织培养的关系(1)生长素、细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化、再分化的关键激素。(2)生长素和细胞分裂素之间的关系的比值4 示例：植物组织培养技术的操作流程(以天竺葵的组织培养为例)5 应用(1)快速繁殖优良植物株系。(2)培育农作物新品种。(3)保存和运输种质。(4)获取脱毒苗。探究植物激素对实验结果的影响生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，其作用及特点如下：(1)在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。(2)使用顺序不同，结果不同，具体如下：使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但细胞不分化先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高(3)用量比例不同，结果也不同。1 草莓生产中传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播给后代，导致产量降低、品质变差。运用微型繁殖技术可以培育出无病毒幼苗。草莓微型繁殖的基本过程如下：外植体愈伤组织芽、根植株请回答：(1)微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取_作为外植体，其依据是_。(2)在过程中，常用的ms培养基主要成分包括大量元素、微量元素和_。在配制好的培养基中，常常需要添加_，有利于外植体启动细胞分裂形成愈伤组织。接种后25 d，若发现外植体边缘局部污染，原因可能是_。(3)在过程中，愈伤组织在诱导生根的培养基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是_。答案(1)茎尖(或根尖)茎尖(或根尖)病毒极少，甚至无病毒(2)有机物植物激素外植体消毒不彻底(3)培养基中生长素类物质用量与细胞分裂素类物质用量的比值偏低解析(1)因茎尖(或根尖)病毒极少，甚至无病毒，所以常用其作为外植体培育无病毒植株。(2)在植物组织培养的培养基中，除了添加植物必需的矿质元素外，还要添加有机物，添加植物激素有利于启动细胞分裂，实现脱分化形成愈伤组织，并且可诱导愈伤组织细胞的再分化过程。若对外植体消毒不彻底，会造成外植体边缘局部污染。(3)在培养基中生长素与细胞分裂素的用量比值不同，诱导生根发芽的结果不同，当比值低时，有利于发芽；比值高时，有利于生根。高考模拟提能训练高考题组1 (2011江苏卷，16)下列有关植物组织培养的叙述，正确的是()a愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞b二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株c用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子d植物耐盐突变体可通过添加适量nacl的培养基培养筛选而获得答案d解析愈伤组织是一团排列疏松而无规则、高度液泡化、呈无定形状态、具有分生能力的薄壁细胞，不具有特定的结构和功能，a项错误；二倍体植株的花粉中只含一个染色体组，培养得到的个体为单倍体，高度不育，只有幼苗用秋水仙素处理后得到的植株才能稳定遗传，b项错误；人工种子中包裹的是再分化形成的胚状体或不定芽、顶芽和腋芽等，但不能是愈伤组织，c项错误；用特定的选择培养基可筛选出所需的突变体类型，如植物耐盐突变体的筛选可利用加适量nacl的培养基进行，d项正确。2 (2013新课标全国卷，39)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在37 培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有a、b、c、d 四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含a的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素a_；含b的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素b_；含c的滤纸片周围的透明圈比含a的小，说明_；含d的滤纸片周围的透明圈也比含a的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素d的_。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素_。答案(1)平板划线涂抹平板(2)涂抹平板(3)敏感不敏感该致病菌对c的敏感性比对a的弱耐药菌(4)a解析微生物纯化的方法主要有平板划线法和涂抹平板法。根据微生物的特点对其进行一系列浓度梯度稀释，然后用涂抹平板法接种于固体培养基表面，然后在适宜条件下培养；抗生素是由真菌产生的，可以抑制生长、繁殖或杀死细菌等致病菌的一类物质，含a的滤纸片周围出现透明圈，说明有抗生素a的地方该致病菌受到抑制；b的周围没有透明圈，说明致病菌对抗生素b不敏感，通过c的透明圈要比a的透明圈小，说明该致病菌对c的敏感性比a的弱；d出现了透明圈，说明该致病菌对d敏感，但是在透明圈上出现一个菌落，又排除杂菌污染，判断此菌落的微生物对抗生素d产生了耐药性。根据以上分析，为达到抗菌的目的，最好选择抗生素a。模拟题组3 下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()a用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板b取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 ml，分别涂布于各组平板上c将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时d确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数答案d解析检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 ml，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30300的一组平板为代表进行计数。4 从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是：采集菌样富集培养纯种分离性能测定。(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从合适的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从_环境中采集。(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择_的培养基，并在_条件下培养。(3)接种前要对培养基进行_处理。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_条件下进行。(4)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。获得图a效果的接种方法是_，获得图b效果的接种方法是_。一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是_，应当怎样操作才可避免此种现象？_。(5)如果探究温度对纤维素酶活性的影响，自变量是_，应该保持_等不变(至少答两项)。答案(1)海滩等高盐(2)以淀粉为唯一碳源高温(3)高压蒸汽灭菌无菌(4)涂抹平板法平板划线法菌液浓度过高增大稀释倍数(或培养过程被杂菌污染严格无菌操作；或用接种环划下一区域前接种环没有灭菌每划一个新区域前都要对接种环进行灭菌处理)(5)温度纤维素的量与浓度、反应时间、ph解析(1)筛选菌种应从适于目的菌种生长、繁殖的环境中寻找，故培养噬盐菌应从高盐环境中采集。(2)富集培养时培养基及培养条件应能促进目的菌的生长、繁殖。(3)微生物的分离及培养中必须保证无菌，包括培养基的灭菌和操作过程的灭菌等。(4)纯化培养中接种方法有涂抹平板法和平板划线法，前一种方法形成的菌落分布较均匀，后一种方法形成的菌落分布不均匀，先划线的部分菌落密集甚至相连，后划线的部分菌落分布稀疏。(5)探究温度对酶活性的影响时，温度为自变量，酶活性为因变量，其他变量如底物和酶的用量、ph、反应时间等均为无关变量。1 (2012北京卷，5)高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是()a将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中b将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上c将转基因植物叶片接种到无菌培养基上d将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上答案c解析在酿制葡萄酒的过程中，如果灭菌不彻底会影响葡萄酒的品质，但影响不大；在制作腐乳的过程中，发酵过程有多种微生物的参与，所以该过程不进行严格的无菌操作对结果影响不大；在植物组织培养过程中，如果灭菌不彻底，杂菌产生的物质会影响外植体的生长，甚至杀死外植体，导致培养失败，对结果影响最大；土壤浸出液本身就含有大量的杂菌，另外在选择培养基上只能生存我们所要筛选的细菌，所以无菌操作不严格，对结果影响也不会太大。2 如图为某二倍体植株花药中未成熟的花粉在适宜培养基上形成完整植株的过程。下列有关叙述正确的是()a过程表示脱分化，表示再分化b过程需要照光c过程说明花粉细胞具有全能性d通过过程获得的完整植株自交后代不会发生性状分离答案c解析图中过程表示脱分化，表示再分化，过程表示细胞增殖；过程需要避光，过程需要照光；过程是植物组织培养过程，说明花粉细胞具有全能性，过程获得的完整植株属于单倍体，高度不育，故选c。3 欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中，不正确的是()a将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释b同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板c可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照d用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌答案d解析为了获得单个菌落，应将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，a正确；为了使结果更加准确，同一浓度的土壤稀释液至少要涂布3个平板进行重复实验，然后计算平均值，b正确；加入刚果红的培养基用来筛选纤维素分解菌，d错误。4 苹果醋是指以苹果汁经发酵而成的苹果原醋，再兑以苹果汁等原料而制成的饮品。既有淡淡的醋味，又有果汁的香甜，喝起来非常爽口。下图是苹果醋的制作流程简图，请据图回答下列问题：(1)过程中使用到的微生物是_，属于生态系统成分中的_。若要检测是否产生了酒精可用_试剂进行检测。(2)过程中使用到的微生物是_，该微生物的代谢类型是_型。该微生物可以从食醋中分离纯化获得，方法是：第一步：配制培养基。该培养基必须含有微生物生长所需要的_等基本营养成分。第二步：对培养基用_法进行灭菌。第三步：接种。微生物常用的接种方法有_、_。第四步：培养。温度控制在_。第五步：挑选符合要求的菌落。答案(1)酵母菌分解者重铬酸钾(2)醋酸菌异养需氧水、碳源、氮源、无机盐高压蒸汽灭菌平板划线法涂抹平板法3035 解析(1)过程利用了酵母菌无氧呼吸分解葡萄糖产生酒精的原理。酵母菌属于生态系统中的分解者。(2)过程中醋酸菌利用培养液中的乙醇生成了醋酸。醋酸菌的代谢类型是异养需氧型。对微生物进行培养时，要对培养用具、培养基进行灭菌处理。醋酸菌的最适生长温度为3035 ，故应将培养温度控制在3035 范围内。5 急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水中细菌、病毒的含量是有效监控疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水有关的问题：(1)检测大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用玻璃刮铲分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为_。下图所示的四种菌落分布图中，不可能由该方法得到的是_。(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要对照组？_。为什么？_。(3)有三种材料或用具需要消毒或灭菌：培养细菌用的培养基与培养皿；玻棒、试管、烧瓶和吸管；实验操作者的双手。其中需要消毒的是_，需要灭菌的是_。(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？_。答案(1)涂抹平板法d(2)需要因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)(3)(4)通过无菌操作向试管内注入一定量待测水样。再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37 恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌解析(1)平板划线法所得菌落集中呈线状，d的菌落分布情况可判断为平板划线法接种。(2)为判断培养基灭菌是否合格，本实验需要对照。(3)消毒是指使用较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。对人的手不能进行灭菌。(4)根据题目意思大肠杆菌能产生气体，可对培养基进行接种观察有无气泡产生来判断大肠杆菌的有无。6 (1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行_(消毒、灭菌)；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。(3)若用涂抹平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案(1)温度酸碱度易培养生活周期短(2)灭菌消毒损伤dna的结构(3)比例合适(4)鉴别(或分类)(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生(6)灭菌解析(1)影响微生物培养的因素除了营养条件外，外界条件主要包括温度、酸碱度和渗透压等。由于大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，所以常作为遗传学研究的实验材料。(2)对培养基和培养器皿要进行灭菌，对操作者的双手需要进行清洗和用酒精消毒，静止空气中的细菌在用紫外线照射后能够使蛋白质变性，并损伤dna的结构，使细菌死亡。(3)样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目，实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得的菌落数在30300之间。(4)菌落的特征是判断微生物种类的重要依据，对获得的纯菌种可以依据菌落的特征对细菌进行初步检测。(5)要判断固体培养基是否被污染，可将未接种的培养基在适宜的温度下培养一段时间，若发现有菌落说明培养基已被污染。(6)进行微生物培养时，使用过的培养基及培养物必须经灭菌后才能丢弃，防止培养的微生物扩散到环境中，造成危害。7 请回答下列有关微生物的一些问题。(1)微生物的分布：微生物主要分布在富含_的土壤表层；不同微生物对ph的要求不同，细菌常生活在酸碱度_的潮湿土壤中。(2)微生物的消毒和灭菌：在天竺葵的组织培养中，对外植体常用酒精和_进行消毒。在微生物培养中，对培养基常用_方法进行灭菌。如果要检测灭菌是否彻底，可以采用的方法是_。(3)微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生酵母菌发酵产生酒精，请写出该过程的化学反应式：_。在果醋制作时，运用醋酸菌在_和糖源充足时，将糖分解成醋酸。(4)微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是_和_。(5)微生物的鉴定：为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的_(选择、鉴别)培养基中加入_指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变_色。答案(1)有机质接近中性(2)氯化汞高压蒸汽灭菌将灭菌过的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生(3)c6h12o62c2h5oh2co2大能量有氧(4)平板划线法涂抹平板法(5)选择酚红红解析(1)微生物主要分布在有机质丰富的土壤表层，细菌常生活在酸碱度接近中性的潮湿土壤中。(2)植物组织培养时，对外植体常用酒精和氯化汞消毒，对培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌；可通过在适宜的温度下放置灭菌过的培养基，看其是否有菌落产生来确定培养基灭菌是否彻底。(3)醋酸菌为需氧型生物。(4)最常用的微生物接种方法有平板划线法和涂抹平板法。(5)用选择培养基筛选目的菌尿素分解菌，加入酚红指示剂，若存在尿素分解菌，指示剂将变红色。8 (2012江苏卷，31)某研究组对籼稻开展了组织培养及相关研究，请回答下列问题：(1)2,4d常用于籼稻愈伤组织的诱导，对形态的发生有一定的抑制作用。为促进愈伤组织再分化，在配制分化培养基时需_(填“升高”“保持”或“降低”)2,4d的浓度。(2)当籼稻愈伤组织在只含有细胞分裂素的培养基上培养时，出现具有分生能力的绿色芽点，但不能继续出芽，通常在培养基中添加_，以促进幼苗形成。(3)研究中用显微镜可以观察到的现象是_(填下列序号)。绿色芽点细胞排列松散刚融合的籼稻和稗草杂交细胞发生质壁分离胚状体细胞中有叶绿体分化的愈伤组织内各细胞的形态大小一致(4)经组织培养筛选获得的籼稻叶绿素突变体，其叶绿素a与叶绿素b的比值显著大于对照，叶绿素总量不变。某同学用_(填序号：绿色；红色；蓝紫色；黄色)光照射突变体和对照叶片，检测到两者光合放氧速率差异不大。若取等量色素提取液进行层析，会发现突变体第_条色素带(自上而下)窄于对照组。(5)胚乳(3n)由一个精子与两个极核受精发育而成。若用籼稻种子的胚乳诱导愈伤组织，培育三倍体，需适时剔除胚，以免胚的存在影响愈伤组织细胞的_，还可避免再生苗中混有_