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专题2 微生物的培养与应用 本章练测建议用时实际用时满分实际得分90分钟100分6一、选择题(本题共20小题,每小题3分,共60分。)1.发酵工程的第一个重要工作是选择优良的单一纯种。消灭杂菌、获得纯种的方法不包括( )a.根据微生物对碳源需要的差别,使用含不同碳源的培养基b.根据微生物需要的生长因子的种类,在培养基中增减不同种类的生长因子c.根据微生物遗传组成的差异,在培养基中加入不同比例的核酸d.根据微生物对抗生素敏感性的差异,在培养基中加入不同种类的抗生素2.下列有关培养基配制原则的表述,正确的是( )a.任何培养基都必须含有碳源、氮源、无机盐、生长因子b.碳源和氮源必须具有一定比例,碳元素的含量最多,其次为氮元素c.微生物的生长除受营养因素影响外,还受到ph、o2、渗透压的影响d.营养物质的浓度越高越好3.下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤,其中正确的是( )a.培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后,直接补充蒸馏水至100 mlb.用物质的量浓度为1 mol/l的naoh调节ph为5.06.0c.加压至100 kpa之前,要彻底排出锅内的冷空气d.将接种环放在酒精灯上灼烧,灭菌后立即伸入盛菌液的试管内挑取少量菌种4.下表为某培养基的配方,有关叙述正确的是( )成分含量牛肉膏10 g葡萄糖10 gk2hpo42 g伊红0.4 g美蓝0.065 g青霉素1万单位琼脂适量蒸馏水1 000 mla.能在此培养基上生长的大肠杆菌,拟核上有抗青霉素的基因b.此培养基是天然鉴别培养基c.此培养基可以用来检测自来水中细菌的含量是否符合饮用水标准d.此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中5.下列关于大肠杆菌培养的叙述中,不正确的( )a.在大肠杆菌培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑ph、温度和渗透压等条件b.在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需对培养基和培养皿进行消毒c.若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数,要想使所得估计值更接近实际值,除应严格操作、多次重复外,还应保证待测样品稀释的稀释度d.使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃6.下列常用的无菌操作中错误的是( )a.无菌操作的目的是防止杂菌污染b.用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒c.实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行d.玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦试7.某学者欲研究被石油污染过的土壤中的细菌数并从中筛选出能分解石油的细菌。下列有关操作中错误的是( )a.利用平板划线法对细菌进行计数b.用以石油为唯一碳源的培养基筛选c.采用稀释涂布平板法分离菌种d.称取和稀释土壤时应在火焰旁8.尿素是尿素分解菌的氮源,因此在配制培养基时应注意( )a.葡萄糖在培养基中的含量越多越好b.尿素在培养基中的含量越少越好c.尿素分解菌有固氮能力,故培养基中的尿素为无机氮d.尿素分解菌无固氮能力,故培养基中的尿素为化合态氮9.分离土壤中分解尿素的细菌时,对培养基的要求包括( )加尿素 不加尿素 加琼脂 不加琼脂 加葡萄糖 不加葡萄糖 加硝酸盐 不加硝酸盐a. b.c. d.10.菌落特征常作为鉴定微生物种类的依据。下列关于菌落的叙述,正确的是( )a.一个菌落就是单个微生物在液体培养基上迅速生长繁殖,并以此母细胞为中心形成的子细胞团b.不同种类的微生物其菌落特征完全不一样c.同一种类的微生物其菌落特征完全一样d.不同种类的微生物所表现出来的菌落差异是个体细胞形态差异的反映11.测定土壤中细菌的数量一般选104、105和106倍的稀释液进行平板培养,而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释液,其原因是( )a.细菌个体小,真菌个体大b.细菌易稀释,真菌不易稀释c.细菌在土壤中的含量比真菌高d.随机的,没有原因12.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是( )a.对分离的菌种做进一步的鉴定b.筛选出能分解尿素的细菌c.培养基中还缺乏酚红指示剂作为细菌的营养d.如果指示剂变蓝我们就能准确地认定该菌能分解尿素13.在培养基中加入尿素(唯一氮源),以分离出能分解尿素的细菌,这种加入尿素的培养基在功能上属于( )a.选择培养基 b.固体培养基c.液体培养基 d.鉴别培养基14.要将能分解纤维素的细菌从土壤中分离出来,应将它们接种在( )a.加入指示剂的鉴别培养基上b.含有蛋白胨的固体培养基上c.只含纤维素粉而无其他碳源的选择培养基上d.含四大营养要素的培养基上15.在对纤维素分解菌进行选择培养时,用液体培养基的目的是( )a.用液体培养基可获得大量菌体b.纤维素分解菌适宜在液体培养基中生长c.用液体培养基可以充分利用培养基中的营养物质d.用液体培养基可获得高纯度的纤维素分解菌16.在温度条件适宜的热带雨林,纤维素分解菌分解落叶的速度非常快。下列关于微生物的代谢速度与高等动植物相比快得多的叙述中,错误的是( )a.细胞的表面积与体积比很大b.与外界环境物质交换迅速c.适宜条件下微生物的繁殖速度非常快d.微生物体内酶的种类比其他生物多17.下列关于微生物分离和培养的叙述错误的是( )a.微生物培养前,需对培养基进行消毒b.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法c.分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度d.分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一的氮源18.微生物培养过程中,要十分重视无菌操作,现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作,防止杂菌污染,请分析下列操作中错误的是( )煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 接种操作要在酒精灯火焰附近进行 无菌繁殖脱毒苗时,植物的外植体要进行消毒 家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 培养基要进行高压蒸汽灭菌 加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌a. b. c. d.19.以下有关生物技术实践的叙述不正确的是( )a.在大肠杆菌的分离和培养实验中,划线后盖好培养皿盖,要将培养皿倒置培养b.某同学用带盖的瓶子制备葡萄酒时,每隔12 h左右将瓶盖拧松一次,其目的是向瓶中通气,以保证微生物的发酵c.将显色后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较,可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量d.可以用稀释涂布平板法来测定土壤溶液中的活菌数目20.下列关于微生物培养和利用的叙述错误的是( )a.利用稀释涂布平板法只能分离微生物而不能对微生物进行计数b.接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落c.以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌d.用大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量变化是先增加后减少二、非选择题(共40分)21.(9分)根据所学生物学知识,回答下列有关微生物分离与纯化的问题。(1)微生物所需要的营养成分一般包括 、 、水和无机盐。(2)培养微生物时,除考虑微生物生长所需的营养外,还要考虑微生物生长所需的温度、 以及是否需要o2等。(3)对培养基进行灭菌时,多采用 法,而对接种环灭菌时则用 法。(4)平板划线时,为保证每次划线都从上次划线末端的微生物开始,每次划线前都要 ,平板划线结束后,最后一次划的线不能与第一次划的线 。(5)脲酶可以将尿素分解为nh3,从而使尿素溶液ph升高,这可用 试剂来检验。用纤维素作唯一碳源的培养基培养微生物,得到的纤维素分解菌中可能还混有 。22.(11分)现在大力提倡无纸化办公,但是仍然不可避免的每年要产生大量的废纸,废纸的主要成分是木质纤维,人类正努力将其转化为一种新的资源乙醇。下图是工业上利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工艺流程,请回答相关问题。(1)自然界中环节需要的微生物大多分布在 的环境中。将从土壤中获得的微生物培养在以 为碳源并加入 的培养基上,筛选周围有 的菌落。(2)如上所述的筛选中获得了三个菌落,对它们分别培养,并完成环节,且三种等量酶液中酶蛋白浓度相同,则你认为三种酶液的活性 (填“一定相同”“不一定相同”或“一定不同”),可以通过 进行定量测定而确定。(3)根据测定结果,环节常选择木霉,则环节中获得的酶是 酶。该酶至少包括 三个组分。(4)生产中可以满足环节的常见菌种是 ,为了确保获得产物乙醇,环节要注意 ,过程要注意避免 。23.(10分)富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一,主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同,限定环境条件,使仅适应该条件的微生物旺盛生长,从而使其在群落中的数量大大增加,人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点,从物理、化学、生物等多个方面进行选择,如温度、ph、紫外线、压强、光照、氧气、营养等。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。据图回答问题。(1)本实验所需培养基为 ,碳源为 。(2)实验原理是 。(3)重复培养的目的是 。(4)的菌落中大部分是能降解 的微生物。(5)为 组,为 组,设置的目的是 。(6)采用 法。接种到的培养基中时,在操作过程中为防止污染应注意的事项是 。24.(10分)在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解,长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤,可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低,含一定量该除草剂的培养基不透明)。请回答下列问题。(1)制备土壤浸出液时,为避免菌体浓度过高,需将浸出液进行 处理。(2)要在长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌,从物理性质、用途方面来看,上述培养皿中培养基的特点是 。(3)在划线培养时,只有很少菌落出现,大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是 或有氧条件抑制了这些细菌的生长。(4)在固体培养基上形成的菌落中,无透明带菌落利用的氮源主要是 ,有透明带菌落利用的氮源主要是 ,据此可筛选出目的菌。(5)科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株a和b,然后对突变株a和b进行实验,结果如下表所示:接种的菌种一般培养基实验处理及结果a不生长添加营养物质甲,能生长b不生长添加营养物质乙,能生长a+b能生长不添加营养物质甲、乙就能生长突变株a不能在一般培养基上生长的原因是 。突变株a和b混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是 。参考答案1.c 解析:由于不同的微生物对碳源、氮源、无机盐、生长因子的需求不同,可以根据微生物的生长需求来配制特殊的培养基,以获得单一的纯种;也可以根据其对抗生素的敏感性不同,加入不同的抗生素来获得单一的纯种。2.c 解析:不同的微生物需要的营养物质不同,如自生固氮菌能利用空气中的n2为氮源,因而培养基中无须添加氮源;营养物质浓度太高,会导致微生物失水甚至死亡。3.c 解析:此题是对实验操作步骤的考查。a选项应该先加水,后加热溶化,否则培养基会被烧焦;b项用物质的量浓度为1 mol/l的naoh调节ph是正确的,但金黄色葡萄球菌是细菌,本实验应把ph调到7.47.6;c选项加压至100 kpa之前,要彻底排出锅内的冷空气,是为了使高压锅能够在很短的时间内达到较高的温度,使锅内充满水蒸气,并使水蒸气分子运动达到尽可能快的速度,穿透各种微生物菌体及芽孢等;d选项接种环放到酒精灯上灼烧灭菌是正确的,但不能立即伸入菌种试管内,否则会烫死菌种。4.d 解析:此表表示鉴定大肠杆菌的合成培养基;抗性基因一般位于大肠杆菌的质粒上,而不是拟核上;此培养基只能用来检测自来水中大肠杆菌的含量是否符合饮用水标准。5.b 解析:本题主要考查微生物培养和无菌操作的相关知识。培养过程中,除营养条件要满足需要外,还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件是否适宜;灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,所以对培养基和培养皿要进行灭菌,而不是消毒;使用稀释涂布平板法时要保证样品稀释比例合适,这样才会有更科学的数据;有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素,并可能导致肠道出现严重症状,所以使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。6.d 解析:无菌操作过程中对操作者应用较温和的方法进行消毒。实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行,防止瓶口的微生物污染培养基。对于无菌操作用到的玻璃器皿要用干热灭菌的方法彻底消灭其中的微生物,用酒精擦拭不能达到的目的。7.a 解析:平板划线法能对细菌进行分离纯化,但不能进行细菌的计数;由题干信息看出,筛选出能分解石油的细菌只能用以石油作为唯一碳源的选择培养基进行筛选;通常采用稀释涂布平板法分离分解石油的细菌菌种并且进行计数;为了防止空气中的杂菌进入土样中,称取和稀释土壤时应在火焰旁。8.d 解析:分解尿素的细菌不能进行自主固氮,所需氮源必须是化合态的尿素;作为培养微生物的培养基,各种营养成分的比例必须适中,比例过高或过低都会对微生物生长起抑制作用。9.c 解析:土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶,将尿素分解生成氨,利用尿素中的氮合成自身有机物。培养基中只加尿素,分解尿素的细菌能生长,其他微生物不能生长;分离微生物要用固体培养基;土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物,需要加葡萄糖作为碳源。10.d 解析:本题考查菌落的概念及特征。理解菌落的概念、特征应注意以下几点:单个或少数细菌大量繁殖形成的子细胞群体;在固体培养基上繁殖形成的;肉眼可见;不同种类的细菌形成的菌落特征不同。不同种类微生物的菌落特征各有特点,但彼此之间存在一定的相似性,同种微生物的菌落特征受培养时间、营养物质的含量与种类等影响也会有所差异。因此,a、b、c项都错误,只有d项正确。11.c 解析:土壤中细菌的含量多于真菌,因此稀释涂布时,细菌的稀释倍数要大于真菌的稀释倍数,这样才能使平板上培养出的菌落清晰易辨。12.a 解析:筛选能分解尿素的细菌用选择培养基即可,不需要加指示剂。加入指示剂的目的是对要分离的菌种做进一步的鉴定。13.a 解析:培养基按功能分类包括选择培养基和鉴别培养基,按物理性质分类包括液体培养基、固体培养基和半固体培养基。该培养基能分离出以尿素为唯一氮源的细菌,故是选择培养基。14.c 解析:纤维素分解菌的选择条件是以纤维素为唯一碳源。15.a 解析:液体培养基中菌体大量繁殖,可获得大量菌株,有利于进一步筛选。16.d 解析:微生物细胞体积小,表面积相对增大,加速了与外界环境的物质交换。在适宜条件下,微生物繁殖很快,更加快了营养物质的消耗。此题中热带雨林中的微生物可有效分解纤维素,因此分解纤维素的酶多,而不是酶的种类比其他生物多。17.a 解析:本题考查微生物的分离与培养方法。消毒和灭菌是不同的,消毒只能杀死物体表面和内部一部分微生物,而灭菌是杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。微生物培养前,要对培养基进行灭菌,这样才能避免培养过程中杂菌的污染。18.d 解析:无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等,需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢,属于消毒;为防止空气中杂菌的污染,接种时要在酒精灯火焰附近进行;家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌,故不能灭菌;培养基常进行高压蒸汽灭菌。19.b 解析:酵母菌是兼性厌氧菌,无氧时进行酒精发酵。20.a 解析:接种划线可以将菌体分散,最后得到单个菌体细胞,经过培养可以得到单个菌落;稀释涂布平板法可以分离微生物,也可以对微生物进行计数;在泡菜的腌制过程中,刚开始亚硝酸盐含量增加,10天后含量开始下降;以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌。21.(1)碳源 氮源 (2)ph (3)高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 (4)对接种环灼烧灭菌 相交(相接、相连、交叉等) (5)酚红 自养微生物(硝化细菌)解析:(1)培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源等物质。(2)培养基中除含有营养物质外还需提供适宜的温度、ph、o2等。(3)培养基常采用高压蒸汽灭菌,接种环等金属器具常采用灼烧灭菌。(4)考查平板划线法的操作方法,如果划线相重合则不能分离出纯种。(5)酚红可检验碱性溶液,用纤维素作唯一碳源的培养基培养微生物,能得到纤维素分解菌,但自养微生物可以利用空气中的co2作为碳源,也能生存,故需要进一步分离。22.(1)富含纤维素(其他答案合理也可,如落叶较多等) 纤维素 刚果红 透明圈 (2)不一定相同 对纤维素酶分解纤维素后所产生的葡萄糖 (3)纤维素 c1酶、cx酶、葡萄糖苷酶 (4)酵母菌 发酵装置密闭(或保证无氧条件等) 污染杂菌23.(1)选择培养基 对羟基苯甲酸 (2)利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基,经富集培养,选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物 (3)增大分解对羟基苯甲酸的微生物的比例 (4)对羟基苯甲酸 (5)对照 实验 说明通过富集培养的确得到了欲分离的目的微生物 (6)单菌落挑取 接种环在火焰上灼烧灭菌,烧红的接种环在火焰旁冷却

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