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第38讲 基因工程及其安全性学生用书p276)1(2016陕西西工大附中适应性训练)绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒(tmv)基因,可以合成一种抗tmv蛋白,叶片对tmv具有抗感染性。烟草是重要的经济作物,由于tmv的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗tmv的烟草,主要流程如图所示。(1)科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗tmv基因转录的rna,然后合成目的基因。图中过程表示_,获得的dna必须在两侧添加_和_。(2)过程构建重组ti质粒时,必须使用_和_两种工具酶。(3)由图分析,在过程构建的重组ti质粒上应该含有卡那霉素抗性基因作为_,重组ti质粒导入烟草体细胞的方法是_。(4)在过程培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外,还必须添加_,以保证受体细胞能培养成再生植株。(5)过程可采取_的方法,检测植株是否合成了抗tmv蛋白。在个体水平的鉴定过程中,可通过_的方法来确定植株是否具有抗性。解析:(1)利用mrna获得目的基因的方法是逆转录法,目的基因的两端要分别有启动子和终止子。(3)质粒上的抗性基因常用作标记基因。(5)检测目的基因是否完成了表达常用抗原抗体杂交的方法检测是否合成了特定的蛋白质;常用接种实验从个体水平上检测植株是否具有抗病性。答案:(1)逆(反)转录启动子终止子(2)限制性核酸内切酶(限制酶)dna连接酶(3)标记基因农杆菌转化法(4)植物激素(生长素和细胞分裂素)(5)抗原抗体杂交接种烟草花叶病毒2(2016福建普高毕业班质检)为探究shh基因与角化囊肿发生的相关性,科研人员利用shh基因的非模板链转录合成的rna作为探针,进行分子杂交实验,以检测shh基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如图:(amp表示氨苄青霉素抗性基因;lacz基因被shh基因插入后不表达)请回答:(1)重组载体中shh基因转录合成rna探针时,_(需要/不需要)启动子。(2)步骤中,用ca2处理大肠杆菌,使之成为_细胞,然后导入重组载体。实验中,用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌,未导入质粒的细菌将会死亡,原因是这些细菌不含有_基因。(3)将制备的探针加入角化囊肿切片中,探针将与_形成杂交带,进而判断shh基因的转录情况。解析:(1)重组载体中shh基因表达需要启动子。(2)大肠杆菌细胞用ca2处理后就成为感受态细胞;能在添加氨苄青霉素的培养基上生存的细菌含有氨苄青霉素抗性基因,没有氨苄青霉素抗性基因的细菌将会死亡。(3)判断shh基因的转录情况,也就是判断shh基因是否转录出mrna。答案:(1)需要(2)感受态amp(或氨苄青霉素抗性或抗性)(3)shh转录的mrna(只写mrna不可)3已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产,乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡。因此,可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内,使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力。回答下列问题:(1)为了获得丙种蛋白质的基因,在已知丙种蛋白质氨基酸序列的基础上,推测出丙种蛋白质的_序列,据此可利用_方法合成目的基因。获得丙种蛋白质的基因还可用_和_方法。(2)在利用上述丙种蛋白质基因和质粒载体构建重组质粒的过程中,常需要使用_酶和_酶。(3)将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共同培养,筛选出含有丙种蛋白质的愈伤组织,由该愈伤组织培养成的再生植株可抵抗_的危害。(4)若用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口,则该植株的种子_(填“含有”或“不含”)丙种蛋白质基因。解析:(1)获取目的基因的方法主要有基因文库获取法、pcr技术扩增法和人工化学合成法三种。已知丙种蛋白质氨基酸序列,可通过推测丙种蛋白质的基因序列,然后利用化学方法人工合成丙种蛋白质基因。(2)在构建重组质粒的过程中,需要使用限制性核酸内切酶和dna连接酶,前者能识别特定的核苷酸序列,使每条链特定部位的核苷酸之间的磷酸二酯键断开形成黏性末端,被喻为“分子手术刀”;后者能使两个带有相同黏性末端的dna片段连接起来,被称为“分子缝合针”。(3)将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共同培养,可筛选出含有丙种蛋白质的愈伤组织,而后培养出含有丙种蛋白质的抗乙种昆虫的植株。(4)若只用重组质粒感染甲种农作物叶片伤口,可

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