3M快速测试片.doc

3MTM PetrifilmTM 细菌总数测试卡产品简介：红色指示剂使读数更方便准群；48H确认菌落数；亦适用乳酸菌检测。编号：6046 规格：50片/包，20包/箱3MTM PetrifilmTM 霉菌和酵母菌测试片产品简介：测试片中添加抗生素，可抑制细菌生长；含酵母菌指示剂，使酵母菌更容易计数；35天确认霉菌酵母数。编号：6417 规格：50片/包，20包/箱3MTM PetrifilmTM 大肠菌群测试片产品简介：含改良VRB培养基；目的菌落显示为红色气泡；24H即可确认菌落数，节省检验时间2天。编号：6416 规格：25片/包， 40包/箱3MTM PetrifilmTM 高灵敏度大肠菌群测试片产品简介：灵敏度高达1cfu/5ml或1cfu/5g；目的菌落显示为红色带气泡，粉红色菌晕辅助计数；24h即可确认菌落数。编号：6415 规格：25片/包，20包/箱3MTM PetrifilmTM 快速大肠菌落群测试片产品简介：培养基中含有特定的PH指示剂；6-14h可估计大肠菌落数；24h培养可获得准确的大肠菌群数。编号：6046 规格：25片/包，20包/箱3MTM PetrifilmTM 肠杆菌科测试片产品简介：同时检测乳糖发酵型的大肠菌群和非乳糖发酵型的沙门氏菌。志贺氏菌、耶尔森氏菌等；24h确认肠杆菌科菌落数；加工环境和加工后无染的优良指示。编号：6421 规格：25片/包，40包/箱3MTM PetrifilmTM 大肠菌群/大肠杆菌测试片产品简介：一个测试片同时检测大肠杆菌和大肠菌群；2448h确认大肠杆菌数，节省时间23天；大肠菌群显示为蓝色带气泡。编号：6414 规格：25片/包，20包/箱3MTM PetrifilmTM 金黄色葡萄球菌测试片产品简介：一次检测等于三个BairdParker琼脂平板和凝固酶实验的效果；适用脱氧核糖核酸酶反应系统，特异性更强；2229h内确认为金黄色葡萄球菌数；确认反应片并非必须。编号：6491 规格：25片/包，20包/箱3MTM PetrifilmTM 环境李斯特菌属测试片产品简介：培养时间仅为282h；无需增菌培养；紫红色菌落便于计数；可作定性、半定性和定量判读；便于室内操作。编号：6448 规格：25片/包，8包/箱3MTM PetrifilmTM 免疫富集法李斯特菌快速检测试剂盒产品简介：样品经过增菌后，无需其他试剂，仅需适用本检测试剂盒就可以完成后续步骤，灵敏度达到1cfu/25g；对于部分食品，可在不到32h得到推测的阳性结果。编号：6448 规格：2040个/盒3M 细菌测试纸片系列均原产自美国，确认各类细菌菌落1224H就可出结果，快速、简单、便捷！3M细菌总数测试片操作以及判读一、测试细菌总数 操作方法1、未开封时，冷藏于8（46），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。2、已开封的，将封口以胶带封紧。3、保存再封的袋于25（77）和湿度50，不要冷藏已开启的包装袋，并于一个月内使用完。4、制备1：10和更大稀释的食物样品稀释液，称取或吸取食物样品，置入适宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内.5、加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer起缓冲作用的蛋白胨缓冲液(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法6887) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水. 不可使用含有枸橼酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液. 因为它们能抑止菌生长。 6、搅拌或均质样品。样品的稀释液调PH6.57.2 对酸性样品的稀释液用IN NaOH 对碱性样品用IN HCL调PH7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。8、使用吸管将1mL样液垂直滴加在测试片的中央处。9、允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。10、使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。13、测试片的透明面朝上，可堆叠至20片，对有一定湿度养箱能保持最少份损失是需要的。14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。15、可以分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶上挑取单个菌落。二、测试细菌总数 判读方法Aerobic bacteria count=152测试片中含有一种红色指示染剂可使菌落着色,计算所有红色菌落(不论其大小和颜色深浅均计算之).Count=0在petrifilm AC测试片上,很容易解释,图2测试片上没有任何菌落生长.Count=16图3示有不多的菌落.Count=143Petrifilm AC测试片菌落数适宜计数范围是25-250,见图4Count=560测试片面积约为20cm2,当菌落数超过250个,如图5所示,为了估计菌落数,可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数,再乘以20可得到整个测试片上的菌落数Count=tntc(estimated count=103)图6所示petrifilm AC测试片上菌落太多而无法计数(tntc)count=tntc(Estimated count=105) 有很多高数量菌落,使整个生长区变粉色,如图7所示,你仅可在生长区边缘现观察到单个菌落,应计录为菌落太多无法计数(TNTC)count=tntc(Estimated count=103)有时菌落分布出现不均衡,如图8所示,这也记录为TNTC.Count=tntc(Estimated count=107)在图9中petrifilm AC测试片上的菌落,最先粗略一看是可计数的,然而,你密切注意到生长区边缘,能看到高密度的菌落,应记录为TNTCEstimated count=160很少数菌种会液化petrifilm AC测试片上的培养基,如图10所示.若有这种现象发生,可选择没有液化区的几个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数.不要计数液化区内的红点.Count=83因为在petrifilm AC测试片上菌落是红色的,你会和不透明的不规则形状的事物颗粒区分开,见圆圈1和2.3M 乳酸菌测试片操作以及判读2*MRS的操作步骤1、按说明书要求的2倍用量制备2MRS肉汤。例如：如果说明书要求1L水中加入55gMRS,则2MRS则为1L水中加入110gMRS.2、用标准稀释液制备1：10样品稀释液，该样品稀释液可用于检测其他微生物。3、用1mL 3M电子加样器将1：10样品稀释液做1：2稀释。先取0.5mL肉2MRS肉汤，然后再吸取0.5mL 1:10样品稀释液，混匀后即可获得含单倍 MRS的1：20样品稀释液。4、接种：在PAC检测片上接种1mL 1：20样品稀释液（0.5mL 1：10标准稀释液+0.5mL 2MRS肉汤1:20含单倍MRS的样品稀释液）。5、培养：厌氧培养测试片。将检测片透明膜一面朝上放入厌氧罐中，叠放数量不得超过20片。如果检测片超过20片，可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检测片分开培养。将厌氧罐放入3035（8695）培养箱中培养483h. 6、判读：PAC测试片可在标准菌落计数器或其他放大光源下计数。测试片赏的菌落数稀释倍数（20）即为每毫升样品中酸乳菌数。详见判读手册。4*MRS肉汤的操作程序1、 按说明书要求的4倍用量制备4*MRS肉汤 2、 用标准稀释液制备1：10样品稀释液（11g/99mL或25g/225mL）。取8mL供其它种类的微生物检测用。 3、 将4*MRS肉汤加入1：10标准样品稀释液中，将获得含0.5 MRS的样品稀释液。 * 如果稀释液中含有11g样品、99mL标准稀释液，接种其它微生物测试片后，再加入18mL 4*MRS肉汤。PAC测试片上生长的菌落数乘以11即为最终结果（个/g）。 * 如果稀释液中含有25g样品、255mL标准稀释液，接种其它微生物检测片后，再加入41mL 4*MRS肉汤。PAC测试片上生长的菌落数乘以11即为最终结果（个/g）。 1、制备至少1：10或更高稀释度的样品稀释液。称量食品样品于WirPak取样袋、均质袋、稀释瓶或其它适合的消容器中。2、加入适当的肉汤稀释液，稀释液的配置方法根据说明书制备。如果使用一种1：10稀释液检测多种微生物，3M公司提供了更为简便的多种菌检测程序（见前页）。3、如果需要进行多倍稀释，肉汤稀释液只能用于最终稀释步骤。初始稀释可使用标准稀释液，包括磷酸盐缓冲液（ID）F磷酸盐缓冲液，0.0425g/L KH2POI4 Ph7.2) 、0.1%蛋白胶水，蛋白胶盐稀释液（ISO方法6887）、蛋白胶水缓冲液（ISO方法6579）、生理盐水（0.850.90），不含亚硫酸氢盐的 Letheen肉汤或蒸馏水，每步稀释都应充分混匀。4、接种：按操作说明接种1.0mL样品稀释液于Petrifilm5、培养：厌氧培养测试片。将测试片透明面朝上放入GASPak厌氧罐中，叠放数量不得超过20片。如果检测片超过20片，可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检测片分开培养。将厌氧罐放入3035（8695）培养箱中培养483h.6、判读：Petrifilm: PAC测试片可在标准菌落计数器或其他放大光源下计数。测试片赏的菌落数乘以稀释倍数，可获得每毫升样品中酸乳菌落数。详见判读手册。判读手册Count=238使用PAC测试片,用MRS肉汤稀释样品和厌养,可促进同型发酵的乳酸菌生长.图1为同型发酵的乳酸菌落(不带气泡)的例子.Count=30测试片中有导型发家哦的乳酸菌(产气)和同型发酵的乳酸菌.用MRS肉汤稀释, 使异型发酵的乳酸菌在暗影背景下有明显气泡产生(见黑圈1)生长区边缘的异型发酵乳酸菌菌落大约在1/4英寸时,可能不产生可视的气泡(见黑圈2).Count=0图3是用MRS内汤为稀释液接种PAC测试片作为对照,以MRS为稀释液及厌氧培养将在测试片上产生一个稍显暗色的浅色圆形生长区域.Count=60测试片最适宜计数范围是25-250个菌落,计数所有菌落,不管其大小和颜色深浅.Estimated count=440 测试片面积约为20cm2 .当菌落数超过250个(如图5所示)时,可估算菌落数.选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2 ),计算平均菌落数,在乘以20可得到测试片上的菌落总数.Count=TNTC(Estimated count=106)当菌落数多不可计(tntc)时,整个生长区可能变为粉红色,如图6所示.将测试片与以MRS肉汤作对照的测试片做比较,因为测试片的颜色变化是微小的(见图3),此种情况下样品需作进一步稀释.Count=TNTC(Estimated count=106)仔细观察,在测试片生长区中心和边缘处可见针尖大小的菌落,计录为TNTC结果.Conut=TNTC(Estimated count=108)当菌落数很多时,许多针尖大小的菌落会环绕在生长区边缘,记录为TNTC.Count=TNTC图9是TNTC的又一个例子.同型发酵乳酸菌菌落(无气泡产生)(黑圈1)与异型发酵乳酸菌菌落(有气泡产生)(黑圈2)同时出现.Count=52人为的气泡可能是不适当的接种所致,他们形状不规则,且不与菌落相连接3M大肠杆菌/大肠菌群快速检验测试片操作以及判读一、测试大肠杆菌/大肠菌群 操作方法1、未开封时，冷藏于8（46），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。2、已开封的，将封口以胶带封紧。3、保存再封的袋于25（77）和温度108 时,一些大肠杆菌菌株可能产生少量气体和不明确的蓝色菌落.所有不带气泡的蓝色菌落和(或)蓝色环带,推定为大肠杆菌需计数,如有必要需挑取不带气泡的蓝色菌落,进行确认试验.Actual count108当有大量的非大肠菌群细菌如假单胞菌属细菌存在时,petrifilm EC 测试片培养基颜色呈黄色.Total coliform count=3食物颗粒为不规则形状,且不带气泡.Total coliform count=78气泡可有不同形状,气泡可使菌落撑散,使菌落轮廓似气泡,见圆圈1和2.人为气泡可能是不当的操作所致,或是来自样品内的气体,它们成不规则形状,且不与菌落相连接.见圆圈3例如1-10示为不同形状气泡与菌落连接情况，所有菌落应记3M高灵敏度大肠菌群测试片操作以及判读一、高灵敏度大肠菌群测试片 操作方法1. 未开封时，冷藏于8（46），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。2. 已开封的，将封口以胶带封紧。3. 已启开的包装袋不要冷藏并于一个月内使用完。4. 制备食物样品稀释液，称取或吸取食物样品，置入适宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内5. 加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的旦白胶水(ISO方法6887) 、缓冲旦白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水.但不可用含有枸橼酸盐、bisulfite or thiosulfate的缓冲液. 因为它能抑止菌生长。6、搅拌或均质样品. 样品的稀释液调PH6.6-7.2对酸性样用IN NaOH、碱性样用INHCI调PH。7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。8、使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。9、细心将上层膜缓慢盖下，避免有气光泡产生，切勿使上层膜直接落下。10、使用压板（平面底朝下）放置在上层膜中央处。11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。15、可以分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶上挑取单个菌落。13、测试片的透明面朝上，可堆叠至20片。培养时间和温度因方法而有不同，最通用的认可方法是：总大肠菌群 AOAC官方方法986.33和989.10（乳/生乳和其它乳制品）大肠菌群：321培养242h AOAC官方方法991.14（食品类）大肠菌群：351培养242h NMKL方法（147.1993）大肠菌群：371培养242h AFNOR认可方法3M 01/2-09/89A和B（除水生贝壳类动物外的所有食品）大肠菌群：301培养242h 耐热的（粪）大肠菌群 AFNOR认可方法，3M 01/2-09/89C（所有食品） 441培养242h。当提高培养温度时，培养箱应有一定的湿度是需要的。 二、高灵敏度大肠菌群计数测试片 判读方法Coliform count = 4?Coliform count = 13在PetrifilmTM 高灵敏度检验测试片上菌落计数相当容易。测试片中的指示剂使革兰氏阴性菌染成红色，上层膜能截留大肠菌群产生的气泡，当大肠菌群大量产酸时，菌落周围会产生粉红色的菌晕。所以，计数红色带有气泡的菌落为大肠菌群，菌落周围的粉红色菌晕使计数更加方便。 Coliform count = 30圆圈1, 2和3中的气泡形状有所不同。圆圈1中的气泡和菌落相邻；圆圈2中的气泡撑破了菌落，使菌落看似气泡的“轮廓”；圆圈3中的菌落被3个小气泡围住。细菌学手册上规定，红色不带有气泡的菌落不计作大肠菌群。Coliform count = 0注意图4至图9中培养基颜色的变化。随着大肠菌群数和产酸的增加，培养基的颜色由淡桔黄色(图4)逐渐向明显的粉红色(图9)转变。同时做阴性对照有助于区分培养基的颜色。Coliform count = 90Estimated coliform count = 320圆形的生长面积约为60 cm2。当菌落数大于150个时，可选择1个或多个代表性方格来估算菌落数。计算每个方格的平均菌落数后乘以60，即为估算的大肠菌群数。Estimated coliform count = 840在接种区边缘的菌落和气泡可能较小，且边缘培养基外观略有差异，但不会影响菌落的计数。见图7。Coliform count = TNTC在PetrifilmTM高灵敏度检验测试片上，当菌落数过多时难以计数，该现象称为TNTC (Too Numerous To Count) 现象。该现象伴有以下特征：许多小型菌落和气泡，有时培养基颜色会加深。见图8。 Coliform count = TNTC图9中，测试片上有许多小型菌落，培养基颜色变深，为TNTC现象。Coliform count = 2食品颗粒通常呈不规则形状，且不带有气泡。见圆圈1。在测试片上，人为的气泡可能由于接种不当引起，其形状不规则，且不带有红色菌3M大肠菌群快速检验测试片操作以及判读一、测试大肠菌群 操作方法1. 未开封时，冷藏于8（46），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。2. 已开封的，将封口以胶带封紧。3. 已启开的包装袋不要冷藏并于一个月内使用完。4. 制备食物样品稀释液，称取或吸取食物样品，置入适宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内.5. 加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的旦白胶水(ISO方法6887) 、缓冲旦白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水. 但不可用含有枸橼酸盐、bisulfite or thiosulfate的缓冲液. 因为它能抑止菌生长。6、搅拌或均质样品.样品的稀释液调PH6.6-7.2对酸性样用IN NaOH、碱性样用INHCI调PH。7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。8、使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。9、细心将上层膜缓慢盖下，避免有气光泡产生，切勿使上层膜直接落下。10、使用压板（平面底朝下）放置在上层膜中央处。11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。15、可以分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶上挑取单个菌落。13、测试片的透明面朝上，可堆叠至20片。培养时间和温度因方法而有不同，最通用的认可方法是：总大肠菌群 AOAC官方方法986.33和989.10（乳/生乳和其它乳制品）大肠菌群：321培养242h AOAC官方方法991.14（食品类）大肠菌群：351培养242h NMKL方法（147.1993）大肠菌群：371培养242h AFNOR认可方法3M 01/2-09/89A和B（除水生贝壳类动物外的所有食品）大肠菌群：301培养242h 耐热的（粪）大肠菌群 AFNOR认可方法，3M 01/2-09/89C（所有食品） 441培养242h。当提高培养温度时，培养箱应有一定的湿度是需要的。二、测试大肠菌群 判读方法Petrifilm ColiformTM Coliform测试片含有VRB培养剂 (Violet Red Bile)，一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁(tetrazollium)指示剂，可增强菌落计数效果。表面覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体。 AOAC和FDA细菌学分析手册（RAM）规定大肠菌群为革兰氏阴性杆菌，发酵乳糖产酸产气。大肠菌群菌落在Petrifilm CC测试片上生长产酸，PH指示剂使培养基颜色变深，在红色菌落周围有气泡者，为大肠菌群细菌。大肠菌群签定,在不同国家可以有变更(见培养时间和温度部分提示).AOAC确认的方法:Total coliform= 69 (有气泡的菌落)No growth=0注意图2到图5培养基颜色的变化,随着coliform 菌数增多,培养基颜色变深,背景的泡(沫)为培养基现象,不是大肠菌群生长结果.Total coliform count=79Petrifilm cc 测试片菌落数适宜记数范围是15-150,不要计算圆型培基外的菌落,因为泡棉上已不含选择性培养基.见圆圈1Estimated total coliform count=220测试片面积约为20cm2,当菌落数超过150个,为了估计菌落数可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2)计算平均菌落数,在乘以20方向得到整个测试片上的菌落数.菌落太多时需进一步稀释样品,方能获得准确计数.TNTC(菌数太多无法计数)Petrifilmcc测试片菌落无法计数时至少有下列现象之一.(1)很多小菌落(2)有许多气泡(3)培养的颜色深暗.Acrual coun=4当有大量的非大肠菌群细菌如假单胞菌属细菌存在时,Petrifilmcc测试片培养基颜色呈黄色.Total coliform count=2食物颗粒为不规规则形状,且不带气泡.Total coliform count=8气泡可有不同形状,气泡可使菌落撑散,使菌落轮廓似气泡,见圆圈1和2,人为的气泡可能是不当的操作所至,或是来自样品捏的气体,他们成不规则形状,且不与菌落相连接.见圆圈3.例如,1-10示为不同类型气泡与菌落的连接情况,所有菌落应计数.3M霉菌和酵母菌检验测试片操作以及判读一、测试霉菌和酵母菌 操作方法1、未开封时，冷藏于8（46），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。2、已开封的，将封口以胶带封紧。3、保存再封的袋于25（77）和温度104)图6所示在PYM测试片边缘框里光亮区的的小型.兰色菌落同样也分布在整个测试片中(尽管有较小的可见度),这是胶木菌菌落太多无法计数(TNTC)现象.Mold count=59图7所示,在测试片上霉菌菌落出现堆挤和彼此覆盖,为了方便计数,可将测试片分成几个区域,计算每个有明显暗色中心的菌落.所划的方形区内有15个霉菌菌落。Mold count=TNTC 图8a和图8b为同一样品的测试结果.图8a为1:10样品稀释液,菌落小、虚弱暗淡、数量多、计数困难。图8b为1：100样品稀释液，生长菌落数在适宜范围（15-150个）内，很容易计数。Yesat and Mold Count=0yesat and Mold 3M快速金黄色葡萄球菌数测试片操作以及判读一、测试金黄色葡萄球菌数 操作方法1、未拆封包请冷藏于8，并在保存期限内使用完。在高温度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。2-3、已开封时，将封口已胶带封紧，存放于25/湿度50%以下,并于一个月内使用完. 请勿将已开封包冷藏于冰箱4、使用无菌的容器置入样品，已备将样品作10倍或更大倍数的稀释。5、加入适量的无菌稀释液:Butterfield s phosphate buffer(IDF phosphate buffer,0.0425g/L of KH2PO4 adjusted to pH 7.2),0.1%peptone water ,people saltdiluent (ISO method 6887),saline solution (0.85-0.90%),bisulfite-free letheen broth,或无菌蒸馏水。 不可用buffered peptone water 或buffered 含有citrate ,bisulfite,or thiosulfate ;它们可能抑止菌生长。6、搅拌或均质样品。 调整样品稀释液的pH值至6.57.5。请以1N NaOH调整酸性产品pH值，以1N HCI调整碱性产品。7、将测试片放置在平坦的外表面，揭起上层膜。使用吸管将1ml样品垂直低在测试片的中央处。8、小心卷会上层膜，避免气泡进入。不要让上层膜直接盖回。9、使用压板放置在上层膜中央处。轻轻的压下，是样品液均匀覆盖于圆形的培养面积上。且勿扭转或滑动亚板。拿起亚板，静置1分钟以使培养基凝固。10、测试片的透明膜朝上可堆叠至10片，培养于351或371下，242小时。11、培养之后，菌落可能生长，但在检测片上看不到，因为指示剂是含在金黄色葡萄球菌检测反应片上。12、检测片移至362培养箱，培养14小时。注意：如果菌落需要进一步测试，检测片培养不要超过一个小时。13、使用无菌镊子取出圆形的反应片，再掀开检测片上层膜小心置入反应片。在江上层膜放下。 14、为了确定反应片与培养胶均匀接触及避免夹带任何气泡，可以使用一个弯曲的玻璃棒（L玻璃棒）轻压检测片。15、将已置入反应片的金黄测葡萄球菌检测片培养于351或371，13小时。16、可目视或使用菌落计数器并可参读判读卡计算菌落数。17、菌落可以分散做为进一步的鉴定，掀起上层膜，有培养胶上挑起菌落。二、测试金黄色葡萄球菌数 判读方法快速金黄色葡萄球菌检验测试片（Petrifilm RSN）由两部分组成，第一部分是金黄色葡萄球菌培养基片，次检验片含有修正Baird-Pdker 营养物几一冷水可溶解的胶质，第二部分是热安定核酸酶（TNase）反应片，包含有DNA，Toludine RSN-O（甲苯胺篮）及四唑指示剂(Terazolium),此一指示剂有助于菌落的计数及确定葡萄球菌热安定核酸酶的存在. 热安定核酸酶是一种金黄色葡萄球菌的酵素产物,在高温下能维持稳定, 热安定核酸酶的检测象凝固酶反映一样,是一种鉴定金黄色葡萄球菌的方法. 在Petrifilm RSN 检测片上，热安定核酸酶反应看起来像是粉红色环带包围着的一个红色、或篮子菌落.Petrifilm RSN 检测片必须与Petrifilm热安定核酸酶反应片一起使用,单独使用将不会显示菌落,因为具有辅助计数菌落的指示剂是在反应片上,而不是在Petrifilm RSN检测片上。S.aureus count=22本图片显示一个典型的petrifilm RSA检测片上的金黄色葡萄球菌的菌落,计算所有粉红色环带的菌落既是S.aureus,菌落可能是红色或蓝色.S.aureus count=0图2显示一个置人petrifilm 热安定核酸酶反应片的petrifilm RSA 检测片,在这检测片上看不到菌落或热安定核酸酶环带.S.aureus count=4热安定核酸酶反应的一种指示剂造成金黄色葡萄球菌呈红色菌落,第二种指示剂使得热安定核酸酶环带显示粉红色.S.aureus count=36因为有些金黄色葡萄求菌只生产少量的热安定核酸酶,所以无论大小计算所有的Tnase环带菌落为金黄色葡萄球菌.Petrifilm RSA 检测片上Tnase环带的适当计数范围大约是15-100个菌落.计数范围高低端视 金黄色葡萄球菌生产Tnase环带量的多寡及其他菌相生长状况.S.aureus count = 38有些金黄色葡萄球菌产生大量的热安定核酸酶.这一类的金黄色葡萄球菌,于最后一阶段培养时,只需30分钟培养既可计算.因为已形成可目测的Tnase环带.注意:图4与图5有大约相同的菌落数.至于Tnase环带大小的差异,可能来自菌株的不同或最后阶段培养时间长短的差异.Estimated s.aureus count = 150Petrifilm 图形的生长面积大约30平方公分.可以 估算方式,先数三个方格内粉红色环带的数量,在乘以10,即为所有在图形培养范围内的菌落数.S.aureus count = TNTC当大量的金黄色葡萄球菌出现时,粉红色Tnase 环带可能重叠造成整个检测片变成粉红色.图7显示一个检测片中,因菌落过多无法计数(TNTC).建议进一步稀释样品来鉴定正确的菌落数.S.aureus count = 3偶尔水化培养基的菌株会长在检测片上.他们呈不规则形的红色菌落,而且周围无粉红色Tnase环带.亦不视为金黄色菌落但无粉红色Tnase环带,亦不视为金黄色葡萄球菌(如圆圈2).若有大的食物颗粒存在,反应片不易与培养基均匀秘合,易造成圆形范围边缘产生气泡(如圆圈3).S. aureus count = 15食物颗粒是不规则形状可能呈红,蓝或绿色(如圆圈4).当二个金黄色葡萄球菌生长的相当靠近的时候,会导致其Tnase 环带.计数时,请视为二个菌落(如圆圈5).3M环境李斯特菌测试片操作以及判读一、测试环境李斯特菌数 操作方法1. 将未开封的测试片贮藏在 25 oC (77 oF)和(或)相对湿度 50%的环境中。4. 用涂抹棒、海棉或其它采样设备收集环境样本。湿润采样设备的液体应= 10 mL。湿润剂可以是无菌水、缓冲蛋白胨水(Buffered Peptone Water, BPW)，或中和缓冲液，如Letheen肉汤或Dey/Engley (DE)中和肉汤。5. 在无菌环境下在收集的样品中添加5 mL，20-30oC，灭过菌的缓冲蛋白胨水(BPW)溶液。 不要将Petrifilm EL测试片与Vermont 培养基(UVM)、Fraser肉汤、李斯特菌增菌培养基 (LEB)或缓冲李斯特菌增菌培养基(BLEB)共用。6. 混合，蠕动或旋转样品与BPW的混合液将近一分钟。将样品置于室温(20-30 oC) 1h，最久不超过1.5 h，以修复损伤的李斯特菌。 7. 将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。8. 用3MTM电子移液枪或其它移液器垂直滴加3 mL样品到下层膜的中央。9. 将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。10. 轻轻地将塑料压板放在位于接种区上层膜上。不要压，扭转或滑动压板。提起压板。等至少10分钟，以使胶体凝固。11. 将测试片透明面朝上，可叠放至10片，在35oC 1oC或37oC 1oC下培养28h 2 h。12. Petrifilm EL测试片能够用标准的菌落计数器或其它光学放大器计数或判读。不要计数圆形轮廓上的菌落，因为它们不受选择性培养基的作用。Petrifilm EL测试片法可用于定性、半定量及定量检测13. 对于定性检测，根据紫红色菌落的存在与否，将结果计为检出和未检出。如果是/否的结果已经能够满足报告要求，那么你可以选择定性检测。 14. 对于半定量检测，根据出现紫红色菌落的相对量来记录结果。 如果你是根据菌落数的相对含量来采取相应的措施，并且没必要记录实际菌落数，那么你可以选择半定量检测。李斯特菌的含量应记录为对采样区域和企业标准有指导意义的形式(如低，中，高，或可接受和不可接受) 未检出检出15. 对于定量检测，计数所有紫红色菌落。 如果你根据菌落数来采取相应的措施，你可以采用定量检测。测试片上李斯特菌数：16请参考判读手册的“定量采样与判读”部分来计算每个环境样本中的李斯特菌数。16. 可挑区菌落进行进一步鉴定。掀起上层膜，从胶上挑取菌落。定量采样与判读如果你以定量方式使用3M Petrifilm EL 测试片，请参考产品的包装插件，然后按下述方式计算单位面积的菌落数(Colony Forming Units, CFU)。同时，你也要注意以下几点：1.稳定性是在环境监控过程中获得有用信息的关键点，所以在采样过程中应使用相同的步骤。理想情况下，应使用相同类型的取样设备，模板面积，技术员和采样技术。2.采样面积的大小可根据法规，内部标准，和(或)监控地点的不同来设定，例如考虑到较低的细菌数，对成品线应采用较大的采样面积。3.更多关于环境采样的信息，请见如下的参考文献，或参考3M Petrifilm 测试片环境监控手册。为了测定单位采样面积的李斯特菌数，你需要记录以下数据：1. 采样面积2. 湿润采样设备的液体量3. 添加缓冲蛋白胨水的体积4. 接种体积5. 测试片上的李斯特菌数运用如下的等式和表格来计算单位采样面积的菌落数 (CFU/area sampled)。实例请见下页。方法的详细内容请见包装插件和操作说明。你也可以测定单位样本的结果，如 CFU/每份排放水或环境定量采样符合以下文献：Standard Methods for the Examination of Dairy Products, Section 3.7D, American Public Health Association, Washington D. C., 1992.Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, Section 3.512 and 3.521, American Public Health Association, Washington D. C., 2001 定量判读1. 用10 mL液体湿润海绵，涂抹采样面，如面积为1平方英尺(1 ft2)。2. 将海绵放回无菌容器，加入5 mL缓冲蛋白胨水(BPW)。3. 修复完成后，吸取3 mL混合液接种到Petrifilm EL测试片。4. 培养后，进行菌落计数 (在本例中，假设菌落数为90)。1. 用1 mL液体湿润涂抹头，涂抹采样面，如面积为50平方厘米(50 cm2).2. 将涂抹棒放回无菌容器中，添加5 mL缓冲蛋白胨水(BPW)。3. 修复完成后，吸取3 mL混合液接种到Petrifilm EL 测试片。4. 培养后，进行菌落计数 (在本例中，假如菌落数为90)。二、测试环境李斯特菌 判读方法3MTM Petrifil