2,6-二氯靛酚滴定法测定番茄中维生素C的含量.doc

2,6-二氯靛酚滴定法测定番茄中维生素C的含量摘 要 自从波兰裔美国科学家卡西米尔冯克在1912年综合了以往的试验结果，发表了维生素的理论以来，国内外学者进行了广泛的研究。目前国内测定维生素c的常见方法有:2,6-二氯靛酚滴定法、2,4-二硝基苯肼法、荧光法、碘滴定法、高效液相色谱法1-3等。关键词 2,6-二氯靛酚滴定法；番茄；维生素c；含量1 前言 维生素c（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素，是维持机体正常生理功能的重要维生素之一,具有多种重要的生理功能，广泛参与机体氧化、还原等复杂代谢过程,是蔬菜水果中的一项非常重要的营养指标。维生素c的主要作用是提高免疫力，预防癌症、心脏病、中风，保护牙齿和牙龈等。另外，坚持按时服用维生素C还可以使皮肤黑色素沉着减少，从而减少黑斑和雀斑，使皮肤白皙。富含维生素c的食物有番茄、花菜、青辣椒、橙子、葡萄汁等，可以说，在所有的蔬菜、水果中，维生素c含量都不少。美国专家认为，每人每天维生素c的最佳用量应为200300毫克，最低不少于60毫克。而中国营养学会建议的膳食参考摄入量（RNI），成年人为100mg/日，可耐受最高摄入量（UL）为1000mg/日。市售的蔬果维生素c的含量不近相同，在此特意对番茄进行维生素c的测定，为人们正确补充维生素和合理饮食提供依据和指导。2 实验部分2.1 实验原理 维生素c属己糖衍生物， 存在还原型与氧化型两种结构形态。还原型维生素c分子中第二和第三个碳原子上的两个相邻的烯醇式羟基易离解出而具酸性， 故又称抗坏血酸。还原型维生素C在弱酸中稳定， 而在碱中或加热条件下均易被破坏， 其还原性又使得极易被氧化剂氧化， 特别在碱性或中性环境中， 或当有微量重金属离子(如 、 等)存在时， 更易被氧化分解。述原型维生素c氧化后脱氢即转化为氧化型维生素C，后者加氢仍可还原成还原型维生素c，故氧化型结构本身仍具有生物学活性。但氧化型结构在碱性及中性环境中易自发地水化成为2，3一二酮古乐糖酸而失去维生素c的生物学活性，且该步反应不可逆，故当还原型结构在碱性及中性环境中被氧化就会失去生物学活性。测定食品中L一抗坏血酸最实用的方法是基于L一抗坏血酸向脱氢抗坏血酸的可逆氧化。还原型维生素c结构中具有一C=C烯醇式邻羟基而显示出还原 OH OH性，可还原2，6二氯酚靛酚染料。该染料的钠盐在水溶液中呈兰色，在酸性溶液中呈红色，被还原后则红色消失染料2，6二氯靛酚的颜色反应表现在两个特征，一是取决于其氧化还原的还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变成无色，二是受其介质的酸度影响。在碱性溶液中显深蓝色，在酸性介质中显浅色，用浅蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素c酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色。滴定开始时，染料溶液要迅速加入，直至红色不立即消失接着慢慢的一滴一滴加入，并且要不断的振动三角烧瓶，直至呈粉红色于l5秒内不消失为止。由于样品中可能有其他杂质也能还原2，6一二氯靛酚，但其还原该染料的速度均较抗坏血酸慢，所以在滴定时以15秒钟红色不褪为终点。当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原抗坏血酸的含量。天然抗坏血酸有还原型和脱氢型两种，本法适用于测定一般果汁及制品中的还原型抗坏血酸，不包括脱氢型抗坏血酸。2.2 材料与方法2.2.1 实验材料 用于实验的鲜番茄购于韶关农贸市场，洗净后切片，放到研钵进行研碎；0.2mg/ml标准抗坏血酸（Vc）溶液，2,6二氯靛酚溶液等来自学校实验室，均为分析纯。2.2.2 仪器 分析天平(上海天平仪器厂)，100ml和250ml容量瓶，100ml烧杯式三角瓶，微量滴定管，研钵，漏斗，直径12.5mm定性滤纸2.2.3 标准抗坏血酸溶液的标定 吸取标准抗坏血酸溶液1ml，加入5ml 2%草酸，以2,6二氯靛酸酚溶液滴定至桃红色且15s内不褪色，即为终点。根据已知标准抗坏血酸溶液和染料用量，计算出每1ml染料溶液相应的抗坏血酸量（mg）。2.2.4 样品溶液的准备及测定 称取3个鲜番茄，然后各自取4份4.49g样品放入研钵切碎匀浆，加蒸馏水后用纱布过滤，定容至25ml（混匀）液汁液量。分别编号为 .，接着各自取1ml汁液加入2%草酸后进行离心。吸取上清液1ml于小烧杯中，加入9ml草酸后用标定过的2,6 二氯靛酚溶液滴定至桃红色且15s内不褪色为止。记下染料用量。2.2.5 操作事项 受到损伤的番茄组织维生素c容易受其体内抗坏血酸氧化酶的破坏。因此，维生素c的测定应采用新鲜样品并且尽快用2% 草酸溶液制成匀浆，以保存番茄中的维生素c。2.2.6 维c含量计算m0: 1mlVc标液含抗血酸的质量单位（mg）V0：滴定样品所用染料体积（ml）V：样品所用染料体积（ml）m：样品中含抗血酸质量单位（mg）3 结果与分析 滴定样品所用染料体积：24.8 ml 番茄滴点样品均为4.49g,抗坏血酸含量的测定结果如下表。样品编号滴定消耗染料体积（ml）Vc含量（mg）1.351.371.341.401.351.36 1.33 1.39 1.37 1.34 1.35 1.34 通过 可计算出，m值，即4.49g番茄中维生素的含量为: 25 m4.49g番茄中维生素c含量样 品维生素c含量（mg）A0.272250.276250.270250.28225B0.272250.274250.268250.28025C0.276250.270250.272250.270253个不同番茄的维生素含量方差分析单个样本检验检验值 = 0 差分的 95% 置信区间tdfSig.(双侧)均值差值下限上限A104.0353.000.27525000.2668300.2836700B109.5003.000.27375000.2657939.2817061C192.5103.000.27225000.2677493.2767507 通过方差分析，此法测定误差可满足一般实验室对含维生素c较高的果汁及其制品中维生隶C(抗坏血酸)测定的要求。即：所以：4.49g番茄的维生素c含量为0.27375 mg参考文献1张应年.沙枣中维生素C的测定Q.湖北：湖北长江出版集团，19952李明菊.食物中维生素C的测定方法研究V.四川：攀枝花学院，20123 实验部分3.1 材料与方法3.1.1 实验材料 用于实验的鲜番茄购于韶关农贸市场，洗净后切片，放到研钵进行研碎；0.2mg/ml标准抗坏血酸（Vc）溶液，2,6二氯靛酚溶液等来自学校实验室，均为分析纯。3.1.2 仪器 分析天平(上海天平仪器厂)，100ml和250ml容量瓶，100ml烧杯式三角瓶，微量滴定管，研钵，漏斗，直径12.5mm定性滤纸2.2.3 标准抗坏血酸溶液的标定 吸取标准抗坏血酸溶液1ml，加入5ml 2%草酸，以2,6二氯靛酸酚溶液滴定至桃红色且15s内不褪色，即为终点。根据已知标准抗坏血酸溶液和染料用量，计算出每1ml染料溶液相应的抗坏血酸量（mg）。3.1.3 样品溶液的准备及测定 称取3个鲜番茄，然后各自取4份4.49g样品放入研钵切碎匀浆，加蒸馏水后用纱布过滤，定容至25ml（混匀）液汁液量。分别编号为 .，接着各自取1ml汁液加入2%草酸后进行离心。吸取上清液1ml于小烧杯中，加入9ml草酸后用标定过的2,6 二氯靛酚溶液滴定至桃红色且15s内不褪色为止。记下染料用量。3.1.4 操作事项 受到损伤的番茄组织维生素c容易受其体内抗坏血酸氧化酶的破坏。因此，维生素c的测定应采用新鲜样品并且尽快用2% 草酸溶液制成匀浆，以保存番茄中的维生素c。3.2 维c含量计算m0: 1mlVc标液含抗血酸的质量单位（mg）V0：滴定样品所用染料体积（ml）V：样品所用染料体积（ml）m：样品中含抗血酸质量单位（mg）4 结果与分析 滴定样品所用染料体积：24.8 ml 番茄滴点样品均为4.49g,抗坏血酸含量的测定结果如下表：1ml番茄样品中抗坏血酸的含量样品编号滴定消耗染料体积（ml）Vc含量（mg）1.351.371.341.401.351.36 1.33 1.39 1.37 1.34 1.35 1.34 通过 可计算出，m值，即4.49g番茄中维生素的含量为: 25 m4.49g番茄中维生素c含量样 品维生素c含量（mg）A0.272250.276250.270250.28225B0.272250.274250.268250.28025C0.276250.270250.272250.270253个不同番茄的维生素含量方差分析单个样本检验检验值 = 0 差分的 95% 置信区间tdfSig.(双侧)均值差值下限上限A104.0353