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文档简介

生物技术实践类1生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用,设计了以下实验,并成功筛选到能降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示,实验步骤如图所示。请分析回答下列问题:kh2po41.4 gna2hpo42.1 gmgso47h2o0.2 g葡萄糖10 g尿素1 g琼脂15 g溶解后自来水定容到1 000 ml(1)培养基中加入尿素的目的是_,原理是_。从同化作用类型来看,该菌属于_。(2)实验需要振荡培养,原因是_。转为固体培养时,常采用_法接种,获得单菌落后继续筛选。(3)在实验过程中:培养基、培养皿;玻璃棒、试管、锥形瓶、吸管;瘤胃中液体。其中需要灭菌的是_(填序号)。(4)分离分解尿素的细菌实验时,甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有_(填序号)。取样不同培养基污染操作失误没有设置对照(5)以尿素为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后,加入_指示剂后变红,说明“目的菌”能分解尿素,理由是_。(6)为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数,将接种的培养皿放置在37 恒温培养箱中培养2448 h,观察并统计具有红色环带的菌落数,结果见表,其中_倍的稀释比较合适。稀释倍数103104105106107菌落数50036724836182.下面是果酒和果醋制作的实验流程和发酵装置。根据图示回答下列问题:(1)完成图1中的实验流程_。(2)图2装置中的充气口在_过程中要关闭,否则可能发生使发酵液变酸的反应_(写出该反应式),而排气口在该过程中应开放,排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接,原因是_。(3)葡萄酒呈现红色的原因是_,重铬酸钾在酸性条件下与酒精反应呈_色。(4)果酒和果醋的制作分别利用了酵母菌和_两种微生物的发酵原理,后者在结构上的主要特点是_。3如表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方,请根据表格和所学知识回答下列相关问题:成分含量蛋白胨10.0 g乳糖5.0 g蔗糖5.0 gk2hpo42.0 g显色剂(伊红美蓝)0.2 g琼脂12.0 g将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1 000 ml(1)大肠杆菌的同化类型为_,从生态系统的成分上看,大肠杆菌属于_。(2)在微生物的实验室培养中,获得纯净培养物的关键是_,因此需对培养基和培养皿进行_(填“消毒”或“灭菌”),操作者的双手需要进行清洗和_。空气中的细菌可用紫外线杀灭,其原因是紫外线能使_,还能破坏dna的结构。(3)根据用途划分,该培养基属于_(填“选择”或“鉴别”)培养基,若要分离能分解尿素的细菌需将培养基中_换成_,若要鉴定分解尿素的细菌还需将伊红美蓝换成_。(4)培养大肠杆菌时,常用的接种方法是_和_。通过上述方法可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,称为_。4下面是关于固定化酶和细菌培养实验的问题。请回答:(1)某兴趣小组欲利用固定化酶进行酶解淀粉的实验,分组见下表。组别固定化酶柱长度(cm)淀粉溶液的流速(mlmin1)甲100.3乙100.5丙150.3丁150.5将吸附了淀粉酶的石英砂装入柱中后,需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱,以除去_。按上表分组,将配制好的淀粉溶液加入固定化酶柱中,然后取一定量的流出液进行kii2检测。若流出液呈红色,表明有_生成;若各组呈现的颜色有显著差异,则流出液中淀粉水解产物浓度最高的是_组。(2)下列关于上述固定化酶实验的叙述,错误的是_。a固定化酶柱长度和淀粉溶液流速决定了酶柱中酶的含量b淀粉溶液流速过快会导致流出液中含有淀粉c各组实验所用的淀粉溶液浓度应相同d淀粉溶液的ph对实验结果有影响(3)现有一份污水样品,某兴趣小组欲检测其中的细菌数,进行以下实验,将一定量的污水样品进行浓度梯度稀释。取适量不同稀释度的稀释液,用_法分别接种于固体平面培养基上,经培养后进行计数。该实验应注意,接种前,从盛有_的容器中将玻璃刮刀取出,放在酒精灯火焰上灼烧,冷却后待用;分组时,需用_作为对照。(4)在上述细菌培养实验中进行计数时,应计数的是接种了_。a各个稀释度样品的培养基上的细菌数b合理稀释度样品的培养基上的细菌数c各个稀释度样品的培养基上的菌落数d合理稀释度样品的培养基上的菌落数5利用紫甘薯制酒可提高其附加值。请回答:(1)为提高紫甘薯的利用率,工厂化生产时,可加入果胶酶和淀粉酶,其中果胶酶可来自_等微生物。由于酶在水溶液中不稳定,因此常将酶固定在某种介质上制成_。(2)果胶酶可将紫甘薯匀浆中的果胶水解成_。a半乳糖醛酸和葡萄糖b半乳糖和果糖c半乳糖醛酸甲酯和果糖d半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯(3)紫甘薯匀浆流经淀粉酶柱后,取适量流出的液体,经脱色后加入kii2溶液,结果液体呈红色。表明该液体中含有_。a淀粉b糊精c麦芽糖d葡萄糖(4)在发酵前,为使酵母菌迅速发生作用,取适量的干酵母,加入温水和_。一段时间后,酵母悬液中会出现气泡,该气泡内的气体主要是_。将酵母菌接种到待发酵液后,随发酵的进行,酵母菌在_条件下产生了酒精和二氧化碳。(5)下图表示发酵液ph对酒精浓度的影响。据图判断,最佳ph值是_。6某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂,开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究,其流程如下图所示。请回答:(1)土壤悬液首先经80 处理15分钟,其目的是筛选出_。(2)在无菌条件下,将经过处理的土壤悬液进行_,然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到_,其周围出现透明水解圈,圈的直径大小与_强弱相关。(3)筛选获得的菌株经鉴定后,将优良菌株进行液体扩大培养。培养时需要振荡,其主要目的是_。液体培养基与固体培养基相比,不含有的成分是_。(4)在合适条件下,将提纯的植酸酶与海藻酸钠混合后,滴加到一定浓度的钙离子溶液中,使液滴形成凝胶固体小球。该过程是对酶进行_。a吸附b包埋c装柱 d洗涤(5)温度与植酸酶相对酶活性的关系如图所示。下列叙述错误的是_。a测试温度中,固定化与非固定化植酸酶的最适温度分别为60 和45 b测试温度范围内,固定化植酸酶的相对酶活性波动低于非固定化植酸酶c固定化与非固定化植酸酶相比,相对酶活性在80%以上时的温度范围较宽d65 时固定化与非固定化植酸酶的相对酶活性因蛋白质变性而位于最低点7. 某兴趣小组就“泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量变化”开展了研究,操作如下:某年1月4日下午选取1、2、3号三只相同的泡菜坛,在每个坛中加入洗净的新鲜莲花菜0.6 kg,再分别倒入相同量的煮沸并冷却的10%盐水,将坛密封,置于同一环境中。封坛前进行第一次取样测定亚硝酸盐含量,后来定时测定,结果见下图:(1)实验中盐水需煮沸并冷却后才可使用,原因是_。在腌制过程中,会出现坛中溶液量增加,这是由于_。(2)测定亚硝酸盐含量的方法是_,其原理是:在酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与n1萘基乙二胺盐酸盐结合形成_,将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较,可以大致估计出泡菜中亚硝酸盐的含量。(3)根据图中数据进一步分析,可推测在腌制过程中的第_天,泡菜中的亚硝酸盐含量达到最大值。若要食用,至少要在腌制的第_天比较好。(4)实验中3只坛中产生的亚硝酸盐含量存在差异,最可能的原因是_。8(1)啤酒是我们日常生活中最常见的饮料之一。在啤酒生产过程中,发酵是重要环节。具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的乙醇发酵菌种,对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌,诱变及筛选过程如下:步骤1:野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。步骤2:制备选择培养基。在基本培养基的基础上,注意添加_和调低_,加琼脂后进行_,最后制成固体平板。步骤3:将紫外线照射后的菌液进行接种。下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解,请分析接种的具体方法。获得图a效果的接种方法是_,获得图b效果的接种方法是_。步骤4:根据是否能在选择培养基上生长筛选出突变菌。(2)下图为实验条件下进行组织培养菊花植株的基本流程 上述中a为70%_溶液,b为5%_溶液,再用无菌水清洗,上述操作的目的是为了消毒;而后面的e称之为_。(3)诱导丛状苗时,培养基中应添加的植物激素及配比是_。a生长素浓度高于细胞分裂素浓度b生长素浓度低于细胞分裂素浓度c生长素浓度低于赤霉素浓度d生长素浓度高于赤霉素浓度9科学工作者对矮丛蓝莓叶片愈伤组织的培养进行了研究。请利用所学知识回答下列相关问题:(1)因对幼叶灭菌相对容易,且外植体的采集对原母株伤害小,故幼叶成为矮丛蓝莓组织培养时首选的接种材料。剪下幼叶后需要经过一系列的消毒过程,一般先用流水冲洗20 min 左右,在无菌操作台上用体积分数为_的酒精消毒30 s,取出后在无菌水中清洗,再用质量分数为0.1 %的_溶液灭菌12 min,最后用无菌水冲洗3次。(2)植物组织培养包括_和_两个重要过程,其中愈伤组织长出丛芽的过程的实质是_。(3)离体植物组织培养常用ms培养基,其主要成分包括大量元素、微量元素、有机物(如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素以及_等)。在配制好的ms培养基中,常常需要添加_,其中生长素和细胞分裂素是启动_、脱分化和再分化的关键性激素。(4)如果做月季的花药培养实验,确定花粉发育时期常用的方法是_,某些植物的花粉细胞核不易着色,需采用_,这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。1(1)筛选目的菌只有能合成脲酶的细菌才能分解尿素,在该培养基上生长异养型(2)为目的菌提供氧气涂布平板(3)和(4)(5)酚红细菌合成的脲酶将尿素分解为氨,ph升高,使酚红指示剂变红(6)106和1052(1)醋酸发酵(2)乙醇发酵c2h5oho2ch3coohh2o避免空气中其他微生物进入发酵装置(防止空气中的微生物污染)(3)红色葡萄皮中的色素溶解在发酵液中灰绿(4)醋杆菌无以核被膜为界限的细胞核3(1)异养型分解者(2)防止外来杂菌的入侵灭菌消毒蛋白质变性(3)鉴别蛋白胨尿素酚红指示剂(4)划线分离法涂布分离法菌落4解析:(1)利用固定化酶进行酶解淀粉的实验时,先要将酶固定化。此题中利用石英砂吸附淀粉酶,装入固定化酶柱时有些酶没有完全吸附在石英砂上,需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱,以除去未吸附的游离的淀粉酶。淀粉酶可使淀粉水解成糊精,如果用淀粉指示剂(kii2)检测糊精,则呈现红色。酶的量不同,水解的效果也不同,丙组固定化酶柱的长度较长,其固定化酶的总量较多,且柱中淀粉溶液的流速也较慢,反应充分,故产物浓度高,颜色最深。(2)a项,固定化酶柱的长度决定了酶的含量,反应是否充分与淀粉溶液的流速有关,从而决定了产物的浓度。b项,如果淀粉溶液的流速过快,则淀粉与酶接触不充分,从而使淀粉不能被充分水解。c项,各组淀粉溶液的浓度是实验的无关变量,故各组实验所用的淀粉溶液浓度应该相同。d项,温度、ph会影响酶的活性,从而对实验结果造成影响。(3)细菌的分离与计数常用涂布分离法,即用玻璃刮刀将一定体积的稀释液涂布到固体平面培养基上。玻璃刮刀在使用前需进行灭菌处理,即将其浸入体积分数为70%的酒精中,随后取出放在酒精灯火焰上灼烧,冷却后待用。为排除其他因素的影响,提高实验的可信度,实验中要设置空白对照。(4)将菌液涂布到固体平面培养基上后,倒置放在恒温箱中培养,培养一段时间后,统计菌落数。当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌,这样通过统计菌落数就可估算出待测样品的细菌数目,所以要选择合理稀释度的样品。答案:(1)未吸附的淀粉酶糊精丙(2)a(3)涂布分离70%酒精未接种的培养基(4)d5解析:以果酒制作为基础,结合果胶酶的来源和淀粉酶的固定化以及淀粉水解后产物的检测作答。(1)、(2)果胶酶可将紫甘薯匀浆中的果胶水解成半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯,以提高紫甘薯的利用率;有些微生物,如黑曲霉、苹果青霉都可用于生产果胶霉;由于酶在水溶液中不稳定,所以常将酶固定在某种介质上制成固定化酶。(3)紫甘薯匀浆流经淀粉酶柱后,淀粉会被水解成糊精,糊精经脱色后加入kii2溶液后呈红色。(4)酵母菌可分泌酶,酶在胞外将蔗糖分解后,酵母菌再吸收利用单糖。加入蔗糖使发酵原料更丰富,有利于早期酵母菌的大量繁殖,该时期酵母菌进行需氧呼吸产生co2和h2o;将酵母菌接种到待发酵液后,酵母菌会在无氧条件下发酵产生酒精和co2。(5)分析曲线图可知,ph为4.7时能获得最大酒精浓度。答案:(1)黑曲霉(或苹果青霉)固定化酶(2)d(3)b(4)蔗糖co2无氧(5)4.76解析:(1)对土壤悬液进行高温处理,大部分菌种被高温杀死,可筛选出耐高温的菌株。(2)涂布分离法是分离培养细菌的常用方法,需要先将培养的菌液稀释,再涂布到固体培养基平面上,以得到相互分开的单菌落。在含植酸钠的培养基上,目标菌株可分解植酸钠,在其菌落周围形成透明水解圈,植酸酶的活性越强,单位时间内分解的植酸钠越多,形成的透明圈越大。(3)筛选获得的菌株经鉴定后需转至液体培养基中扩大培养,培养时需要振荡,振荡的目的是增加液体培养基中的氧气浓度。制备固体培养基的过程中需要加入溶化的琼脂,琼脂冷却后呈固态。(4)海藻酸钠微溶于水,易形成凝胶,提纯的植酸酶被海藻酸钠固定化后可反复使用,这种固定化酶的方法属于包埋法。(5)观察图像可知,65 时固定化植酸酶的相对酶活性仍在8

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