固态发酵论文：果胶裂解酶超滤不饱和低聚半乳糖醛酸.doc

固态发酵论文：果胶裂解酶超滤不饱和低聚半乳糖醛酸【提示】本文仅提供摘要、关键词、篇名、目录等题录内容。为中国学术资源库知识代理，不涉版权。作者如有疑义，请联系版权单位或学校。【摘要】本论文对Aspergillus niger wz003的产酶条件，果胶裂解酶酶学性质，不饱和低聚糖的制备条件以及不饱和低聚糖的分离纯化进行了研究。首先对Aspergillus niger wz003固态发酵制备高活性果胶裂解酶的生理生化参数进行了优化。试验结果表明：当Aspergillus nigerwz003以12（vw，106个ml）接种量，在最佳产酶培养基麸皮40.0gL、桔皮粉20.0gL、NaNO3 12.8gL、KH2PO4 1.2gL、含水量60（ww），在起始pH 6.6，40发酵培养72 h，每克鲜曲中果胶裂解酶酶活可达2607.82 Ug，比基础培养条件下提高了近56倍；而聚半乳糖醛酸酶的合成得到了有效控制，酶活为462.12 Ug。用硫酸铵盐析法对酶液进行了初步分离纯化，确定了果胶裂解酶的硫酸铵饱和度范围为40-85。经过实验得出果胶裂解酶最适反应温度为40，最适作用pH6.8；pH稳定范围6.4-8.0，温度稳定范围为25-55；Ca2+和Zn2+对果胶裂解酶活性有一定的激活作用，而Mg2+、Na+、Mn2+、Ba2+和Cu2对果胶裂解酶活性无明显作用。通过单因素实验优化制备不饱和果胶低聚糖的较佳水解工艺为底物果胶浓度1.76，果胶的酯化度为65.8，粗酶液2，反应的最适pH6.8，反应的最适温度40，反应时间20 h。采用超滤法分离果胶水解液，研究了超滤操作压力、溶液浓度和溶液pH对聚醚砜膜（PES-10）渗透通量的影响，结果表明：超滤分离浓度1.76的果胶水解液，压力为0.14MPa，pH为6.4，膜渗透通量相对较高。然后将滤过液依次通过截留分子量为5000Da的聚醚砜膜和截留分子量为1000Da的再生纤维素膜，并采用HPLC法对滤过液进行了检测分析。最后通过质谱分析果胶水解液U0，得到水解液中含有4种分子量2000Da以下不饱和果胶低聚糖。【关键词】固态发酵；果胶裂解酶；超滤；不饱和低聚半乳糖醛酸；【篇名】果胶裂解酶的发酵及其在制备不饱和低聚糖方面的应用【目录】果胶裂解酶的发酵及其在制备不饱和低聚糖方面的应用摘要3-5ABSTRACT5-6第一章 综述11-261.1 果胶酶的分类与作用机制11-141.1.1 聚半乳糖醛酸酶11-131.1.2 裂解酶13-141.2 产果胶酶的微生物来源14-151.2.1 真菌类果胶酶产生菌14-151.2.2 细菌类果胶酶产生菌151.3 果胶酶活力测定方法15-181.4 微生物发酵法生产果胶酶18-211.4.1 发酵方式对微生物产果胶酶的影响18-191.4.2 营养条件对微生物产果胶酶的影响19-201.4.3 发酵条件对微生物产果胶酶的影响20-211.5 果胶酶在制备功能性果胶低聚糖方面的应用21-251.5.1 果胶低聚糖的生理活性21-221.5.2 果胶酶制备的功能性果胶低聚糖22-231.5.3 低聚糖(oligosaccharide)的分离纯化方法23-251.6 本课题的研究内容和意义25-261.6.1 课题的研究意义251.6.2 研究内容25-26第二章 果胶裂解酶培养基及发酵条件的优化26-412.1 材料与方法26-292.1.1 实验材料26-272.1.2 主要仪器27-292.2 结果与讨论29-402.2.1 不同碳源对产酶的影响29-312.2.2 不同氮源对产酶的影响31-322.2.3 吐温80对产酶的影响32-332.2.4 无机盐对 PL和 PG合成的影响33-342.2.5 培养基含水量对 PL和 PG的影响342.2.6 温度对 PL和 PG合成的影响34-352.2.7 接种量对产酶的影响35-362.2.8 培养基起始pH值对产酶的影响362.2.9 正交优化 PL培养基36-382.2.10 固体发酵产酶进程38-402.3 小结40-41第三章 果胶裂解酶酶学性质及不饱和果胶低聚糖制备条件的优化41-563.1 材料与方法41-453.1.1 主要实验材料41-423.1.2 主要仪器423.1.3 相关溶液配置423.1.4 方法42-453.2 结果与讨论45-543.2.1 硫酸铵盐析法对果胶裂解酶的初步纯化46-473.2.2 果胶裂解酶的酶学性质47-513.2.3 不饱和果胶低聚糖制备条件的优化51-543.3 讨论与小结54-56第四章 不饱和果胶低聚糖的制备和初步分离56-684.1 材料与方法56-584.1.1 实验材料56-574.1.2 主要仪器574.1.3 方法57-584.2 结果和讨论58-674.2.1 超滤条件的优化58-614.2.2