高中生物 DNA和蛋白质技术 5.2 多聚酶链式反应扩增DNA片段课件1 新人教版选修1.ppt

一 基础知识 一 dna分子的结构 一 基础知识 1 组成元素 一 dna分子的结构 一 基础知识 c h o n p 1 组成元素 一 dna分子的结构 一 基础知识 c h o n p 1 组成元素 2 基本单位 一 dna分子的结构 一 基础知识 c h o n p 1 组成元素 脱氧核苷酸 2 基本单位 一 dna分子的结构 一 基础知识 c h o n p 1 组成元素 脱氧核苷酸 2 基本单位 3 脱氧核苷酸结构 一 dna分子的结构 多脱氧核苷酸链结构简图 连接 连接 5 端含磷酸基团 3 端 含羟基 连接 5 端含磷酸基团 3 端 含羟基 连接 5 端含磷酸基团 3 端 含羟基 3 端 5 端 4 dna分子的双螺旋结构 4 dna分子的双螺旋结构 dna分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链 即一条链为3 5 另一条链为5 3 盘旋而成的规则双螺旋结构 4 dna分子的双螺旋结构 脱氧核糖与磷酸交替连接 排列在外侧 构成基本骨架 碱基排列在链的内侧 dna分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链 即一条链为3 5 另一条链为5 3 盘旋而成的规则双螺旋结构 两条链上的碱基通过氢键连接起来 形成碱基对 碱基对的组成有特定的规律 即腺嘌呤一定与胸腺嘧啶配对 鸟嘌呤一定同胞嘧啶配对 4 dna分子的双螺旋结构 二 dna的复制 2 时期 3 场所 1 概念 2 时期 1 概念 由一个dna形成两个完全相同的dna的过程 二 dna的复制 3 场所 2 时期 有丝分裂间期 减数第一次分裂前的间期 1 概念 由一个dna形成两个完全相同的dna的过程 二 dna的复制 3 场所 2 时期 3 场所 细胞核 主 线粒体 叶绿体 1 概念 由一个dna形成两个完全相同的dna的过程 二 dna的复制 有丝分裂间期 减数第一次分裂前的间期 5 原料 6 基本条件 4 模板 5 原料 6 基本条件 4 模板 dna母链 5 原料 脱氧核苷酸 6 基本条件 4 模板 dna母链 5 原料 脱氧核苷酸 6 基本条件 酶 atp 原料 模板 4 模板 dna母链 7 复制过程 7 复制过程 dna的解旋 7 复制过程 dna的解旋 亲代dna分子利用细胞提供的能量在解旋酶的作用下氢键断裂 部分双螺旋链解旋为两条平行的双链 dna聚合酶的特性 dna聚合酶不能从头开始合成dna 而只能从3 端延伸dna链 因此 dna复制需要引物 rna引物的合成 rna引物的合成 以dna单链为模板 在引物酶的作用下合成小段的rna引物 rna引物的合成 dna的生成 以dna单链为模板 在引物酶的作用下合成小段的rna引物 rna引物的合成 以dna单链为模板 在引物酶的作用下合成小段的rna引物 dna的生成 以dna单链为模板 在dna聚合酶的作用下 在rna引物的末端由5 端 3 端合成dna dna合成的方向 子链由5 端向3 端延伸 思考 dna复制的前提是什么 体外扩增dna如何打开双链 dna复制的前提是 用 方法 思考 dna复制的前提是什么 体外扩增dna如何打开双链 dna复制的前提是 用 方法 思考 dna复制的前提是什么 体外扩增dna如何打开双链 双链的解开 dna复制的前提是 用 方法 思考 dna复制的前提是什么 体外扩增dna如何打开双链 双链的解开 控制温度 dna分子的热变性原理 dna双链 单链 dna分子的热变性原理 dna双链 单链 复性 缓慢冷却 dna分子的热变性原理 变性 加热80 100 dna双链 单链 复性 缓慢冷却 变性的目的 复性的目的 dna分子的热变性原理 变性 加热80 100 dna双链 单链 复性 缓慢冷却 变性的目的 复性的目的 解开双链 有利于引物 和引物 与两条单链的结合 dna分子的热变性原理 变性 加热80 100 思考 高温使dna解旋 但普通dna聚合酶会失活 找到耐高温dna聚合酶 思考 高温使dna解旋 但普通dna聚合酶会失活 找到耐高温dna聚合酶 托马斯 布鲁克 体外dna复制的条件 pcr反应的条件 dna模板 分别与两条模板链相结合的两种引物 四种脱氧核苷酸 耐高温的聚合酶 控制温度 但不需解旋酶 体外dna复制的条件 pcr反应的条件 三 pcr的反应过程 1 pcr的反应步骤 1 pcr的反应步骤 pcr一般经历三十多次循环 每次循环可以分为三个基本步骤 变性 复性和延伸 三 pcr的反应过程 变性 模板dna解旋 模板dna加热至900c以上时 模板dna双链解离 成为单链 2 循环过程 pcr循环第一步 加热变性 复性 退火 温度下降到50 左右 两种引物与模板dna单链的互补序列配对结合 pcr循环第二步 引物与靶序列退火 延伸 温度上升到72 在taqdna聚合酶的作用下 以脱氧核苷酸为原料 以母链为模板 按碱基互补配对的原则 合成一条新的dna链 pcr循环第三步 引物延伸 靶序列 靶序列 第1个pcr循环完成后 得到两个拷贝的靶序列 95 变性 1 pcr循环 变性 1 pcr循环 变性 95 变性 95 变性 1 pcr循环 变性 55 复性 2 pcr循环 复性 3 pcr循环 延伸 3 pcr循环 延伸 3 pcr循环 延伸 3 pcr循环 延伸 3 30次循环后靶