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附件4 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清IgG抗体试验材料：（1）纯化的重组汉坦病毒核蛋白抗原预包被酶标板：（2）辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体；（3）缓冲液：包被液：pH9. 6碳酸缓冲液；稀释液：pH7.4 PBS（含5%脱脂奶）洗涤液：pH7.4 PBST（0.05吐温20）；（4）显色液：A/B液（5）终止液：4N H2SO4（6）酶标板、酶标仪。检测步骤：（1）将待检血清用稀释液从1：100开始作2倍连续稀释，加入抗原孔，100l/孔，同时设阴、阳性对照，37水浴1小时；（5）弃去血清，用洗涤液洗涤56次；（6）加酶结合物，用稀释液按工作浓度稀释，100l/孔，37水浴1小时；（7）弃去酶标抗体，用洗涤液洗涤6次，甩干；（8）加显色液：于各反应孔内加A/B液各一滴，37，避光35分钟；（9）加终止液于每反应孔，一滴/孔。结果判断：于450nm（TMB）阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值，即P/N2.1，对照成立；若待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值2.1，则标本为出血热IgG抗体阳性，反之阴性。（阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记，若大于0.05按实际数值计算）意义：阳性结果，表明曾受到汉坦病毒感染，1：100有诊断参考意义；恢复期血
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