唾液淀粉酶最适pH值的测定实验梁世秀.docx

唾液淀粉酶最适pH值的测定实验2012级10班4组梁世秀一实验目的：1掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告2掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。3.熟悉影响酶促反应速度的因素。二实验原理：1.PH的改变对酶的催化影响很大，在适宜条件下，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受PH影响的情况。碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。2.进一步利用郎伯比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在淀粉在不同PH下水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将淀粉完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。三仪器材料和试剂药品：试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37恒温水箱、722型可见分光光度计、吸量管（1ml 5ml 10ml）试剂药品：2.5g/L淀粉溶液、碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷 酸氢二钠溶液、蒸馏水四实验步骤：1、 缓冲液的配置：根据下表，配置各个pH值的缓冲溶液各10mlpH 值 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0磷酸氢二钠 12.3 18.5 26.5 37.5 49.0 61.0 72.0 81.0 87.0 91.5 94.7磷酸二氢钠 87.7 81.5 73.5 62.5 51.0 39.0 28.0 19.0 13.0 8.5 5.3 2、唾液的获取：a.吐取法：蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇，将下嘴唇搁在烧杯边缘，让唾液自然流入试管中.b.实验者先把痰咳尽，用蒸馏水漱口，清除口腔内的食物残渣，再在口腔内含蒸馏水，并作漱口运动，3分钟后吐入垫有两层经润湿过处理的脱脂纱布漏斗里，过滤于小烧杯备用。3淀粉用量的确定管号 1 2 3 47.0缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.92.5g/L淀粉溶液 0.4 0.5 0.6 0.7唾液（稀释10倍）0.1 0.1 0.1 0.1混匀，37摄氏度水浴5min，再加2滴碘液混匀，观察其颜色变化，选颜色适中，记录其用量蒸馏水 5.6 5.5 5.4 5.34.唾液稀释倍数确定：取4支试管，分别编上号03管 号 管号 0 1 2 3 唾液(ml) 1 0.5 0.25 0.2 蒸馏水(ml) 4.0 4.5 4.75 4.8 稀释倍数 5 10 20 25 取各试管配好的稀释液0.1ml管号 0 1 2 3稀释倍数 5 10 20 257.0缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.92.5g/L淀粉 由前面操作确定37摄氏度水浴5min,然后每管加入2滴碘液蒸馏水 6 6 6 6混匀，观察颜色适中一馆，记录其稀释倍数5.测量pH： 取12支试管，分别标上号112，按下表操作管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 2.5g/L淀粉溶液(ml) 由前面操作确定 0.9ml缓冲溶液pH 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 稀释唾液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液蒸馏水 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管中溶液660nm处的的吸光度A值，做好记录。以pH值为横坐标，吸光度A为纵坐标，在坐标纸上作出平滑曲线。讨论：1.本实验中，当唾液淀粉酶的活性最大时，淀粉被分解得最多，剩余底物的量最少，A值最小，过酸或过碱均会抑制酶的活性，使之分解的底物减少，A值增大。 2.最适PH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度以及酶纯度等因素的影响。溶液PH高于或低于最适PH时，酶活性降低