种子发芽实验.doc

实验五 种子发芽测定一、目的要求测定种子的发芽能力，是为了确定播种量和一个种批的等级价值。要求掌握种子发芽测定的操作技术，并学会计算种子发芽的各种质量指标。二、材料器具1材料 本地区主要园林树种的种子35种。2器具及药品 恒温箱、培养皿、滤纸、纱布、脱脂棉、镊子、温度计（0100）、取样匙、直尺、量筒、烧杯、福尔马林、高锰酸钾、标签、电炉、蒸煮锅、蒸馏水、滴瓶、解剖刀、解剖针等。三、方法步骤1测定样品的提取 用十字区分法从测定净度时选出的纯净种子每个三角形中数取25粒种子组成100粒。共组成四个100粒，成为四次重复，分别装入纱布袋中。种粒大的可以50粒或25粒为一次重复，样品数量有限或设备条件不足时，也可以采用三次重复，但应在检验证中注明。桦属、桉属、杨属、柳属等细粒种子是从纯净种子中称量大约0.25克作测定样品，称量精度至毫克。2消毒灭菌 为了预防霉菌感染，干扰检验结果，检验所使用的种子和各种物件一般都要经过消毒灭菌处理。 检验用具的消毒灭菌：培养皿、纱布、小镊子仔细洗净，并用沸水煮510分钟。供发芽试验用的恒温箱用喷雾器喷洒福尔马林后密封两三天然后使用。 种子的消毒灭菌：目前常用的有福尔马林、高锰酸钾、升汞、过氧化氢等。药剂种类不同，处理的方法和时间也不一致。福尔马林 将纱布袋连同其中的种子测定样品放入小烧杯中。注入0.15%的福尔马林溶液，以浸没种子为度，随即盖好烧杯。20分钟取出绞干，置于有盖的玻皿中闷半小时，取出后连同纱布用清水冲洗数次。即可进行浸种处理。高锰酸钾 用0.20.5%的高锰酸钾溶液浸2小时，取出用清水冲洗数次。3浸种 罗汉松、侧柏、水杉、黄连木、胡枝子等。用始温为45水浸种24小时。刺槐种子用8090热水浸种，待水冷后放置24小时，浸种所用的水最好更换12次。杨、柳、桉等则不必浸种。4置床 将经过消毒灭菌、浸种的种子安放到发芽床上。视树种而不同，常用的发芽床有纱布、滤纸或细砂。一般中粒、小粒种可在培养皿中放上纱布或滤纸作床。在每个培养皿床上整齐地安放100粒种子（种粒较大的可为50粒乃至25粒），种粒之同保持的距离大约相当于种粒本身的14倍，以减少霉菌蔓延感染，并避免发芽的幼根相互纠缠。种粒的排放应有一定规则，以便计数并减少错误。在培养皿不易磨损的地方（例如底盘的外缘）贴上小标签，写明送检样品号、重复号、姓名和置床日，以免错乱。然后将培养皿盖好放入指定的恒温箱内。根据树种的特性使用变温或恒温（参见表4-1）。规定使用变温的，每昼夜应当保持低温16小时，高温8小时，温度的变换应在三小时以内逐渐完成。湿度为6070%表4-1 部分树种发芽测定的主要技术规定树种温度（）发 芽 势 终止天数发 芽 率终止天数备 注银 杏柏 木福 建 柏侧 柏湿 地 松火 炬 松马尾松、杉木樟 子 松兴安落叶松金 钱 松水 杉木 麻 黄杜 仲香 椿刺 槐窿 缘 桉紫 穗 槐杨 属20/3025252520/3020/30252520/30252530252520/30252520/307241291171038169878551232135282028282010132515151212109216层积催芽60天每昼夜光照8小时每昼夜光照8小时每昼夜光照8小时始温45水浸24小时，每昼夜光照8小时重量发芽法在胚根一端将外皮轻划一刀始温80水浸24小时，剩余硬粒再用始温80浸种24小时，每昼夜光照小时。重量发芽法始温80浸种24小时重量发芽法5发芽测定的管理（1）经常检查发芽环境的温度，仪器的温度同预定的温度相差不能超过1。（2）保持发芽床的水分 水分不足进应及时加水。但水分也不能过多，用指尖轻压发芽床（指纸床），如指尖周围出现水膜，或者种粒四周出现水膜，都表示水分过多。（3）通气 种子发芽需要足够的氧气，并会释放出大量的二气化碳。有盖的培养皿的缺点之一就是通气不良，应当经常揭开盖子充分换气。（4）将感染霉菌的种子取出（不要使它们触及健康的种粒），用清水冲洗数次，直到水无混浊再放回发芽床。发霉严重时整个滤纸和座垫，甚至整个培养皿都要更换。这些情况在发芽记录表（表4-2）中应有记述。6观察记载（1）发芽测定的情况要定期观察记载（见表4-2）。为了更好地掌握发芽测定的全过程，本实验最好要求每天作一次观察记载。（2）发芽测定的持续时间 发芽测定的持续天数见表4-1。表中所列天数以置床之日为零起算，且不包括种子预处理的时间。如果确认某样品已经达到最高发芽率，也可在规定的时间以前结束测定。如到规定的结束时间仍有较多的种粒萌发，也可酌情延长测定时间。发芽测定所用的实际天数应在检验报告中填明。（3）记载项目 按发芽床的编号依次记载以下各点（见表4-2）。表4-2 发芽测定记录表树种预处理方法送检样品编号温 度其他记载光 照预 处 理 日 期组号12345678910111213141516171819202122232425逐 发 芽 粒 数1置床 日期23开始 发芽 日期4检验员 年 月 日表4-3 发芽测定结果统计表树种 送检样品号 测定开始日期 结束日期组号发芽势发芽率未发芽粒发霉日期及换垫日期平均发芽势平均发芽率平均发芽速度平均绝对发芽率备注天 数%天 数%腐 坏异 状新 鲜空 粒硬 粒计%1234合计检验员 年 月 日正常发芽粒长出正常胚根。其长度大于该种粒一半的称为正常发芽粒。对杨、柳、桑、桉等细粒种子，胚根的长度应不少于该种粒的长度。竹类种子正常发芽粒的幼根应至少同该种粒等长且幼芽的长度超过该种粒长度的二分之一。苦楝、柚木等复粒种子，其中只要有一粒种子正常发芽即可作为正常发芽率。凡符合正常发芽粒种子用小镊子取出记数。异状发芽粒指胚根短而生长迟滞、胚根呈负向地性；胚根异常纤弱；胚根腐坏；胚根出自珠孔以外的部位；种壳暴烈或脱落；胚根卷曲；子叶先出；胚根联结。有时需将一时难于判断的发芽粒特别提出另行培养，以便确定是否为正常发芽。腐烂粒内含物腐败成胶状的无生命种子称腐烂粒。应及时提出并在表格中记述，但不能把感染霉菌的种子混同为腐烂粒。未发芽粒每次剔除发芽粒、异状发芽粒和腐烂粒之后将余下的未发芽粒重新排放整齐，并点数，以便及时核查，避免差错。到发芽终止日期后，分组用切开法对尚未发芽的种粒进行补充鉴定，分别归成新鲜健全粒、腐烂粒、空粒、涩粒（多见于杉木、柳杉）等几类并记入表4-3。7计算发芽结果发芽测定结果，进行以下各项指标的计算，并记入表4-3。（1）发芽率（实验室发芽率、技术发芽率）发芽率（%）=式中：n正常发芽粒数 N供检种子总数发芽率计算到小数点后一位，以下四舍五入。发芽率按组计算，然后计算四组的算术平均值。其值不带小数。组间的容许误差见表4-4A。如果没有超过容许误差，实验结果可以认为是正确的，即以四组的平均百分数作为本次试验的结果表4-4A 发芽百分率的最大容许差距，用以决定是否要重做测定：只考虑随机取样的变异平均发芽百分率 最大容许差距 平均发芽百分率 最大容许差距 99 9897969593949192899023456789101112567891011128788 84868183788073776772566651551314 151718202123242829343545465013 14151617181920如果超过容许的误差范围，则测定结果认为不正确，需进行第二次测定。第二次测定（也可以与第一次测定同时做）和第一次测定的结果来计算两次的平均发芽率，以两次测定平均发芽率来查表4-4B，如两次的结果相差不超过该表所规定的容许差距，则测定是符合要求的。如超过容许误差，则应再做测定。（2）发芽势在规定时间（见表4-1，一般是发芽达到高峰以前）内正常发芽种子数与供检种子数的百分比。按分组计算，然后求四组的平均值。计算到小数点后一位。其容许误差为计算发芽率时容许误差的一倍半。表4-4B 判断两次测定是否符合的容许差距只考虑随机取样的变异平均发芽百分率最大容许差距9899959791948590778460765159234671011161724254142502345678（3）绝对发芽率把供检样品中的空粒和涩粒除去不计，只计算饱满种子的发芽率。绝对发芽率（%）= 式中：n正常发芽的种数 N供检种子总数