T细胞斑点试验.ppt

T SPOT TB 杨中平 结核感染T细胞斑点检测 T细胞斑点试验 T SPOT 又叫作结核感染干扰素释放试验 InterferonGammaReleaseAssays IGRAs 结核的现状 结核病是全球严重的公共卫生问题之一 据WHO统计 全球约有20亿人感染结核分枝杆菌 每年有约200万人死于结核 我国是世界上22个结核病高负担国家之一 结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 T SPOT TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性 在现有结核诊断方法存在缺陷的今天 T SPOT TB可以给临床诊断提供参考 基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点 T SPOT TB的检测物已不局限于静脉血 支气管肺泡灌洗液 痰液 胸腹水 脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断 T SPOT的意义 1 菌阴 结核病患者的辅助诊断2 肺外结合的鉴别诊断3 免疫力低下 受抑制患者的结核诊断 感染筛查4 儿童结核病的辅助诊断 T SPOT注意事项 1 肝素抗凝全血 常温保存 不得冷冻或冷藏 2 采血量 三岁以下2ML 3 9岁4ML 9岁以上6ML 免疫力低下或白细胞低下采6ML 本公司一律两管 3 样本必须4小时内送达 4 输血受试者或PET CT受试者 两周后检测 5 受试者需阅读知情同意书并填写申请单 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 结核的传统诊断手段 结核菌素皮试 低敏感性 免疫力低下人群中其敏感性大大降低 低特异性 与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉 易造成 假阳性 结果 细菌学检查 常规培养 2月 快速培养 1周 阳性率取决于采集标本中细菌数量 不利于早期诊断 病理学检查 阳性率低 对取材标本有较高要求 有创伤 对肉芽肿性病变需进一步鉴别 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主 结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T细胞当再次遇到抗原刺激时 能迅速活化增殖 释放r干扰素r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 T SPOT TB技术 利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞 PBMC 中存在结核特异性T细胞 这些淋巴细胞在受到结核特异抗原刺激后分泌r干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放r干扰素的T淋巴细胞 经酶联免疫显色后 通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数 1个斑点代表一个细胞 计算出抗原特异性细胞的频率 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为试验有效T SPOT TB试验结果用每106PBMCs中斑点形成细胞 SFCs 的数目来描述 即SFCs 106PBMCs 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 包 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 T SPOT TB的临床意义 T SPOT TB高灵敏度 提问 出报告时间 一 三 五检测三个工作日出 标本