食用菌中粗多糖含量的测定.doc

ICS 67080B 04N Y中华人民共和国农业行业标准NYT 1 6762008食用菌中粗多糖含量的测定Determination of crude mushroom polysaccharides2008-0828发布20081001实施中华人民共和国农业部发布NYT 1676-2008前言本标准的附录A为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位：农业部食用菌产品质量监督检验测试中心(上海)、上海市农业科学院食用菌研究所。本标准主要起草人：邢增涛、门殿英、唐庆九、王南、李明容、关斯明。NYT 1676-2008食用菌中粗多糖含量的测定1范围本标准规定了食用菌粗多糖的比色测定法。本标准适用于各种千、鲜食用菌产品中粗多糖及食用菌制品中粗多糖含量的测定，不适于添加淀 粉、糊精组分的食用菌产品，以及食用菌液体发酵或固体发酵产品。本标准方法的检出限05 mgkg。2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GBT 6682分析实验室用水规格和实验方法3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。31粗多糖crude polysaccharides以BD一葡聚糖或aD一葡聚糖或其他碳糖为主链的一系列高分子化合物。4原理 多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490 nm处有特征吸收，与标准系列比较定量。5试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GBT 6682中的蒸馏水。51硫酸(H2SO,)，p一184 gmL。52无水乙醇(C2H。o)。53苯酚(GH。O)，重蒸馏。5480乙醇溶液。5 5葡萄糖(C6H。O。)，使用前应于105恒温烘干至恒重。5 6 80苯酚溶液：称取80 g苯酚(53)于100mL烧杯中，加水溶解，定容至100mL后转至棕色瓶中，置4冰箱中避光贮存。5 7 5苯酚：吸取5mL苯酚溶液(56)，溶于75mL水中，混匀，现用现配。5 8100mgL标准葡萄糖溶液：称取0100 0 g葡萄糖(55)于100mL烧杯中，加水溶解，定容至1 000 mL，置4冰箱中贮存。6仪器61可见分光光度计。62分析天平，感量为0001 g。1NYT 1676-200863超声提取器。64离心机。7分析步骤71样品中淀粉、糊精有无的判定 按附录A进行判定。若样品中含有淀粉和糊精，则此样品中多糖含量的测定不适于使用本方法。若样品中不含淀粉和糊精，则进行下一个测定步骤。72样品的提取称取o5 g1o g粉碎过20mm孔径筛的样品，精确到o001 g，置于50mL具塞离心管内。用5mL水浸润样品，缓慢加入20mL无水乙醇，同时使用涡旋振荡器振摇，使混合均匀，置超声提取器中 超声提取30rain。提取结束后，于4 000 rrain离心10rain，弃去上清液。不溶物用10mL乙醇溶液 (54)洗涤、离心。用水将上述不溶物转移入圆底烧瓶，加入50mL蒸馏水，装上磨口的空气冷凝管，于 沸水浴中提取2 h。冷却至室温，过滤，将上清液转移至100ml。容量瓶中，残渣洗涤2次3次，洗涤液 转至容量瓶中，加水定容。此溶液为样品测定液。73标准曲线分别吸取0、02 ml 0 4 mL、06 mL、08 mL、10 mL的标准葡萄糖工作溶液(48)置20 mL具塞玻璃试管中，用蒸馏水补至I0mL。向试液中加入i0mL苯酚溶液(57)，然后快速加入50mL硫酸 (与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合)，静置10 rain。使用涡旋振荡器使反应液充 分混合，然后将试管放置于30。C水浴中反应20 rain，490 nm测吸光度。以葡聚糖或葡萄糖质量浓度为横坐标。吸光度值为纵坐标，制定标准曲线。7 4测定 吸取100mL样品溶液于20mL具塞试管中，按72至73步骤操作，测定吸光度。同时做空白试验。8结果计算样品中多糖含量以质量分数w计，单位以克每百克(g100 g)表示，按公式(1)计算：w一堡尝09i0 4(1)m2 X V 2式中： m。从标准曲线上查得样品测定液中含糖量，单位为微克(pg)； y，样品定容体积，单位为毫升(mL)；比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升(mL)； mz样品质量，单位为克(g)； o9葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。 计算结果保留至小数点后两位。9精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于10，以大于lo的情况不超过5为前提。rcYr 1676-2008附录A (规范性附录) 淀粉和糊精的定性鉴别A1碘溶液的配制：称取36 g碘化钾溶于20mL水中，加入13 g碘，溶解后加水稀释至100mL。 A2样品的处理A21称取109粉碎过20mm孔径筛的样品，置于20mL具塞离心管内。A22加入25 mL水后，使用涡旋振荡器使样品充分混合或溶解。4 000 rrain