果蔬农药检测相关知识.doc

果蔬农药残留检测知识杭州天迈生物科技有限公司第12页/共12页果蔬农药残留检测知识目录：1. 认识农药1) 目前主要有哪几类农药在使用？2) 食品中的农药来源3) 农作物喷洒农药有什么规律？4) 农药对人体的危害5) 日常生活过程中的减少农药残留摄入的预防2. 有关果蔬中农药残留的相关检测标准1) 有关果蔬中农药残留快速检测标准的发布与执行2) 几种常用果蔬农药残留检测方法的优缺点分析3) 蔬菜农药残留快速检测方法是否可用于水果农药残留的检测？4) 果蔬中植物次生物质3. 农残卡法检测果蔬中农药残留检测操作及注意事项1) 操作步骤（GB/T 5009.199-2003方法）2) 其他注意事项4. 农残酶抑制法检测果蔬中农药残留检测操作及注意事项1) 操作步骤（GB/T 5009.199-2003方法）2) 其他注意事项5. 农药常见问题解答1) 部分超市已配备农药快速检测方法，为什么仍有农药残留超标的问题呢？ 2) 在清洗、加热过程中能否去掉蔬菜中的残留农药？ 3) 什么是有机蔬菜？4) 有机蔬菜与无公害蔬菜有什么区别呢？ 5) 有机蔬菜就一定没有农药残留吗？为什么在有机蔬菜中同样有农药残留？ 6. 无公害蔬菜安全要求：1. 认识农药1) 目前主要有哪几类农药在使用？目前所使用的农药按其化学结构大致可分为以下几类：有机氯类，有机磷类，氨基甲酸酯类，拟除虫菊酯类等。在我国农药中，70%为有机磷农药，而在我国生产使用的有机磷农药中，70为剧毒、高毒类，虽然国家从上个世纪90年代开始禁止部分有机磷类农药的生产，但由于地域经济的因素，到目前为止，仍有部分禁止多年的有机磷类农药仍在生产和投放市场，相关管理部门针对现状禁止在果蔬上使用的，但在农作物种植领域仍不时被用于果蔬的病虫害防冶上，给人民的身体健康带来威胁。由于有机磷类和氨基甲酸酯类农药施加在农作物上代谢的时间较长，并且对人体的毒害较大，所以我国卫生部门和农业部门主要除对所有农药残留制定相应的国家标准和行业标准外，特别结合目前我国食品安全监管的现状，针对有机磷和氨基甲酸酯类农药，引进美国FDA的快速检测方法，制定了相应的国家标准(GB/T 5009.199)和行业标准(NY/T 448)，作为非实验室检测(如现场检测)的主要方法。2) 食品中的农药来源：a. 人们在播种期间，将种子拌入农药或定期对作物的生长床进行消毒，如花生播种的防止鼠害或动物盗吃种子，以及菌类生产前的生长床消毒；b. 人们出于防冶害虫、防腐(延长保持期)、提高产品卖相等目的，在农作物生长或食品加工的过程中使用农药，如果蔬生长过程中的病虫害防冶，火腿生产中加入敌百虫防腐，新鲜水果运输中加入多菌灵来保鲜等；c. 长期使用农药，由于雨水的冲洗，部分农药流入土壤中，在农作物的生产过程中进入到农作物内，如萝卜等土下农作物。3) 农作物喷洒农药有什么规律？结合农业基地和普通种植场所的现状，农作物喷洒农药有以下规律可循：a. 季节性因素：夏季的时候，高温、高湿的气候条件有利于昆虫的繁殖和生长，往往也是很多农作物的花期，这时一般喷洒农药的周期变短，农药的浓度也要相应提高，往往这时上市的果蔬农药残留量较高，冬季的时候，低温、干燥的条件不利于昆虫的繁殖和生长，相应喷洒农药的周期较长，浓度也可以相对较低，果蔬农药残留量相对较低。b. 农作物品种因素：部分农作物本身能够生成较高含量的植物次生物质，对昆虫和其它生物能产生一定的抑制作用，所以植物次生物质含量不同的农作物农药残留的含量也有所不同。在蔬菜中，小青菜(叶菜)、白菜，甘蓝，生菜，韭菜等往往较易有虫，喷洒农药的频率和浓度均高，农药残留量一般可能较高，芹菜，圆葱，茴香，茼蒿，葱、蒜、萝卜、韭菜、香菜、茭白、蘑菇及蕃茄等含植物次生物质较高的农作物往往喷洒农药的频度和浓度均较低，农药残留量一般也较低。在水果中，一般树栽水果都要打药的，所以农药残留量也会较高，但绿色水果在成果后会用纸袋包裹，这样种植出来的水果农药则会低，水果也因植物次生物质的含量不同，农药残留量也有一定规律。一般情况下，苹果、梨、莲雾、芒果、柑橘、草莓、葡萄、龙眼、荔枝等农药残留量较高，桃、李、梅、柿、柠檬、樱桃、枣、枇杷、蕃茄、柚、橄榄等水果农药残留量较低，而木瓜、番石榴、红甘蔗、桑椹、石榴、西瓜、香蕉、杨梅、菠萝等则一般不需喷洒农药，农药残留量也是最低的或者没有。c. 天气因素：由于高毒农药在雨水的冲洗下会从叶面及叶柄处流失，所以在暴雨或连续阴雨后采摘时往往农药残留量较少，而在连续干燥无雨时较易发生农药残留量超标的情况。但在实际监测中也需注意到连续阴雨后，在较短的周期内（如雨后的第1周）也可能出现较高含量的农药残留，原因是在雨天无法施药，天气放晴后，种植者为防冶病虫害立即进行施药，施药后采摘期不足，造成农产品中农药残留量较高。d. 地域因素：我国南北温、湿度差异较大，东西海拨差异也较大，病虫害发生的规律也存在较大差异，一般情况下，温、湿度高，海拨低的农作物产地出产的农作物农药残留量可能会较高。e. 生产及管理方式的因素：目前我国农作物生产的管理模式为多样化，一般情况下，农业生产基地和一些集中管理的农作物生产模式中管理水平较高，管理者对昆虫繁殖规律、农药的代谢规律和喷洒浓度均有较清晰的认识，喷洒周期和喷洒浓度较适宜，农作物采摘前也有一定的农药代谢期，产品一般农药残留量较低。但一些松散型管理的农作物生产领域则危险性较高，随着近二十年来农技知识的推广，虽有一定程度的提升，但仍存在农药喷洒周期、浓度不合理，采摘期无控制的情况。f. 其它偶发性因素：作为农药残留危害防范的工作者在工作中除了要结合以上因素进行针对性重点监控之外，还应时时关注目前该方面的最新资讯，结合偶发性的因素开展针对性检查，如在本地区某个饭店发生食用某种果蔬中毒的情况，我们首先要针对同一来源的该类果蔬进行重点检查，同时考虑对同一来源的其它果蔬和其它来源的同类果蔬进行针对性检查。4) 农药对人体的危害a. 导致身体免疫力下降：长期食用农残菜，农药被血液吸收后，可以分布到神经突触和神经-肌肉接头等处，并特异性的抑制乙酰胆碱酯酶，形成磷酰化酶，直接损害神经元，造成中枢神经死亡，导致身体各器官免疫力下降，如经常性的感冒、头晕、心悸、盗汗、失眠、健忘等。b. 可能致癌：农残中常常含有的甲拌磷、甲胺磷、对硫磷、氯化苯等可促使全身各组织内各细胞发生癌变。c. 加重肝脏负担：残留农药进入体内，主要依靠肝脏制造微粒体氧化酶来吸收这些毒素，进行氧化分解。如果长期食用带有农残的瓜果蔬菜，肝脏就会不停地工作来分解这些毒素。长时间的超负荷工作会引起肝硬化、肝积水等一些肝脏病变。d. 胃肠道疾病：由于胃肠道消化系统粘膜血管丰富、胃壁皱褶多，易存毒物。这样农药残留容易累积在其中，引起慢性腹泻、恶心等症状。e. 除以上慢性中毒影响外，有机磷类农药还有可能产生急性中毒，中毒的潜伏期一般在2小时内，根据病情的轻重可出现肺水肿、昏迷、脑水肿、呼吸衰竭等症状，并可能危及生命，急救治疗原则是尽快排出毒物，要反复、多次的洗胃。特效解毒药，包括抗胆碱药物阿托品，可用于中毒的早期；胆碱酯酶复能剂，常用的有氯解磷定和碘解磷定，能够迅速恢复被有机磷抑制的胆碱酯酶的活力，缓解中毒症状。f. 此外，不同种类的农药混合后会出现“鸡尾酒”效应，即加性或协同效应，对人类身体的破坏，比任何单一种化学物质所能起的作用还要大，但我们对于其产生的健康影响却知之甚少。5) 日常生活过程中的减少农药残留摄入的预防：a. 结合果蔬的特性、季节、天气因素，观察果蔬的表面，对嫌疑较大的果蔬引起注意和加强清洗，对短期内喷洒过的农药有一定降低效果；b. 采用盐水浸泡的方式去除果蔬中的农药残留，一般浸泡时间10-20分钟可得到一定程度的改善，但自来水的浸泡效果较差。2. 有关果蔬中农药残留的相关检测标准主要检测标准：检测标准号声明适用范围检测方法果蔬样品处理差异性GB/T 5009.199-2003蔬菜酶抑制法、速测卡法NY/T448-2001蔬菜酶抑制法NY/T1453-2007水果、蔬菜中16种农药液质联用法无GB/T19648-2005水果、蔬菜中446种农药串联质谱法无T 761-2008水果、蔬菜气相色谱法无说明：1) 有关果蔬中农药残留快速检测标准的发布与执行卫生部发布的是GB/T 5009.199-2003，目前卫生系统(如酒店、食堂等)和工商系统(菜场、超市等流通区域)均使用该标准，在该标准中声明本方法用于蔬菜的农药残留检测，并局限于有机磷和氨基甲酸酯类农药的检测，其中酶试剂法要求抑制率应小于50%为合格。农业部发布的是NY/T448-2001，目前农业系统(农业生产基地、初级农产品交易市场、农批市场等)均使用该标准，在该标准中声明本方法用于蔬菜的农药残留检测，并局限于有机磷和氨基甲酸酯类农药的检测，其中酶试剂法要求抑制率应小于70%为合格。2) 几种常用果蔬农药残留检测方法的优缺点分析a. 常规检测方法：气相色谱液相色谱、串联色谱方法，能够准确地测量出果蔬中具体农药的品种和含量。b. 快速检测方法：速测卡法、酶抑制法(国标方法)，能够较快地筛选出果蔬中是否含有较高含量的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。快速检测方法有其局限性，检出限一般远高于国家允许的农残标准含量，且不能检测出某种农药的具体含量，更不能较好地检测出有机氯或拟除虫菊酯类农残的含量，所以很难直接作为执法的依据。c. 快速检测方法：酶联法，能够较快地筛选出果蔬中是否含有某个具体农药残留量的农药残留检测方法。d. 几种方法的优缺点和当前适用性：检测时间检测准确度检测成本适用领域色谱法1-3天最好，准确度高最高定量实验室速测卡法15分钟内一般，误检率高较低现场检测酶抑制法15分钟内一般，误检率高较低现场检测酶联法30分钟内较好一般现场检测3) 蔬菜农药残留快速检测方法是否可用于水果农药残留的检测？在以上说明的两个快速检测标准中均未声明该标准可用于水果中农药残留的检测。主要原因是当时国家和行业重点监控的对象是蔬菜，所有快速产品研发机构均将蔬菜中农药残留的监控作为重点研发方向。另一方面，由于果树相对蔬菜有较强的个体特异性，是否能够通用仍是一个有待研究的课题。实际应用中，目前的蔬菜农药残留快速检测方法可应用于大量水果中农药残留的检测，但积累的案例和经验较少，还需在进一步应用中有针对性地完善产品研究。4) 果蔬中植物次生物质植物次生代谢物质从其生物合成途径可以将次生物质分成酚类、类萜、含氮化合物和其他次生物质4大类。植物次生代谢物质对害虫有忌避和毒杀作用，次生物质很多是对生物有毒的。a. 防御昆虫和微生物。次生代谢物对天敌昆虫，或是能感染植物的细菌或者真菌有毒性。比如有些蛾类幼虫就不吃某些植物的叶子，吃了就会毒死。可以提炼出来当真菌药物。 b. 对其他植物有毒性。分泌到附近的土壤中，比如有种树树下直径几米之内寸草不生，因为其他植物都被毒死了。由于植物次生物质有以上特性，在检测过程中，一般情况下，植物次生物质会对农残卡上的酶产生毒杀作用，与农药的作用机理相似，产生类似的抑制作用，容易产生假阳性。但也有个别植物次生物质对农药产生缓释作用，产生假阴性。在农业种植上，可利用植物次生物质的上述特点，采用不同品种果蔬套种的种植方式，降低病虫害。在农业育种上，也常采用植物次生物质的特点，对果蔬品种进行改良，通过杂交或创造特定种植环境的方法，使改良后的果蔬中含有较高含量的植物次生物质。在检测工作中，可通过缓冲液的处理降低植物次生物质的影响，或者采用整株浸泡/淋洗的方式来降低植物次生物质的溶出，从而降低植物次生物质的影响。3. 农残卡法检测果蔬中农药残留检测操作及注意事项1) 原理及操作步骤：胆碱酯酶可催化靓酚乙酸酯(红色)水解为乙酸和靓酚(蓝色)，有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在。注1：根据这个原理，将胆碱酯酶通过生物固化的方法固定在检测卡的白片上，同时将靓酚乙酸酯固化在检测卡红片上。a. 使用的试剂和材料：a) 固化有胆碱酯酶和靓酚乙酸酯试剂的纸片(农残速测卡)；b) PH7.5缓冲溶液(不可用纯净水代替)；c) 电子天平；d) 有条件时配备372恒温装置(如便携式农残仪)。b. 检测方法：(整体测定法)a) 选择有代表性的果蔬样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取5克放入带盖瓶中，加入10ml缓冲溶液，震摇50次，静置2分钟以上；注2： 取样时应取可食用部分，不宜取不能食用或习惯上不会食用的部分； 取样时不宜取果蔬腐烂的部分，也不宜取与包装物直接接触的部分，如蔬菜的包装绳经常会含有较有浓度的农药残留，污染与其接触的蔬菜； 果蔬表面有泥土时只宜用纸擦去，不可用水清洗，防止表面粘附的农药被洗除； 剪碎样品时不宜剪得过碎，防止果蔬内可能含有的植物次生物质过量的溶出，影响检测结果的准确性。部分含有较多有色果蔬汁的果蔬如果剪得过碎也易造成过量的色素溶出，影响结果的判断； 为保证样品的代表性，取果蔬样品时不宜单取果蔬的某一个部分，而应均匀地取果蔬各部分的混和样，如取叶菜样品时，可在梗、茎、叶等部位按重量比适当分配样品的重量； 作为粗筛法使用时，样品称量时重量不要求很精确，可存在一定的偏差； 样品浸泡时如缓冲液体积不足以完全浸泡果蔬表面时，可采用震摇的方式，也可以采用淋洗的方法，让缓冲液充分浸润果蔬表面； 样品浸泡时，不宜用纯净水代替缓冲液，否则会导致检测结果不准确，缓冲液除了能较好地浸出农药、活化胆碱酯酶等作用外，还能在一定程度上缓解植物次生物质的影响； 多样品检测，无条件震摇时，也可用延长浸泡时间的方式来达到浸提效果，如将浸泡时间延长至10分钟以上，本方法用于粗筛时对时间的要求不是很精确，可以适当延长时间，但注意防止色素及植物次生物质的过量溶出。b) 取一片速测卡，用白色药片沾取提取液(约3-4滴)，放置10分钟以上进行预反应，有条件时，在37恒温装置(便携式农残速测仪)中放置10分钟，预反应后的药片表面必须保持湿润；注3： 白色药片上沾取提取液的数量应根据天气适当调整，当湿度较高时（如春夏季），液体的蒸发量小，应适当减少提取液的添加量，反之，当湿度较低时（如秋冬季），应适当增加提取液的添加量，保持预反应后纸片的湿润非常重要，否则会影响红片上的靓酚乙酸酯试剂的水解，造成白片显色不均匀的情况。预反应后白片上的液体也不宜过多，否则易造成白片被红色的靓酚乙酸酯试剂污染； 预反应时，提取液中的农药残留对胆碱酯酶起作用，抑制酶的活性，预反应的时间应保证10分钟，如时间过短，胆碱酯酶得不到较好的被抑制，产生假阴性的结果。 由于酶的活性与温度有着较强的相关性，预反应与水解反应时应保证温度，当温度低于20时酶的活性将明显下降，易产生假阳性的结果。c) 将速测卡对折，用手捏3分钟或用恒温装置(便携式农残速测仪)恒温3分钟，使红色药片与白色药片叠合发生反应；注4： 注意保证白片与红片的充分叠合，否则会影响水解反应，造成显色的不均匀。 反应时间需保证3分钟，温度也应控制在要求的范围内，否则会影响水解反应的程度，导致结果不准确。d) 每批测定应设一个缓冲液(或纯净水)的空白对照卡。注5： 由于大部分的农药具备较强的挥发性，挥发后的农药会导致农残速测卡上酶的失活，从而导致农残速测卡的失效，在农残速测卡的保存场所不可使用杀虫剂，或者使用含有甲醛的实验室家俱存放农残速测卡。打开包装未使用完毕的农残速测卡更应得到很好的保管； 空白试验可确认农残速测卡是否已经失效或者缓冲液是否被污染。c. 检测方法：(表面测定法：粗筛法)（注解内容参照上列内容）a) 擦去水果表面灰尘，滴2-3滴缓冲溶液在水果表面，用另一片水果皮在滴液处轻轻磨擦；b) 取一片速测卡，将水果上的液滴滴在白色药片上；c) 放置10分钟以上进行预反应，有条件时，在37恒温装置(便携式农残速测仪)中放置10分钟，预反应后的药片表面必须保持湿润；d) 将速测卡对折，用手捏3分钟或用恒温装置(便携式农残速测仪)恒温3分钟，使红色药片与白色药片叠合发生；e) 每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。d. 结果判定：a) 与空白对照卡对比，白色药片不变色或为浅蓝色均为阳性结果，白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同为阴性结果；注6： 出现阳性结果时应复检一次，防止操作失误或农残速测卡失效造成的假阳性； 出现阳性结果时也应排除是否为植物次生物质的影响。b) 白色药片蓝色越浅则代表可能含有的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量越高；c) 符合率：在检出的30份以上阳性样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应在80%以上。注7： 农残速测卡检测出的阳性样品可能含有某一种农药残留，也可能是含有某几种农药残留，在进行气相色谱法验证时只能逐一地对各种可能含有的农药进行筛选和测定，需要较长的时间和产生较高的费用； 由于胆碱酯酶对每种农药的敏感程度存在较明显的差异性，特别是目前很多改性农药的使用，以及植物次生物质的影响，一定程度上影响检测结果的准确性，所以有可能出现假阳性的情况； 农残速测卡片生产商需保证速测卡对农药特异性具备较高的适应性，将速测卡的检测结果与气相色谱法验证的结果进行比对，必须保证符合率在80%以上，否则为不合格的产品； 用户可以通过配制一定浓度的农药验证农残速测卡的检出率。2) 其他注意事项：a. 颜色及植物次生物质影响的预防a) 有些水果本身含有颜色较浓的果汁，样品处理时应尽可能避免水果果汁对农残卡显色的干扰，可在样品浸泡前用纸巾或干净的纱布吸取果汁后再浸泡，且浸泡时间不宜过长，在判断结果时需区分果汁自带的颜色，如果汁为蓝色，则不可破碎样品，只对果皮进行检测；b) 含有较高含量植物次生物质的果蔬品种可参考本文前面的内容，在检测这些果蔬时需适当调整样品处理的方法。由于对植物次生物质的研究水平限制，目前还有较多抗病虫害能力较强的果蔬改良品种或新品种内含有较高含量的植物次生物质，也需在检测时注意。b. 所有用于样品处理的工具应保持卫生，样品处理及存放卡片的房间均不可喷洒杀虫剂，否则可能导致卡片失效，出现假阳性。4. 农残酶抑制法检测果蔬中农药残留检测操作及注意事项1) 原理及操作步骤：在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶(目前国内主要采用乙酰胆碱酯酶)的正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关，正常情况下，酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱)水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。a. 使用的试剂和材料：a) PH8.0缓冲溶液：一包缓冲剂溶于500ml蒸馏水(或纯净水)配制成缓冲液；b) 显色剂：取1瓶，加入15ml缓冲溶液，充分溶解摇匀，4冰箱中保存；c) 底物：取1瓶，加入15ml缓冲溶液，充分溶解摇匀，4冰箱中保存；d) 乙酰胆碱酯酶：取1瓶，加入3ml缓冲溶解摇匀，4冰箱中保存；e) 电子天平；f) 恒温装置（可使用恒温水浴锅）；g) 农药残留快速检测仪。注8： 以上缓冲液、显色剂、底物和酶为150次/套的配制方法，具体配制方法根据不同产品可能会不同。 配制酶、底物、显色剂时需使用缓冲溶液，并且缓冲溶液的用量应准确，否则会影响这几种物质的浓度，破坏酶水解反应，并导致检测结果不准确。b. 检测方法：a) 取有代表性的样品，擦去表面的泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品2g，放入容器（50ML烧杯或带盖样品处理杯）内，加入10ml缓冲液，浸泡提取10分钟左右，浸泡后的溶液如有颜色或混浊可用滤纸进行过滤后用于检测；注9：参照注2b) 试剂对照：在试管中加入2.5ml缓冲液，再加入100ul酶和100ul显色剂，摇匀后于37放置10-15分钟(每批样品的控制时间应一致)，加入100ul底物并摇匀，此时检测液已开始变色，应立即倒入比色皿，放入仪器内启动检测，3分钟后仪器自动保存对照值；注10： 加液时注意移液枪应垂直于试管的中央，防止显色剂或酶沾到管壁上，未充分进入反应液中； 如无保温装置（如恒温水浴锅），夏天的时候环境温度高，预反应时间（1015分钟）可适当缩短，冬天的时候环境温度低，预反应时间可适当延长，预反应时间长短的选择可根据空白对照的结果中吸光度（A）的值进行判断，国家标准要求A应不小于0.3，试验时可考虑A应大于0.4，时间越长，A值会相对升高； 加入底物后，底物会马上产生水解，溶液的颜色立即开始变黄，环境温度较高时则更明显，所以加入底物后应立即倒入比色皿后放入仪器启动检测，若放入时间较慢（如超过30秒），则检测结果较不准确，空白测试如果不准确，则后面的样品检测结果都会不准确。c) 样品溶液检测：在试管中加入2.5ml提取液(浸泡液)，其它步骤与试剂对照相同，3分钟后仪器自动显示检测结果(抑制率)；注11：同注10，8通道仪器试剂对照（1通道）和样品检测（其它通道）可以同时进行。d) 仪器抑制率检测结果的计算方式：抑制率(%) = (A0 At)/ A0 100A0：试剂对照溶液反应3分钟，吸光度的变化值At：样品检测溶液反应3分钟，吸光度的变化值注12： 8通道仪器中以上计算由仪器自动完成，只需在仪器上读取抑制率即可； 3分钟测试结果为国家标准规定值，在实际应用中，可在保证A值大于0.4的情况下调整反应的时间，如A值小于0.4可适当延长反应时间（仪器内置为180秒），如A值大于0.4时可适当缩短反应时间。在对农残检测原理和操作不是很熟悉的情况下，建议这项参数不要做调整。c. 结果判定：a) 结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示，即抑制率；b) 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率大于50%，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果，阳性结果的样品需要重复检测2次以上，以最后检测的结果为准；c) 在检出的抑制率大于50%的30份阳性样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应在80%以上。注：根据农业部颁布的标准，将抑制率为70%以上的样品判断为阳性(不合格)样品，70%以下则判断为阴性(合格)样品，主要是因为酶抑制法在使用过程中还存在较大的系统误差。注13：参见注7d. 说明：a) 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及蕃茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这些样品时，可采用整株浸提，对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采用整株浸提的方式，以减少色素的干扰；b) 当温度低于37，酶反应的速度随之放慢，加入酶液和显色剂后反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以酶试剂对照测试3分钟时测定的A值不小于0.3时为准，肉眼观察时，如果3分钟后空白对照溶液与平常的3分钟后颜色相比黄色较浅时，应适当延长时间，使其颜色相一致，根据确定的时间重新启动仪器再次进行试剂对照测试。2) 其他注意事项：使用酶抑制法检测农药残留，因该类检测为生物检测类别，试验要求较高，其结果的准确性受到很多方面的影响，任何因素的变化都有可能导致试验的失败，包括假阳性(将合格的产品判断为不合格的产品)和假阴性(将不合格的产品判断为合格的产品)，实际检测中，请特别关注以下几个方面的因素：a. 试剂运输及保存条件：要求：a) 试剂运输最宜在冷冻或冷藏的条件下进行，常温条件下运输的试剂寿命会因为运输条件的情况(特别是高温)产生一定的降低；b) 酶、底物、显色剂在粉末状时可保存在4或冷冻环境下，按要求保存，保质期可达1年；在配制成溶液后则应保存在4的环境下，每次使用保质期可达四周左右，不可再放于冷冻环境，反复冻溶时，酶的活性会快速下降，在3次左右可能完全失去活性，不能使用；由于各个检测点使用的冰箱内部温差控制能力不一致，建议将试剂放在冰箱的前板蛋格位置，可避免结冰情况的出现，无蛋格的冰箱应放置在冰箱的前沿；c) 每次测试完成后应及时将酶、底物和显色剂放入冷藏保存，不可长时间暴露在常温环境里；d) 缓冲液可在常温下保存。运输或保存不好对试剂和检测产生的影响以及降低影响的方法：a) 运输或保存不好时，酶的活性会损失，造成3分钟内的吸光度变化值(A)小于0.3，用这样的酶用于检测则结果不准确；b) 当这些影响较小，可通过延长酶、显色剂的反应时间(原来为10-15分钟，如可延长至20分钟)来降低其影响，也可延长加入底物后的反应时间，将默认的180秒调整到4分钟（240秒）左右，使吸光度变化值不小于0.3(我司试剂出厂时通常为0.8，常温运输后通常不低于0.5)，请注意如果延长时间，试剂对照和样品检测均应保持同样的时间，。b. 样品的处理：由于酶抑制法较易受色素和植物次生物质的影响，在样品处理时应尽可能排除这些影响因素。a) 为了降低色素的干扰，破碎样品时应注意不要太碎(特别是小青菜类)，应按说明书的“剪成1cm见方碎片”，同时，浸泡提取的时间不宜太长，以免色素被大量提取出来，另外还要注意一些汁液中含有可见颜色的蔬菜，如蕃茄、红苋菜的浸泡液可能出现红色，这时宜采取整株浸提的方式，或用缓冲液反复淋洗蔬菜表面的方法进行提取；b) 为降低植物次生物质的影响，可采用整株浸泡的方式，该类含有植物次生物质的蔬菜请参见本文前面的内容。样品处理不适宜产生的结果：a) 如果产生色素的干扰，检测液的颜色会加深，这样会出现假阴性的判断，即不合格的样品可能会判断为合格的产品，造成农药残留检出率低；b) 如果植物次生物质的干扰，检测液的颜色会变浅，酶液无法正常水解，这样会出现假阳性的判断，即将合格的样品判断为不合格，造成农药残留检出率高。c. 环境温度的控制：有条件的检测单位，应尽可能配备恒温装置(如恒温水浴锅)，暂时没有条件的检测单位可通过以下方法来降低影响：a) 适当延长反应时间，延长方式同本文前面所列方法；b) 当室温低于15度以下时，延长反应时间也不能得到较好的效果，可以考虑在检测室开空调，将室温调至25以上，同时结合延长反应时间的方式；注：如果反应时环境温度过低，酶的反应速度太慢，检测结果准确性下降，更易受其它条件的影响，出现假阳性或假阴性结果的可能性均很大。d. 移取试剂的控制：移取试剂及用具需特别注意以下事项：a) 检测人员需熟练移液枪的操作，酶、显色剂和底物的移取量均为100ul，移取时容易由于操作不当造成移取量不准，影响酶的水解结果，也容易造成假阳性或假阴性的情况，日常检验时可在吸头的100ul部位进行标记，每次移取时，观察移取的液位是否在标识处，如果有明显偏差，应重新移取；b) 移取试剂时应特别注意预防酶、显色剂和底物交叉污染，在检测过程中可以专枪专用，将3种试剂的移取分开，移取出来的试剂如果不用应丢弃，不可放回试剂瓶中，防止由于枪头带来的污染；c) 枪头及试管清洗时应清洗干净，并分开保管，降低交叉污染的可能性；d) 酶和底物被污染后肉眼观察可见其变色(正常情况下为无色)或变得混浊，这时试剂已经不能再使用。e. 酶试剂是否可用的感官(肉眼)辅助判断方式：a) 观察酶和底物是否为澄清，无色，显色剂是否为浅黄色；b) 做试剂对照溶液，不需放入仪器，观察3分钟的变色情况，如3分钟时变为正常深浅的黄色(平常应注意观察正常时检测3分钟后比色皿中的试剂对照溶液的颜色，以该颜色的深浅为正常)，则试剂正常。因试剂对照溶液在10分钟内颜色会变得越来越深，如果3分钟时颜色较浅，可继续观察其颜色在什么时间变得正常，并结合这个时间延长预反应的时间，如果颜色变得正常的时间较短，延长的时间也可以较短，反之则较长。f. 样品检测结果与样品检测溶液的颜色关系：a) 试剂对照溶液检测后比色皿内溶液(反应3分钟后)的颜色应为正常深浅的黄色；b) 阳性结果的样品检测溶液检测后比色皿内溶液的颜色应为无色或浅黄色，阴性结果的样品检测溶液检测后比色皿内溶液的颜色应为与试剂对照溶液接近的黄色，黄色越深代表样品检测溶液中有机磷或氨基甲酸酯的含量越低，黄色越浅代表样品检测溶液中有机磷或氨基甲酸酯的含量越高；c) 我司仪器在超高压或超低压时会启动保护装置，如果出现不符合上条的情况，请及时联系我司售后服务人员，由售后服务人员指导将仪器恢复到出厂设置，未恢复前不能再用于检测，否则结果不准确。g. 仪器是否正常的一种验证方式：当检测数据出现异常，进而怀疑仪器是否正常时，可通过以下方式检查仪器。a) 将仪器关机后重新启动，制作试剂对照溶液，放在试剂对照通道进行试剂对照；b) 将试剂对照后比色皿内的试剂对照溶液放置3-5分钟，然后分别按不同的量倒入3-5个比色皿内，用蒸馏水稀释到约3ml高度处，几个比色皿内应显示有深浅区别的浅黄色，另用一个比色皿中倒入3ml左右的蒸馏水，将上述的几个比色皿放入检测通道内检测，检测结果的数值(抑制率)应根据颜色的深浅而不同，颜色越深的溶液抑制率越低，颜色越浅的溶液抑制率越高，如果出现这个现象，则代表仪器检测性能正常。h. 酶试剂检测结果准确性的一种验证方式：a) 购买有机磷类农药，如敌敌畏、甲胺磷、乐果、敌百虫、灭多威或呋喃丹等任意一种；b) 将其配制成10ppm、50ppm、100ppm，具体稀释倍数可按农药标识浓度选取，如40%乐果，则分别配制成4万倍(10ppm)、8000倍(50ppm)、4000倍(100ppm)。(配制公式：倍数=1万*农药浓度 / 配制浓度)将以上配制的溶液作为样品提取液按样品检测方法检测，观察其结果是否为检出，且浓度越高抑制率越大。i. 仪器及配套软件的使用方法请参见仪器或软件说明书。5. 农药常见问题解答1) 部分超市已配备农药快速检测方法，为什么仍有农药残留超标的问题呢？ 超市所使用的测试方法是“酶抑制率法+分光光度法”，是农业部认可作农药快速检测的方法。所谓快速检测技术，一般是建议利用于作初步抽查，因为该技术具有较强的针对性，只对蔬果中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留有效，而且存在以下不足： 一是在对部分蔬果农残检测中可能出现“误检”现象。一方面，各蔬菜品种间（如：葱蒜类、香菜、韭菜等14种容易出现假阳性的蔬菜）对检测抑制率有不同干扰和影响。另一方面，因色素的干扰可能影响检测结果的准确性。 二是无法分析国家禁止使用的有机氯类农药。判断蔬果农残是否符合安全标准，不仅要测定其残留总量，而且还要检测是否使用了国家禁用的农药。由于“酶抑制率法+分光光度法”只能检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的总量，即使检测结果显示并不超标，也可能因其中含有国家禁用农药而造成漏检，从而影响检测结果的准确性。 三是不能检测部分类别的农药。由于酶抑制率法是针对有机磷和氨基甲酸脂类农药的快速检测方法，因此，不能有效检出对硫丹（endosulfan）、三氯杀虫脂（benzet