高考高考生物一轮复习 专题二 微生物的培养与应用（第四十四课时）课题13 微生物的实验培养、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数、分解纤维素的微生物的分离课件 新人教版选修1.pptVIP

专题2微生物的培养与应用 第四十四课时课题1 3微生物的实验培养 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 分解纤维素的微生物的分离 1 微生物的分离和培养2 培养基对微生物的选择作用3 利用微生物进行发酵来生产特定的产物 回扣教材 考点一培养基 1 培养基的定义 人们按照微生物对的不同需求 配制出供其的营养物质 营养物质 生长繁殖 2 类型 培养基按照可分为液体培养基和固体培养基 在液体培养基中加入凝固剂后 制成琼脂固体培养基 是实验室最常用的培养基之一 微生物在固体培养基表面生长 可以形成的 物理性质 琼脂 肉眼可见 菌落 3 营养物质 各种培养基一般都含有水 源 源和无机盐四种营养物质 满足微生物生长还需要适宜的 培养霉菌时需要将培养基的ph调至酸性 培养细菌时需将ph调至或性 氧气的要求 根据微生物的需求提供有氧或无氧环境 物质 如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加等 碳 氮 中性 微碱 特殊营养 维生素 ph 这种新型抗生素对细菌生长无影响 或这种新型抗生素对细菌的生长有抑制作用 蛋白胨和酵母提取物 bedca 杀死活的微生物 杀死24小时中由细菌芽孢萌发而生长的微生物 将培养基在37 下放置3 5天 如果无微生物生长 则证明培养基已达到灭菌效果 将圆片在不添加任何抗生素的无菌水中浸泡一段时间 平板划线或稀释涂布平板 不能转动绒布 见下图 考点二无菌技术 回扣教材 获得纯净培养物的关键是防止外来 的入侵 要注意以下几个方面 1 对实验操作的 操作者的 和 进行 和 2 将用于微生物培养的器皿 接种用具和培养基等器具进行 3 为避免周围环境中微生物的污染 应在酒精灯 进行 4 实验操作时应避免 处理的材料用具与 的物品相接触 杂菌 空间 衣着 手 清洁 消毒 灭菌 实验操作 火焰附近 已经灭菌 周围 b 考点三纯化大肠杆菌以及菌种的保藏 回扣教材 1 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 1 方法步骤 称量 溶化 2 倒平板操作的步骤 计算 灭菌 倒平板 将灭过菌的培养皿放在 的桌面上 右手拿装有培养基的锥形瓶 左手拔出棉塞 右手拿锥形瓶 将 迅速通过火焰 用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙 右手将锥形瓶中的培养基 约10 20ml 倒入培养皿 左手立即盖上培养皿的皿盖 等待平板 大约需5 10min 然后 将平板倒过来放置 使培养皿盖在下 皿底在上 火焰旁 瓶口 冷却凝固 2 纯化大肠杆菌 1 微生物接种的方法最常用的是 法和 法 2 平板划线法是通过 在琼脂固体培养基表面 的操作 3 稀释涂布平板法是将 进行一系列的 稀释 然后将不同稀释度的菌液分别涂布到 培养基的表面 进行培养 分为 和 两步 4 用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是 使聚集在一起的微生物 成单个 从而能在培养基 形成单个的 平板划线 稀释涂布平板 接种环 连续划线 菌液 梯度 琼脂固体 系列稀释操作 涂布平板操作 分散 细胞 表面 菌落 5 平板划线法操作步骤 将接种环放在火焰上 直到接种环 在火焰旁 接种环 并打开盛有菌液的试管的棉塞 将 通过火焰 将 的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 将 通过火焰 并塞上棉塞 灼烧 烧红 冷却 试管口 已冷却 试管口 左手将皿盖打开一条缝隙 右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内 划三至五条 盖上皿盖 注意不要划破 灼烧接种环 待其冷却后 从第一区域划线的 开始往第二区域内划线 重复以上操作 在三 四 五区域内划线 注意 将最后一区的划线与第一区相连 将平板 放入培养箱中培养 平行线 培养基 末端 不要 倒置 6 涂布平板操作的步骤 将 浸在盛有酒精的烧杯中 取 菌液 不超过0 1ml 滴加到培养基表面 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上 待酒精 后 8 10s 用涂布器将菌液 地涂布在培养基表面 涂布器 少量 引燃 燃尽 冷却 均匀 3 菌种的保存 1 对于频繁使用的菌种 可以采用 保藏的方法 临时保藏方法将菌种接种到试管的固体 上 在 的温度下培养 当菌落长成后 将试管放入 的冰箱中保藏 以后每 个月 都要重新将菌种从旧的培养基上 到新鲜的培养基上 缺点 这种方法保存的时间不长 菌种容易 或产生 临时 斜面培养基 合适 4 3 6 转移 被污染 变异 2 对于需要 保存的菌种 可以采用 管藏的方法 在3ml的甘油瓶中 装入1ml甘油后 将1ml培养的菌液转移到甘油瓶中 与甘油充分混匀后 放在 的冷冻箱中保存 长期 甘油 灭菌 20 d 1 17 108 多 不能 因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程 每次划线前要灼烧 冷却后从上一区划线末端开始划 首尾区不重叠 b 考点四筛选菌株 统计菌落数目 设置对照 回扣教材 1 筛选菌株 1 自然界筛选 实例 dna多聚酶链式反应 pcr 要求使用 酶 科学家从水生耐热细菌taq中分离到耐高温的taqdna聚合酶 耐高温的dna聚合 方法 根据目的菌对生存环境的要求 到相应的环境中去寻找 2 实验室中筛选 人为提供有利于目的菌株生长的条件 包括 等 同时 或 其他微生物生长 3 选择培养基在微生物学中 将允许 种类的微生物生长 同时抑制或阻止 微生物生长的培养基 称作 培养基 营养 温度 ph 抑制 阻止 特定 其他种类 选择 2 统计菌落数目测定微生物数量的常用方法有 法和 法 3 设置对照 1 设置对照的主要目的是排除 中 对实验结果的影响 提高实验结果的可信度 2 判断培养基中是否有杂菌污染 3 判断选择培养基是否具有筛选作用 稀释涂布平板 显微镜直接计数 实验组 非测试因素 将未接种的培养基在相同的条件下进行培养 对照培养基 营养物质齐全 接种后培养观察菌落数目 d 考点五土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 回扣教材 1 实验设计实验设计包括 所需 具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排 实验方案 仪器 材料 用具和药品 2 操作提示 1 无菌操作 取土样用的小铁铲和盛土样的信封在 都需要灭菌 应在 称取土壤 在 附近将称好的土样 锥形瓶中 塞好棉塞 在 土壤溶液的过程中 每一步都要在 操作 2 做好标记本实验使用的平板和试管比较多 为避免混淆 最好在 就做好 例如 在标记培养皿时应注明 以及平板上培养样品的 等 使用前 火焰旁 火焰 倒入 稀释 火焰旁 使用前 标记 培养基种类 培养日期 稀释度 3 课题延伸本课题对能分解尿素的细菌进行了初步的筛选 对分离纯化的菌种作进一步的鉴定 还需要借助 的方法 在细菌分解尿素的化学反应中 细菌合成的 将尿素分解成了 ph 以尿素为唯一氮源的培养基加入 如果ph升高 可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素 生物化学 脲酶 氨 升高 酚红指示剂 指示剂变红 尿素是唯一的氮源 只有能利用尿素的微生物才能生长 平板划线法或稀释涂布平板法 酚红 红 和 灭菌 考点六分解纤维素的微生物的分离 回扣教材 1 纤维素 是一种由 首尾相连而成的高分子化合物 是地球上含量最丰富的 物质 是自然界中纤维素含量最高的天然产物 有些微生物能分解利用纤维素 因为它们能够产生 葡萄糖 多糖类 棉花 纤维素酶 2 纤维素酶 是一种复合酶 一般包括 酶 酶和 酶 前两种酶能使纤维素分解成纤维二糖 第三种酶能将纤维二糖分解成 3 筛选纤维素分解菌的方法是 该方法可以通过 反应直接筛选 其原理是 刚果红可以与纤维素形成 当纤维素被 分解后 红色复合物无法形成 出现以 为中心的 我们可以根据 来筛选纤维素分解菌 c1 cx 葡萄糖苷 葡萄糖 刚果红染色法 颜色 红色复合物 纤维素酶 纤维素分解菌 透明圈 是否产生透明圈 4 纤维素分解菌大多分布在富含 的环境中 也可以将富含纤维素的物质埋在土壤中 经过30天左右 再从已腐烂的物质埋藏处筛选 5 在将样品稀释涂布到 的培养基上之前 可以用 增加纤维素分解菌的浓度 培养时要在 培养 6 常用的刚果红染色法有两种 一种是 再加入 另一种是 纤维素 纤维素分解菌 鉴别纤维素分解菌 选择培养基 摇床上振荡 先培养微生物 刚果红染色 在倒平板时就加入刚果红 7 为确定得到的是纤维素分解菌 尚需进行 的实验 纤维素酶的发酵方法有 发酵和 发酵两种 纤维素酶的测定方法一般采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的 进行定量测定 发酵产纤维素酶 液体 固体 葡萄糖 培养基表面的菌悬液会出现积液 导致菌体堆积 影响分离效果 避免培养基污染棉塞 量与活性 j4 发酵过程会产热和产酸 j4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高 c c c a c a c d 碳源 酒精灯火焰 稀释涂布平板 敏感 绿脓杆菌对头孢菌素的敏感性比美罗培南弱 杂菌污染 抗比阿培南的绿脓杆菌形成的菌落 美罗培南 平板划线 nano3 尿素和葡萄糖 1 165 109 原油 选择 固体 强 氮源和无机盐 只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长繁殖 细胞分裂素 母液 接种环 接种环灼烧后未冷却 划线未从第一区域末端开始 自养厌氧型 ae 在酒精灯火焰旁操作 接种环放在火焰上灼烧并冷却 锥形瓶的瓶口火焰灼烧灭菌 c a培养液缺少氮源 细菌不能很好生长 b培养液所含营养物质比较齐全 不能筛选出细菌a 增加稀释倍数 40000 异氧需氧型 尿素为唯一氮源 酚红 45 摇匀 振荡 混匀 涂布器 玻璃刮刀 稀释涂布 平板 法 红色环带 105或106 无氧呼吸 d 石油 琼脂 灭菌 苏丹 或苏丹 萃取法 油脂 血细胞计数板 稀释涂布平板 45 40 高压蒸汽灭菌 液体 系列稀释 或 梯度稀释 淀粉 出现透