特殊毒性试验PPT课件.ppt

药物毒理学 药物特殊毒性研究 1 研究对遗传物质是否有损伤 是否会引起肿瘤 衰老及畸胎等 目的和意义 药物特殊毒性研究 特点 特殊毒性试验存在着种属差异性 定性差异定量差异 2 定性差异 反应停对家兔和 种灵长类动物致畸 但至少对10种品系大鼠 15种品系小鼠 2种家狗 种田鼠和 种灵长类动物不致畸可的松对兔子和小鼠强力致畸 但对大鼠不致畸硫唑嘌呤对大鼠不致畸 但对兔子强致畸氨磺丁脲引起大鼠 小鼠眼畸形 但对兔子却引起脸和内脏畸形 3 定量差异 致畸剂量在人与动物 动物与动物间差异明显表人类与动物致畸剂量比较药物最低致畸剂量 kg d 人与动物比值人动物反应停0 5 1 0mg兔2 5mg5 2 5氨基喋呤50 g大鼠100 g2氨甲喋呤42 g大鼠200 g4 8乙烯雌酚20 80 g恒河猴200 g10 2 5苯妥英钠2mg小鼠50mg25 4 内容 遗传毒性致癌作用生殖和发育毒性药物依赖性 药物特殊毒性研究 5 药物的遗传毒性 6 遗传毒性研究 GenotoxicityStudy 是药物非临床安全性评价的重要内容 它与其他毒理学研究尤其是致癌性研究 生殖毒性研究有着密切的联系 是药物进入临床试验及上市的重要环节 拟用于人体的药物 应根据受试物拟用适应症和作用特点等因素考虑进行遗传毒性试验 7 遗传毒性试验 指用于检测通过不同机制直接或间接诱导遗传学损伤的受试物的体外和体内试验 这些试验能检出DNA损伤及其损伤的固定 遗传毒性试验的用途 主要用于致癌性预测 遗传毒性试验的目的 预测受试物是否有遗传毒性 降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险 药物的遗传毒性研究 8 遗传毒性和致突变 联系 区别 药物的遗传毒性研究 9 目前 遗传毒性试验方法较多 所使用的生物材料多种多样 可以利用原核细胞到真核细胞直至高等哺乳动物细胞在体外进行添加或不添加代谢活化物质的试验 也可在整体动物上进行体内试验 根据试验检测的遗传终点可将检测方法分为三大类 基因突变染色体畸变DNA损伤与修复 从试验系统来分 体内试验体外试验 分类 10 遗传毒性试验方法分类 微生物回复突变试验基因突变哺乳动物培养细胞基因突变试验果蝇伴性隐性致死试验哺乳动物培养细胞染色体畸变试验染色体畸变啮齿类动物微核试验啮齿类动物显性致死试验精原细胞染色体畸变试验程序外DNA合成试验DNA损伤与修复姐妹染色单体交换试验SOS显色试验 检测终点 11 药物的遗传毒性研究 推荐的标准试验组合 1 一项体外细菌基因突变试验 2 一项用哺乳动物细胞进行的体外染色体损伤评估试验或体外小鼠淋巴瘤tk试验 3 一项用啮齿类动物造血细胞进行的体内染色体损伤试验 12 原理鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸 故在缺乏组氨酸的培养基上 仅少数自发回复突变的细菌生长 假如有致突变物存在 则营养缺陷型的细菌回复突变成原养型 因而能生长形成菌落 据此判断受试物是否为致突变物 某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变 故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的S9混合液 S9混合液 1 鼠伤寒沙门菌回复突变试验 微生物回复突变试验 13 14 突变型 野生型 正向突变 回复突变 受试物 S9混合物 鼠伤寒沙门菌His 鼠伤寒沙门菌His 15 试验菌株 TA97 TA98 TA100和TA102剂量设计 1 受试物至少应有5个剂量 2 最低剂量 1 g 皿或0 1 g 皿 3 最高剂量 可溶 无毒 5mg 皿可溶 有毒 显示明显毒性 但不超过5mg 皿难溶 无毒 产生沉淀的最低浓度 但不超过5mg 皿难溶 有毒 多个产生沉淀的浓度 显示明显毒性 不超过5mg 皿 16 对照设置溶剂 阴性对照 DMSO或者乙醇 已知致突变原 阳性对照 菌株鉴定组氨酸营养缺陷鉴定深粗糙型鉴定uvrB缺失的鉴定R因子鉴定 基因型鉴定 17 肝微粒体酶S9代谢活化系统 1 S9诱导 多氯联苯500mg kg大鼠ip 2 S9的制备 低温无菌条件制备肝匀浆4 9000g 离心10min上清即为S9 3 S9混合液 平衡盐系统 其中含S95 30 v v 18 结果评价 Rt Rc 2 并有量效关系 判为阳性 滤纸片周围长出一圈密集的回变菌落 试验方法 点试法 19 20 2 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验 21 22 23 细胞 CHL CHO 人外周血淋巴细胞等 建议首选中国仓鼠肺细胞 CHL 需定期检查核型和有无支原体等污染 80 或液氮冻存 剂量 高剂量以50 细胞生长抑制浓度为基准 最高不要超过10mM分子量 溶解受限时可采用饱和浓度 中低剂量用倍量稀释法 至少 个剂量 24 对照 阴性对照 溶剂阳性对照 已知致突变剂 对照 代谢活化 肝微粒体酶S9系统 应用诱导剂处理后的哺乳动物肝微粒体酶 S9 进行体外代谢活化试验时间 药物作用时间 药物和细胞接触非活化组作用24h和48h收获细胞 代谢活化组作用6小时以上标本制作时间 药物和细胞接触后起算 分别在24h和48h收获细胞 在1 5个细胞周期时收获细胞 若为阴性结果 作用时间可大于1 5个细胞周期 25 2 读片分析 每种浓度至少观察100个中期分裂相 在油镜下分别记录染色体的结构畸变 多倍体以及畸变细胞数和畸变类型包括 染色体有无断裂 缺失 互换和裂隙多倍体的出现结果判定 细胞畸变率 有染色体畸变的细胞数 分析染色体的细胞总数 100细胞畸变率结果判断 5 阴性 5 10 可疑 10 20 弱阳性 20 50 中度阳性 50 强阳性 注意 遇阳性或可疑阳性时 可选啮齿动物显性致死试验或精原细胞染色体畸变试验 26 正常染色体 畸变染色体 27 3 啮齿类动物体内微核试验 微核 Micronucleus 染色单体或染色体的无着丝点断片 或因纺锤体受损而丢失的整个染色体 在细胞分裂后期 仍然遗留在细胞质中 末期之后 单独形成一个或几个规则的次核 被包含在子细胞的胞质内 因比主核小 故称为微核 28 原理 染色体畸变导致断裂子代细胞主核之外的一个或多个颗粒 微核 骨髓嗜多染红细胞 无核 易于鉴别微核动物 小鼠 至少6只 组 各5只 组给药剂量及途径 3个剂量 高剂量LD50 2与临床拟用给药途径相同 一般单次给药 29 对照 阴性对照 溶剂阳性对照 如环磷酰胺骨髓采样 给药后12 72h内5个时间点若无差别 给药后24h 涂片制备 涂片固定染色封片 镜检 30 判定 1 受试物所诱发的微核率的增加与剂量相关2 某一测试点微核增加可重复并有统计学意义符合上述一条即可判为阳性 注意 1 对Giemsa染色中获得可疑阳性或弱阳性结果的药物 必须用荧光染色以进一步肯定或否定阳性结果2 不易通过骨髓屏障的药物 可补充用哺乳动物胎肝细胞微核试验进一步研究3 如遇阳性或可疑阳性时 可选择UDS试验或SOS显色试验 31 32 内容 遗传毒性致癌作用生殖和发育毒性药物依赖性 药物特殊毒性研究 33 致癌试验 34 致癌试验的目的是考察药物在动物体内的潜在致癌作用 从而评价和预测其可能对人造成的危害 由于致癌试验耗费大量时间和动物资源 只有当确实需要通过动物长期给药研究评价人体中药物暴露所致的潜在致癌性时 才应进行致癌试验 任何体外实验 动物毒性试验和人体应用中出现的潜在致癌性因素均可提示是否需要进行致癌试验 动物致癌试验的结果与人体的相关性仍然存在一些争议 作用机制的研究对评价动物出现的肿瘤与人体的相关性是有价值的 当动物致癌试验出现阳性结果时 可能需要做进一步的研究 探讨其作用机制 以帮助确定是否存在对人体的潜在致癌作用 35 历史背景在日本 根据1990年 药物毒性研究指导原则手册 如果临床预期连续用药6个月或更长时间 则需要进行致癌试验 尽管连续用药少于6个月 如果存在潜在致癌性因素 也可能需要进行致癌试验 在美国 大多数药物在广泛应用于人体之前 已进行了动物致癌试验 根据美国药品食品监督管理局 FDA 要求 一般药物使用3个月或更长时间 需要进行致癌试验 在欧洲 欧共体药品管理条例 规定了需要进行致癌试验的情况 包括长期应用的药物 即至少6个月的连续用药 或频繁的间歇性用药以致总的暴露量与前者相似的药物 自2005以来 我国 药品注册管理办法 附件中规定预期临床连续用药6个月以上或需经常间歇使用的药物应进行致癌试验 并指出了进行致癌试验的多个考虑因素 2007年1月国家食品药品监督管理局药品审评中心发布的 治疗用生物制品非临床安全性技术审评一般原则 中阐述了相关产品致癌试验的要求 2009年10月药品审评中心组织毒理专家 企业和研究单位代表召开了制定 药物致癌试验必要性技术指导原则 专题讨论会 会上基本认同了ICHS1A中内容的适用性 并结合国内情况进行了一些调整 36 为指导药物研究开发 国家食品药品监管局日前印发了 药物致癌试验必要性的技术指导原则 指导原则 阐述了何种情况下需要进行药物致癌试验 以避免实验动物资源 人力资源和物力资源的不必要使用 致癌试验的指导性文件 指导原则 适用于 药品注册管理办法 中的相关化学药 其基本原则也适用于中药 天然药物和生物制品 37 提出预期临床用药期至少连续6个月的药物某些药物存在潜在致癌的担忧因素当抗肿瘤药物拟用于非带瘤患者的辅助治疗或非肿瘤适应证长期使用时 适用受试物 对于化合物改盐 改酸根或碱基的情况 若已有原化合物致癌试验数据 应提供其与原化合物比较的药代动力学 药效学或毒性等方面无明显改变的证据 当药物暴露量和毒性发生变化时 可能需进行桥接研究来确定是否需要进行新的致癌试验 对于酯类和络合衍生物 上述类似数据对考虑是否需进行新的致癌试验是有价值的 应根据具体情况具体分析 38 潜在致癌因素如果某些药物存在潜在致癌的担忧因素 可能需要进行致癌试验 应慎重评价这些潜在致癌因素 因为这是大多数药物进行致癌试验的最主要理由 应考虑的几个因素包括 1 已有证据显示此类药物具有与人类相关的潜在致癌性 2 其构效关系提示致癌的风险 3 重复给药毒性试验中有癌前病变的证据 4 导致局部组织反应或其它病理生理变化的化合物或其代谢产物在组织内长期滞留 39 用于晚期全身肿瘤的抗肿瘤药物 通常不需要进行致癌试验 对于替代治疗的内源性物质 浓度在生理水平 尤其是当同类产品 如动物胰岛素 垂体来源的生长激素和降钙素 已有临床使用经验时 通常不需要进行致癌试验系统暴露量非常小的局部用药不需要以经口给药途径来评价其对内脏器官的潜在致癌作用 若有潜在光致癌性担忧 可能需要进行皮肤给药致癌试验 除非有明显的全身暴露或相关担忧 经眼给予的药物通常不需要进行致癌试验有致癌潜在 但是短期接触或非经常使用药物 麻醉 放射 经化学合成 从动物或人体组织中提取纯化或生物技术方法 如重组DNA技术 生产的内源性肽类或蛋白质及其类似物 可能需要特殊考虑 不适用受试物 40 内源性多肽 蛋白质及其类似物在下述情况下可能仍需要进行长期致癌性评价 1 其生物活性与天然物质明显不同 2 与天然物质比较显示修饰后结构发生明显改变 3 药物的暴露量超过了血液或组织中的正常水平 41 给药途径 尽可能与临床拟用途径一致如果不同给药途径下代谢及系统暴露量相似 可采用其中一种给药途径开展致癌试验 重点关注部位 时间安排 指导原则 明确 当需要进行致癌试验时 通常应在申请上市前完成 若对患者人群存在特殊担忧 在进行大样本临床试验之前需完成啮齿类动物的致癌试验 对于开发用于治疗某些严重疾病 如艾滋病 的药物 申请上市前可不必进行动物致癌试验 但在上市后应进行这些试验 42 药物致癌作用的评价 致癌作用的评价方法 致突变试验哺乳动物培养细胞恶性转化试验彗星试验哺乳动物短期 长期致癌试验短期转基因动物模型 小鼠肺肿瘤诱发试验大鼠肝转变灶诱发试验小鼠皮肤肿瘤诱发试验雌性大鼠乳腺癌诱发试验 43 短期致癌试验 小鼠肺肿瘤诱发试验大鼠肝转变灶诱发试验小鼠皮肤肿瘤诱发试验雌性大鼠乳腺癌诱发试验 44 长期致癌试验 动物 幼年小 大鼠 各半 每组 只剂量 个 低剂量 ACD 其余剂量可根据药理毒理作用等因素综合考虑对照 空白 溶媒或赋形剂对照 实验期限 大鼠 年 小鼠1 5年 给药途径 同临床拟用途径观察与检查 观察记录一般情况 肉眼观察到肿瘤病变时 取各器官系统做病检评定 根据各组肿瘤发生率 潜伏期和多发性等做出全面的科学评价 45 培养细胞恶性转化试验 细胞 SHE给药剂量 至少3个剂量 高剂量为50 细胞生长受抑剂量 药物作用时间 受试药与细胞接触24h更换培养基后再培养7 14d对照 阴性对照 溶剂阳性对照 已知致癌物 46 镜检 47 培养细胞恶性转化试验 结果判断 集落转化率 转化集落数 集落总数 100 符合下述一条者判为阳性 1 集落转化率有明确的量效关系 2 若无量效关系 但在2个或2个以上的剂量发生恶性转化 3 在单一剂量下出现3个或3个以上的转化集落 48 单细胞凝胶电泳 彗星试验 49 50 肿瘤发生率肿瘤的发生率是整个实验终了时患瘤动物总数在有效动物总数中所占的百分率 有效动物总数指最早出现肿瘤时的存活动物总数 实验终了时患瘤动物总数肿瘤发生率 100有效动物总数 诱癌试验阳性的判断标准采用结合国世界卫生组织提出的四条判断诱癌试验阳性的标准 肿瘤只发生在试验组动物中 对照组无肿瘤 试验组与对照组动物均发生肿瘤 但试验组中发生率高 试验组动物中多发性肿瘤明显 对照组中无多发性或只少数动物有多发性肿瘤 试验组与对照组动物肿瘤的发生率无显著性差异 但试验组中肿瘤发生的时间较早 上述四条中 试验组与对照组之间的数据经统计学处理后任何一条有显著性差异即可认为检品的诱癌试验阳性 51 诱癌试验阴性结果的确立假如动物实验的规模为两种种属 两种性别 至少3个剂量水平 其中一个接近最大耐受剂量 每组动物数至少50只 实验组肿瘤发生率与对照组无差异 才算阴性结果 致癌性试验的期限必须包括受试物正常生命期的大部分时间 确定试验期限的几条准则 1 一般情况下 试验结束时间对小鼠和仓鼠应在18个月 大鼠在24个月 然而对某些生命期较长的或自发肿瘤率低的动物品系 小鼠和仓鼠可在24个月 大鼠可在30个月 2 当最低剂量和对照组存活动物只有25 时 也可以结束试验 对于有明显性别差异的试验 则其结束的时间对不同的性别应有所不同 在某种情况下因明显的毒性作用只造成高剂量组动物过早死亡 此时不应结束试验 两个物种两种性别动物中 有一种结果为阳性 即认为有致癌性 两个物种两种性别动物试验结果均为阴性时 方能认为未观察到致癌作用 52 内容 遗传毒性致癌作用生殖和发育毒性药物依赖性 药物特殊毒性研究 53 生殖毒性 54 生殖毒性研究 Reproductivetoxicitystudy 是药物非临床安全性评价的重要内容 它与急性毒性 长期毒性 遗传毒性等毒理学研究有着密切的联系 是药物进入临床研究及上市的重要环节 拟用于人体的药物 应根据受试物拟用适应症和作用特点等因素考虑进行生殖毒性试验 在药物开发的过程中 生殖毒性研究的目的是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响 预测其可能产生的对生殖细胞 受孕 妊娠 分娩 哺乳等亲代生殖机能的不良影响 以及对子代胚胎 胎儿发育 出生后发育的不良影响 生殖毒性研究在限定临床研究受试者范围 降低临床研究受试者和药品上市后使用人群的用药风险方面发挥重要作用 55 生殖毒性和发育毒性评价 生殖毒性 外源化学物对生殖细胞发生 卵细胞受精 胚胎形成 妊娠 分娩和哺乳过程的损害 56 发育毒性 外源化学物对胚胎发育和出生幼仔发育的影响 57 可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段 A 从交配前到受孕 成年雄性和雌性生殖功能 配子的发育和成熟 交配行为 受精 B 从受孕到着床 成年雌性生殖功能 着床前发育 着床 C 从着床到硬腭闭合 成年雌性生殖功能 胚胎发育 主要器官形成 D 从硬腭闭合到妊娠终止 成年雌性生殖功能 胎仔发育和生长 器官发育和生长 E 从出生到离乳 成年雌性生殖功能 幼仔对宫外生活的适应性 离乳前发育和生长 F 从离乳到性成熟 离乳后发育和生长 独立生活的适应能力 达到性成熟的情况 58 评价方法 1 一般生殖毒性试验 生殖过程的第一阶段目的 检测药物对生殖腺 性周期 交配能力 受孕率和胚胎早期发育阶段的影响 2 致畸敏感期毒性试验 生殖过程的第二阶段目的 确定药物是否具有胚胎毒性或致畸性 3 围生期毒性试验 生殖过程的第三阶段目的 检测药物对胚胎发育后期 母体妊娠 分娩过程 哺乳和幼仔在新生期存活和生长发育的影响 59 一般生殖毒性 60 评价内容包括配子成熟度 交配行为 生育力 胚胎着床前阶段和着床等 对于雌性动物 应对动情周期 受精卵输卵管转运 tubaltransport 着床及胚胎着床前发育的影响进行检查 生育力与早期胚胎发育 胚胎 胎仔发育毒性试验 妊娠动物自胚胎着床至硬腭闭合给药 评价药物对妊娠动物 胚胎及胎仔发育的影响 评价内容包括妊娠动物较非妊娠雌性动物增强的毒性 胚胎胎仔死亡 生长改变和结构变化等 61 致畸敏感期毒性试验 动物 首选大鼠 也可用小鼠和家兔大小鼠20只 组 家兔10只 组剂量 至少3个剂量最高剂量 可引起母体轻度中毒 但死亡不超过10 最低剂量 不引起毒性反应对照 阴性对照 溶剂阳性对照 已知致畸物给药途径 与临床拟用给药途径相同 注 不宜ip 给药时期 大 小鼠孕后6 15天 家兔6 18天动物交配 雌雄1 1或2 1同笼交配出现阴道栓 受孕0日 62 致畸敏感期毒性试验 观察和检查 1 体重 大鼠妊娠第0 3 7 10 13 16 20天 2 胎仔检查 自然分娩前1 2日黄体数 活胎数 活胎重 死胎数等活胎进行畸形检查 3 生理 生化 神经功能异常 1 4孕鼠自然分娩观察出生幼仔至断奶结果判定 1 活产幼仔平均畸形出现数 畸形总数 活产幼仔数 2 畸胎出现率 出现畸形的胎仔总数 活产胎仔总数 100 3 母体畸胎出现率 出现畸胎的母体数 妊娠母体数 100 63 围产期毒性试验 动物 小鼠或大鼠每组 只孕鼠 家兔每组 只孕兔 给药时期 妊娠后期及整个泌乳期 检查 所有雌性动物自然分娩 观察下一代直至成年检查其新生后存活 生长和发展情况 其中包括行为 生殖功能及其它异常症状 必要时还可对给药的雌性动物长期观察其生殖 受孕 分娩及次子代的情况 64 所有动物种属都有其不足之处 例如 大鼠 对性激素敏感 不适合用于多巴胺受体激动剂的研究 因其早期妊娠的发生和维持所依赖的激素主要是催乳素 妊娠后期对非甾体抗炎药高度敏感 小鼠 代谢率高 易惊 群体畸形现象 所有种属动物均会出现 特别明显 胎仔小 家兔 常缺乏药代动力学和毒理资料 对一些抗生素和消化道功能紊乱敏感 临床表现的解释较困难 豚鼠 常缺乏药代动力学和毒理资料 对一些抗生素和消化道功能紊乱敏感 胎仔发育期长 历史背景资料不足 家猪和 或小型猪 群体畸形的背景情况多变 所需的受试物量大 需要较大饲养空间 历史背景资料不足 白鼬 如果不采用特殊的管理系统 只能季节性繁殖 其成功与否主要取决于人和动物的相互影响 历史背景资料不足 仓鼠 静脉给药虽非不可能 但相当困难 会将受试物存于颊部小囊中而影响实际给药量 攻击性非常强 对肠道功能紊乱敏感 对许多受试物有过度敏感的致畸反应 胎仔小 犬 季节性繁殖 多近亲繁殖 历史背景资料不足 非人灵长类动物 与其他种属动物一样 其药代动力学情况与人不同 历史背景资料不足 常常因为其只数太少而难以进行危险性评估 更适合用于进行明确生殖毒性物质 该毒性已比较肯定 特性的试验研究 而不是评估其危险性 65 目前要求生育力与早期胚胎发育毒性试验和胚胎 胎仔发育毒性试验在临床试验开始前完成 在某些特殊情况下 如用于艾滋病 晚期恶性肿瘤等治疗的药物以及用于生殖控制 孕妇等特殊人群的药物 可灵活考虑生殖毒性的要求 如研究内容和具体设计 动物种属和阶段性等 66 内容 遗传毒性致癌作用生殖和发育毒性药物依赖性 药物特殊毒性研究 67 药物依赖性 68 药物依赖性试验 69 70 按毒品来源分类 1 天然毒品 如鸦片 吗啡 可卡因 古柯叶 大麻 麦司卡林 致幻蘑菇菌等 2 化学合成毒品 如海洛因 苯丙胺类毒品 致幻剂LSD等 按毒品对人体的作用分类 1 中枢神经镇静型 如鸦片 吗啡 海洛因 安定类 巴比妥类 2 中枢神经兴奋型 如可卡因 苯丙胺类毒品 3 致幻型 如LSD 麦司卡林 4 综合作用型 如大麻 71 1 巴比妥类镇静催眠药 这类药物在上世纪初即用于临床 使用不久 人们就发现其有较强的成瘾性 由于容易产生耐受性 不少病人逐渐增大剂量 日久便对其产生了依赖 有时在一次大剂量服用后即可以成瘾 这类药物的代表品种有戊巴比妥 司可巴比妥 阿米妥等 目前临床上已基本不再使用 2 非巴比妥类镇静催眠药 巴比妥类药有较强的成瘾性 面对众多的失眠症患者 医药学家只得另辟蹊径 开发替代产品 上世纪中叶 导眠能 眠尔通 安眠酮等相继问世 但问世不久即有报道 这些药仍无法解决成瘾问题 于时它们也渐渐被逐出了市场 3 苯二氮蕞类抗焦虑药 这是一类具有良好抗焦虑作用及催眠作用的药物 且副作用不小 故目前在临床上得到广泛使用 苯二氮蕞类药成瘾性较小 但如果长期或大量使用 该类药也会产生依赖现象 4 非麻醉性镇痛药 这类药的主要品种阿司匹林 安乃近 氨基比林 非那西丁等 这些临床上使用极广的药物 具有退热和减轻躯体某些疼痛的作用 但有不少人将此药用以提神或解脱心理压力 一些有慢性疼痛的人更是长年累月地使用这类药物 结果形成了药物依赖 除了上述的一些药容易成瘾之外 中枢兴奋剂中的苯丙胺 摇头丸 及吗啡类中的咖啡因 可待因等都有极强的成瘾性 这些药品都在政府的严格控制之列 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 身体依赖性试验 自然戒断试验 连续给药后突然停药 观察戒断症状 与同类的代表药作对比 判断受试药的依赖性潜力动物 小 大鼠和猴 小鼠体重20 24g 每组 20只 大鼠体重180 220g 每组 10只 猴体重3 5kg 每组3 5只 各半剂量 2 3 须设赋形剂对照和阳性药对照 吗啡 苯巴比妥或巴比妥 低剂量用ACD 高剂量组依赖性潜力低的药物应选用接近毒性反应的剂量 毒性低的药物选用MTD 药物可采用恒量或剂量递增的方式给予 82 身体依赖性试验 自然戒断试验 给药途径 1 2种给药途径 必须有一种与临床用药途径相同给药期限 镇痛药在小 大鼠需给药30天 猴需给药90天 镇静催眠药在小 大鼠需给药60 90天 猴需给药180天 每天上下午各一次 83 身体依赖性试验 自然戒断试验 观察指标 镇痛药在停药前24h及停药后48h内每隔4h观察记录外观体征和行为活动 植物神经系统机能变化 并称重 镇静催眠药在停药前一天及停药后的1至2周内每天观察动物的外观体征和行为活动及自发惊厥发生率外观体征和行为活动包括 应激性 神情过敏 猴 饮食 睡眠 自发运动活动 攻击性 警觉程度 神经反射 竖尾 震颤 惊厥 呼吸 体温 体重植物神经系统机能变化 腹泻 流涎 流泪 恶心 呕吐 瞳孔大小 84 身体依赖性试验 自然戒断试验 资料记录及整理 动物应写明种属 性别 生产合格证号 记录体重 实验室温度及湿度 受试物应写明生产批号 配制方法 戒