细菌鉴定ppt课件.ppt

临床常见病原菌的分离与鉴定 1 培养基用途 细菌鉴定 药敏判读 2 培养基 3 培养基的种类与选择 原则 培养基的使用应顾及分离效果及经济原则 4 种类 基础培养基 半固体 MH 增菌肉汤营养培养基 血平皿 巧克力选择培养基 中国兰 MacConkey XLD SS鉴别用培养基 尿定位 念珠菌显色 5 几种培养基用途 6 基础培养基 增菌肉汤 无菌体液MH平皿 药敏试验卫星试验半固体 观察动力 7 营养培养基 1 血平皿 羊血 溶血链球菌卡它莫拉氏菌肺炎链球菌 8 营养培养基 2 巧克力平皿 兔血 加抗菌素 杆菌肽 万古 抑制G 菌生长 流感嗜血杆菌 Hin 生长良好 菌落 透明或半透明水滴样 9 营养培养基 3 巧克力平皿不加抗菌素 用于Hin的药敏脑膜炎奈瑟菌淋球菌培养 10 选择性培养基 1 中国兰 柔酸利酸 抑制G 菌生长 适合于G 菌生长肠道菌利用乳糖后产酸菌落呈浅兰色or深兰色 如 E co Kpn等 不利用乳糖不产酸 菌落淡红色 粉色 半透明 白色等 如 不动杆菌 伤寒 痢疾假单胞菌 阴沟 产气等 11 XLD平皿 便 2 强选择性培养基 对大肠杆菌等肠道菌有较强的抑制作用适合于肠道致病菌生长 如 痢疾伤寒 12 XLD平皿 便 3 非致病菌 黄色菌落 大 湿润 或有黑心如 大肠杆菌 变形杆菌等 致病菌 红色菌落 有的有黑心 如 沙门氏菌属 志贺氏菌属等 13 选择 呼吸道标本 血平皿 中国兰 巧克力 加万古 念平皿泌尿 生殖道标本 血平皿 中国兰 巧克力 尿定位无菌体液 血平皿 中国兰 巧克力 增菌肉汤粪便 直肠拭子 中国兰 XLD 后者加种血平皿 14 细菌鉴定 15 病原性球菌的培养与鉴定 16 化脓性球菌 G C 葡萄球菌 肠球菌 链球菌 肺炎球菌多存在于自然界和人体G CC 脑膜炎球菌 淋球菌抵抗力弱 自然界不易生存 只能寄生于人体 17 一 葡萄球菌 有32个种 金黄色葡萄球菌 中间型葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌引起机体组织的化脓性感染 18 临床根据凝固酶分类 凝固酶 金葡菌中间型葡萄球菌凝固酶 CONS 表皮溶血腐生 19 葡萄球菌特点 蒹性厌氧菌O F 依此可以与微球菌区别 镜下 葡萄状 成堆排列35 孵育 空气培养G CH2O2 20 葡萄球菌鉴定 SauSconDNA 凝固酶 新生霉素SS 腐生 木糖葡萄球菌R 21 凝固酶试验 玻片法 结合凝固酶试管法 游离凝固酶乳胶凝集 检测金葡菌的凝集因子和蛋白A 此试验同时测定两种特性 准确性佳 22 临床意义1 金葡菌是 人类重要致病菌急性化脓性炎症 23 临床意义2 局部组织 疖 痈 创伤感染等深部组织 骨髓炎 肺炎 深部脓肿等全身感染 败血症 心内膜炎等 24 CONS 腐生葡萄菌 是尿路感染重要条件致病菌尤其是年轻的生育期女性 前列腺炎 外伤感染 败血症 25 CONS 表皮葡萄球菌 心内膜炎静脉导管感染腹膜炎人工关节感染菌血症 新生霉素 26 CONS 溶血葡萄球菌 占CONS感染菌株的第二位败血症腹膜炎尿道感染外伤关节炎 27 二 链球菌属 G C 5 10 CO2生长好血清学分类 A B C D F E G 溶血 等18个群 溶血现象分类 a 肺炎链球菌 28 1 溶血性链球菌 特点 镜下 成对 链状排列35 孵育 空气培养G CH2O2 溶血血平皿上透明溶血环 29 溶血链球菌鉴定1 方法 A群B群非A BCAMP 杆菌肽SRR SSXTRSS注 杆菌肽敏感 抑菌圈 10cm A B占 溶血链球菌中90 30 溶血链球菌鉴定2 Lancefield群 链球菌 抗原凝集 菌 加到提取酶液中 孵育15min凝集A B C 31 肠球菌 特点 镜下 单个 成双或短链排列35 孵育 空气培养G CH2O2 血平皿 或无溶血环 32 鉴别要点1 胆汁七叶苷 6 5 NaCL G45 生长 美兰牛乳 33 肠球菌种间鉴别 34 Spn鉴定1 苛氧菌 CO2刺激生长 G C 矛头状 双球或短链排列 a 溶血 菌落 中央凹陷 脐窝状 35 Spn鉴定2 肺炎链球菌乳胶凝集试验Optochin敏感试验 Spn其它链SR注 Op 5ug 片 试验 直径 14mm 36 链球菌临床意义2 A群 急性咽炎猩红热呼吸道感染伤口感染产后感染菌血症心内膜炎脑膜炎 37 链球菌临床意义2 B群 阴道感染 孕妇 新生儿结膜炎菌血症阴道炎 38 链球菌临床意义3 肠球菌 尿路感染腹部和盆腔创伤和外科术后感染败血症等 39 链球菌临床意义4 肺炎连链球菌 是正常人鼻咽腔中的正常菌群 一般不致病 抵抗力 时 大叶性肺炎占82 脑膜炎中耳炎菌血症心内膜炎等 40 三 脑膜炎球菌 G CC 5 10 CO2生长更好因产生自溶酶 故易死亡 人类是天然宿主 非流行期2 5 有此菌流行期高达70 故 传染源主要是带菌者 其次是病人 41 鉴定要点 革兰阴性双球菌氧化酶 H2O2 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 硝酸盐 42 四 淋病奈瑟菌 是奈瑟菌属中重要致病菌种之一急性期 白细胞内慢性期 白细胞外 43 淋菌特点 需在5 10 CO2中生长巧克力平皿 万古 时间 24 48h菌落 半透明 水滴样 44 鉴定 革兰阴性双球菌氧化酶 H2O2 葡萄糖 麦芽糖 硝酸盐 45 淋菌与其他菌鉴别要点 区别 莫拉菌属任何糖类 不动杆菌属氧化酶 卡他布兰汉菌硝酸盐 46 卡它莫拉氏菌 特点 镜下 革兰阴性双球菌菌落灰白色推移细菌时有刮痧样感觉 47 鉴定要点 DNA酶 氧化酶 硝酸盐 48 临床意义 是正常人鼻咽腔中的正常菌群 一般不致病 抵抗力 时 下呼吸道感染中耳炎菌血症心内膜炎等 49 革兰阴性杆菌的鉴定 根据葡萄糖发酵情况分类 葡萄糖发酵性革兰阴性杆菌 肠杆菌科 弧菌科 巴斯德菌葡萄糖非发酵性革兰阴性杆菌 假单胞菌 不动杆菌 伯克霍尔德菌等 50 葡萄糖发酵性革兰阴性杆菌 51 肠杆菌主要鉴定要点1 中国兰 G 氧化酶 硝酸盐 革兰染色 细杆 球杆菌 阴性 52 肠杆菌鉴定要点2 三糖铁 动力试验结果的判读 1 黄 黄 有动力 产气 E co Cfr等2 黄 黄 无动力 产气 Kpn3 红 黄 有动力 产气 肠杆菌属 Cfr等4 红 黄 有动力 不产气 沙雷菌 摩根氏 普罗菲登菌等5 红 黄 无动力 产气 志贺菌6 红 黄 有动力 产气 黑色沉淀 沙门菌 变形杆菌7 黄 黄 有动力 产气 黑色沉淀 Cfr8 红 红 不动杆菌 假单胞菌等非发酵菌 53 最常见两种肠杆菌的鉴定 VP尿素吲哚枸橼酸动力七叶苷ECO Kpn 54 苯丙氨酸阳性各属间鉴别 试验变形普罗菲登摩根氏H2S 鸟氨酸 枸橼酸 55 变形杆菌属种的鉴别 试验普通变形奇异变形靛基质 鸟氨酸 头孢呋肟RS 56 肠杆菌属种的鉴别 试验阴沟板崎聚团产气格高菲赖氨酸 鸟氨酸 精氨酸 山梨醇 尿素酶 黄色素 57 沙雷氏菌属间鉴别 红色沙雷粘质沙雷液化沙雷阿拉伯糖 木糖 鸟氨酸 4 生长 58 气单胞菌鉴定要点 氧化酶 葡萄糖发酵硝酸盐 O129R 弧菌属与邻单胞均敏感 59 气单胞菌种鉴别 VP乳糖产气溶血嗜水 豚鼠 60 假单胞菌鉴定要点 中国兰 G 氧化酶 硝酸盐 革兰染色 细杆菌 阴性 洋葱窄食单胞菌 嗜麦芽窄食单胞菌 OX 61 不动杆菌属的特点 氧化酶 过氧化氢 硝酸盐还原 动力 DNA酶 革兰氏染色 阴性 球状 球杆状在中国兰培养基上生长不好 62 不动杆菌属菌种的鉴别 63 不动杆菌属菌种的鉴别 鲍曼醋酸钙居尼洛菲葡萄糖 精氨酸 枸橼酸 丙二酸盐 41 44 镜下球杆状球杆状球状球状 64 嗜麦芽窄食单胞菌 鉴定 氧化酶 动力 明胶 42 CGDNA酶 65 嗜麦芽窄食单胞菌 特点 亚胺培南R 83 复方新诺明S特美丁S 66 洋葱伯克霍尔德菌鉴定要点 葡萄糖O F O赖氨酸 枸橼酸 硝酸盐还原 精氨酸水解 甘露醇 依此可以与Pma鉴别 67 流感嗜血杆菌鉴定 巧克力平板生长卫星试验 氧化酶 触酶 68 药敏判读 69 细菌天然耐药1 阴沟肠杆菌 耐头孢西丁部份假单胞菌 耐亚胺培南嗜麦芽窄食单胞菌 耐亚胺培南 内酰胺类 70 细菌天然耐药2 肠球菌 耐复方新诺明头孢菌素克林霉素 71 细菌天然耐药3 绿脓杆菌 耐氨苄西林阿莫西林头孢曲松头孢噻肟复方新诺明I II头孢菌素 72 细菌天然耐药4 流感嗜血杆菌 耐阿奇霉素红霉素沙门氏菌 耐头孢呋肟I代头孢菌素 73 细菌天然耐药5 克雷白菌 耐氨苄西林替考拉宁氨基糖苷类鲍曼不动杆菌 耐氨苄西林阿莫西林I代头孢菌素 74 耐药检测 产酶株 内酰胺酶 指示 青霉素羧基青霉素脲基青霉素等 R 75 内酰胺酶 四 检测细菌 葡萄球菌肠球菌淋球菌奈瑟氏菌嗜血杆菌 76 耐药检测 报 MRS1 苯唑R2 苯唑SFOXR表示 携带mecA基因 编码低亲和力青霉素结合旦白导致耐甲氧西林 77 药敏3 MRS 耐 青霉素头孢菌素碳青霉稀类 内酰胺酶抑制剂类同时耐 氨基糖苷类大环内脂类四环素类 78 诱导克林霉素耐药检测 D试验 提示存在可诱导的克林霉素耐药 应报告分离株对克林霉素耐药 同时在报告中应注明 通过诱导克林霉素耐药试验 推测此菌株对克林霉素耐药 在某些病人中克林霉素可能仍有效 79 Spn耐药性检测要点 标准 20mmS用1 g苯唑西林纸片来预测肺炎链球菌对青霉素的敏感性 80 Spn耐药性检测要点 纸片法 抑菌圈 19mm时 不能确定 SIR需作青霉素的MIC 0 06 g ml S0 12 1 0 g ml R 81 耐青霉素的Spn 体外实验发现耐青霉素肺炎链球菌亦对多种抗生素耐药如 头孢菌素类 大环内酯类 四环素等出现交叉耐药 82 Spn药敏 因纸片法尚不可靠 以下药物需作MIC测定其体外抗菌活性 头孢噻肟头孢曲松美罗培南万古霉素亚胺培南 83 体外敏感 体内无效 不能报敏感的抗生素 肠球菌 氨基糖苷类头孢菌素类克林霉素沙门菌 志贺菌氨基糖苷类第一代 第二代头孢菌素 2 84 肠球菌的药敏 高水平耐药的氨基糖甙类 庆大和链霉素 筛选试验 预测AMP PEN VAN与一种氨基糖甙类抗生素间的协同作用 85 内酰胺酶中最重要的2种酶 ESBL 质粒酶 超广谱酶 AMPC 染色体酶 头孢菌素酶 可由质粒介导 86 ESBL酶检测方法一 双纸片协同试验纸片确证试验MIC确证试验 87 ESBL酶临床检测常规方法 1 纸片确证试验 头孢他啶 头孢他啶 棒酸头孢噻肟 头孢噻肟 棒酸 88 ESBL酶 判断标准 2 当含克拉维酸复合制剂的抑菌圈较单药的抑菌