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微生物基础知识培训 2015 05 12QC部 案例 1970 1971年 美国败血症流行 7个州8家医院发现350例败血症流行病 原因是一种静脉注射剂被细菌污染 德旺波特事件 英国德旺波特医院输液灭菌过程局部灭菌不到位 造成污染 导致6例败血症患者死亡 欣弗 事件2006年 安徽华源生物药业有限公司生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液 欣弗 经检验 无菌检查和热原检查不符合规定 导致11人注射死亡 事件原因 在生产过程中违反规定 未按批准的工艺参数灭菌 降低灭菌温度 缩短灭菌时间 增加灭菌柜装载量 影响了灭菌效果 事件处理 国家药监局撤销该公司 药品GMP证书 和 欣弗 药品的批准文号 撤销总经理等5人职务 并给予安徽省药监局局长 阜阳市药监局局长和安监科科长记大过等行政处分 随后不到一月安徽华源总经理裘祖贻在家谢罪自杀 2008年 黑龙江省完达山制药厂生产的刺五加注射液经检验显示被细菌污染 导致3人注射死亡 卫生部 国药局联合处理 吊销该厂39个注射剂批准文号 毒黄瓜 事件2011年 德国市场的黄瓜遭受肠出血性大肠杆菌 EHEC 污染 截至目前已造成15人死亡 约1400人受到感染 目前 在瑞典 挪威 丹麦 英国 荷兰 法国 瑞士 奥地利等国也都发现了病例或疑似病例 整个欧洲人人恐慌 谈 瓜 色变 一切都是微生物惹得祸 药品生产过程中微生物控制非常重要 一 什么是微生物二 微生物的形态结构三 微生物的分布四 微生物的益处与危害五 药品微生物的控制 一 什么是微生物 微生物是一类形体微小 结构简单 进化低级 肉眼直接看不见或看不清 必须借助于显微镜才能观察到的微小生物 它们对营养的要求非常低 它们是一类繁殖非常快的生物 它们非常容易发生变异 它们无处不在 大多数微生物对人类有益 有些微生物对人类有害 二 微生物的形态结构 细菌 是一类细胞细而短 结构简单 细胞壁坚韧 以二分裂方式无性繁殖的原核微生物 分布广泛 主要有球状 杆状和螺旋状三种形态 葡萄球菌 棒状杆菌 螺旋菌 真菌 是一类有细胞壁 无叶绿素 以寄生或腐生方式生存 少数为单细胞 多数为多细胞 能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物 单细胞真菌呈圆形或卵圆形 称为酵母菌 多细胞真菌由菌丝和孢子组成 并交织成团 称丝状菌或霉菌 病毒 属非细胞型微生物 在自然界分布非常广泛 可在人 动物 植物 真菌和细菌中寄居并引起感染 病毒是体积最小 结构最简单的微生物 它仅有一种核酸 DNA或RNA 作其遗传物质 病毒与人类的关系极为密切 人类的传染病约75 是由病毒引起的 有些病毒传染性强 可引起世界大流行 如流感 艾滋病等 菌落形成单位 cfu 菌落 就是在固体培养基上 内 以母细胞为中心而形成的一堆肉眼可见的 具有一定形态 构造等特征的子细胞集团 常以cfu 菌落形成单位 为计数单位 三 微生物的分布 水土壤空气衣服地板海水油膜废水排水口洗手池汽油罐 口腔鼻咽腔头发皮肤胃 肠道食物昆虫动物南极 0 火山口 250 人体中的微生物 四 微生物的益处与危害 绝大多数微生物是有益的广泛应用于农业 食品 医药 酿造 化工 制革 石油等行业 例如与我们日常生活密切相关的如酸奶 酒类 抗生素 疫苗等 部分微生物能够引起人及动 植物发生病害引起人类的许多传染病 如伤寒 结核 病毒性肝炎 鼠疫等 五 药品微生物的控制 为什么要对药品生产进行微生物控制 1 有些微生物可以致病 我们绝不能让我们的顾客有感染致病微生物的潜在危险 2 微生物对药物的影响 药物物理形状的改变 药物的物理形状可因染菌而改变 1 固体制剂 如片剂 丸剂等 表面湿润或粘滑这是由微生物大量繁殖所致 呈现出绿色 桃红 褐色 黄或黑色等各种颜色 这是由带色菌落所产生的色素所致 口服后会使使用者引起感染症和痢疾等 2 液体制剂 增稠剂和悬浮剂受微生物污染后可产生解聚作用 粘度降低 悬浮物质沉降 乳剂腐败变块状或砂粒状 甚至分离成两相 变成水和油乳状 3 注射剂被污染后 注射剂会浑浊 有沉淀或有悬浮物 变色等 滴注会出现发烧和败血症 肌注会引起局部感染或溃烂 滴眼剂被污染后 滴眼剂也会浑浊 有沉淀或有悬浮物 变色等 使用后会引起感染症 溃疡 结膜炎等 药物化学成份的变化微生物几乎具有降解所有有机物的能力 这种降解过程是在温和条件下发生的 它较非生物学过程的工业反应容易得多 各种物质的降解率依其化学结构 产品的物理化学性质 微生物的种类及污染程度等而定 药品疗效的变化某些微生物有很强的降解力 因此许多药物可被降解而失效或显著地改变疗效 污染 指当某物与不洁净的或腐坏物接触或混合在一起使该物变的不纯净或不适用时 即受污染 药品的微生物污染也称染菌 简单的说当一个产品中存在不需要的物质时 他即受到了污染 交叉污染 主要不同类别药物之间的交叉污染 人流和物流的交叉污染以及空气之间的交叉污染等 防止污染和交叉污染有需要时需洗手及消毒尽量减少直接以双手接触药品接触药品的表面及用具用后清洗转换产品时清洗 手的卫生 每只手可携带40万个细菌 刚洗过的手 每平方厘米也可检验出3200个细菌 洗手的重要性 用流水 如自来水 洗手 能使手上的致病微生物减少80 用皂液充分洗手 再用自来水冲洗能使致病微生物减少95 洗手后正确使用消毒剂能使致病微生物减少到99 更衣 着衣种类测定日期细菌数 cfu 100cm2上衣内侧使用五日后300外侧使用五日后200裤子内侧使用五日后450外侧使用五日后70帽子内侧使用五日后100外侧使用五日后150口罩内侧使用一日后22000外侧使用一日后100袜子内侧使用一日后30000外侧使用一日后2800 污染的形式 尘埃粒子污染和微生物污染 污染的载体 空气 水 表面和人 洁净区的主要污染源 空气 制药用水 操作人员 设备 原辅料等 其中操作人员是主要的污染源 洁净区的主要污染源 空气由于人们的生产和生活活动 使空气中存在某些微生物 包括一些病原微生物 使其附着于空气中的尘埃 飞沫上进入人体或药品而引起疾病和污染 洁净度测定包括 悬浮粒子微生物 浮游菌 沉降菌 表面微生物 悬浮粒子 泛指悬浮在气体当中的微细固体或液体粒子 直径小于100 m的颗粒物 在环境科学中 悬浮粒子特指悬浮在空气当中的微细污染物 为空气污染的其中一个主要来源 悬浮粒子计数器 微生物沉降菌 是收集到的活微生物粒子 通过专用的培养基 在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数 本测试方法采用沉降法 即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿 经若干时间 在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数 以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数 并以此来评定洁净室 区 的洁净度 浮游菌 即悬浮在空气中的活微生物粒子 本测试方法采用计数浓度法 即通过收集悬浮在空气中的生物性粒子于专门的培养基 经若干时间 在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数 从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数 以此来评定洁净室 区 的洁净度 浮游菌采样器 2020 1 29 29 可编辑 表面微生物 包括设备 车间 人员 包装材料等表面微生物 本测试方法采用接触碟法和棉签擦拭法 棉签 接触碟 洁净区的主要污染源 水工艺用水在制药企业防止污染及作为制药用水方面至关重要 因为它不仅作为产品的一个成分 而且需用其洗涤或冷却 药品的微生物污染的关键环节在于工艺用水 因为水是微生物生长代谢的一个必要成分 措施 对工艺用水系统采用湿热灭菌 洁净区主要的污染源 设备几乎没有细菌不 吃 的东西 设备表面 容器内外表面等 都可能是微生物寄存的地方 设备和器具与药品直接接触设备和器具的清洗清洁程序必须经过验证按清洗周期清洗清洗和存放设备 器具处应与生产区域洁净等级相同 生锈的机器 卫生不彻底 洁净区的主要污染源 原辅料原辅料可能将大量的微生物带入到药物制剂中 因此 选用符合标准的原辅料 将有助于控制药品和环境的污染水平 措施 原辅料在贮藏过程中必须注意环境条件 清洁或消毒处理 进行合理封装 洁净区的主要污染源 人员人体散发的尘粒数 万个 每分钟 10 50 100 250 人员不良行为所产生的污染 当有如下行为时将相应增加微粒的产生量 吸烟者的呼吸500 喷嚏2000 搓手200 行走200 跺脚5000 静止时散发的尘粒数最少 在洁净室内当操作人员穿无菌服时发菌量 微生物的污染途径自身污染 由于患者和员工自身携带微生物而污染 接触污染 由于和非无菌的用具 器械或人的接触而污染 空气污染 由于空气中所含微生物的沉降 附着或被吸入而污染 其他污染 由于其他因素 如昆虫 而污染 控制微生物污染的措施事前控制 1 人员条件 体检 直接接触药品人员每年至少体检一次 传染病患者 体表有伤口者 皮肤病患者 药物过敏者不得从事直接接触药品生产 人员培训 2 生产过程风险分析与评估 3 过程设计 灭菌工艺设计 工艺审查 4 检验方法 设计 实验室控制 5 设施 设备设计 安装与验证 洁净等级 在线清洗与灭菌装置 验证 工艺 公用系统 检验方法验证 事中控制 1 人员卫生a 卫生习惯在生产区内做到三个严禁 禁止吃东西 禁止喧哗 禁止吸烟 勤洗手 不得戴手表 饰品和化妆 b 人员着装按要求对工作服 鞋和帽进行穿戴 清洗和更换 c 口罩按要求带好口罩 口罩要遮住口 鼻 口罩要经常清洗 消毒或换新 尽量使用一次性性口罩 2 工艺卫生按工艺要求进行消毒 灭菌 控制进入洁净区的人数 包括进入房间的人数 3 环境卫生定期做好压差 温湿度 风速 尘埃粒子 沉降菌 浮游菌等空气净化洁净度的监测 有效地阻止室外的污染侵入室内 空气过滤 压差 迅速有效地排除洁净区内已发生的污染 灭菌 湿热灭菌 衣服 清洁 消毒 甲醛消毒最彻底 臭氧和紫外辅助 控制污染源 减少污染发生量 人 物 4 物料制定合理的内控质量标准 购进物料必须符合质量要求 按规定取样 取样过程不得污染物料 做好物料微生物检验 5 质量控制与记录 严格按清洁操作规程操作 做好清洁记录 6 包装 储存和运输要有适宜的储存条件 防止储存过程质变或外界污染 物料包装要密封 进入洁净区的物料要脱包或消毒处理 运输过程确保产品受到污染 3 事后控制OOS 检验结果超标 和OOT 检验结果超常 调查处理 1 质量调查 2 污染菌种的判定 3 污染产品处理 药品中微生物污染的特殊性是能繁殖的活细胞生物 数量少而分布不均匀 多数处于受损伤状态 生存环境的多样性及复杂性 微生物检验 无菌检查无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品 医疗器具 原料 辅料 及其他品种是否无菌的一种方法 若供试品符合无菌检查法的规定 仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染 培养14天出结果 微生物限度检查检查非规定灭菌制剂及其原料 辅料受微生物污染程度的方法 检查项目包括细菌数 霉菌数 酵母菌数及控制菌检查 培养5天出结果 细菌内毒素检查本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性杆菌产生的细菌内毒素 以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法 37 恒温1小时出结果 问题1 什么导致药品污染 毛发润滑油等微生物其他药品清洗液人的行为 问题1 答案 1 毛发 员工有许多途经污染药品 包括头发和皮屑 因此必须戴口罩和帽子进行操作严禁裸手操作 问题1 答案 2 润滑油等 设备保养后若没有清洁彻底 其零件或残余的油就会导致下批药品被污染 设备的脱落物如铁锈或油漆也会造成药品的污染 问题1 答案 3 微生物 微生物不允许存在于某些药品中 如注射剂 滴眼剂 在其他药品中限度允许存在 如片剂 混悬剂 颗粒剂等 问题1 答案 4 其它药品 药品之间能互相污染 交叉污染 问题1 答案 5 清洗液 若不正确使用或使用太多的清洗液 就会留有残余物质 同样会污染下