自家疫苗的制备.doc

自家疫苗的制备与使用 一、制作过程 1、采集病料 病料取自症状典型病程较长或濒临死亡的病猪% Q _- r! o% + J# F$ O* G X病料组织为病原体侵害的靶器官2 W V, T/ P9 Q/ v R4 M4 e, R以高致病性猪蓝耳病为主症的应取肺、肝、淋巴结 Z, p5 L+ B+ h; n采集的病料迅速作冷冻处理以防变质2、切碎 用1000U/ml的双抗液冲洗病料表面,将冷冻的病料切成小块(除去筋膜气管及较粗的支气管,摘除心脏,但一定要取出肺门淋巴结),便于放入搅拌机中3、搅碎将碎块放入高速匀浆机中搅拌4-6次,搅成肉糊4、稀释按病料与生理盐水1：3-5的比例向肉浆糊中加入生理盐水成稀泥状5、过滤：将上步制成物分三次过滤 D6 I6 i; g8 1 X3 . 第一次用一层纱布过滤0 g+ f7 R1 B! _! O+ A, K: u0 ! g第二次用两层纱布过滤1 j: T5 g1 d: T# w- h% L4 E( $ Y2 U第三次用四层纱布过滤% _7 N/ j) S, R; y ; x（每次的滤渣丢弃0 c7 ( w. p0 s. U6 B6 n. , w; K滤液待用）向滤液加入生理盐水至所需要制作的量2 _% H( q6 w6 v, e! X6、醛化量 用适量的生理盐水稀释甲醛和溶解叠氮钠（甲醛用量占自家苗量的千分之八；叠氮钠用量占自家苗量的万分之五） 7、混合 将第6所制作的溶液加入第5所制作的滤液中（边搅拌边加入） 8、振荡 将第7步所制作的溶液置振荡器上1小时, J; o0 Q3 X# P2 Z8 y! I6 q) m+ w放入37培养箱中72小时（其中每隔4-6小时拿出来置振荡器振荡20-30分钟）1 m f. m$ E- Y5 r7 s; 1 X r, i7 然后于2-8冷藏保存待用, 9 m. m q) v. ? a二、使用方法 1、无菌检查 将灭活后的自家组织苗接种普通琼脂培养基上37培养24-72h* ! |$ l! S& Y* y3 q未见有细菌生长2、先用自家苗注射一两窝小猪观察两天看有无发生过敏反应、注射部位发生炎症) H$ M x6 i# I% U如果没有上述反应说明自家苗制作成功3、效力试验 采集头注射自家苗天仔猪的血清用猪蓝耳病抗体检测试剂盒检测效果4、临床观察 假定健康的若干头仔猪、母猪和育肥猪注射自家苗后若未再发生类似的临床症状则表明效果明显: m Z( m& b ?& m5、使用量 母猪产前周注射ml头乳猪：日龄肌注ml/头日龄注射ml/头小猪（日龄）ml头中大猪ml头8 t) : M/ T# D+ S0 x4 y. m4 6、加双抗液：自家苗在临用时需加液或双抗液其配制方法：青霉素（万）支链霉素（万U）支* q! R& S& g% n P; A, a共同溶于ml灭菌无离子水中9 W7 N6 a& y2 h o0 |8 U( M* 2 z& E混合后分装小瓶置冰箱保存备用（万单位ml）临用时. G+ p, T d5 g& 6 O( N# Y按的量加入营养液或其他溶液中最后浓度是青霉素100U/ml; / W) * b5 x链霉素Uml8 V9 J& V* 2 8 n1 F1 v: a! I三、讨论与体会 相当部分管片兽医反映有类似情况 K6 + g3 5 Y! a4 Q2、影响自家疫苗质量和效果的因素很多：）取自活体病程长的猪的病料效果要好；2）使用来自本地、本场猪病料制作的自家苗效果要好；3）自家苗适宜的浓度效果要好；4）对假定健康猪防疫效果要好；5）病料采后迅速降温冷冻保存不腐败制作的自家苗效果要好；6）制作中充分灭活的自家苗效果要好, Z; O* H H/ j6 T3、自家苗治疗作用的机理不明4 Y# n$ H8 C0 A4 m可能性是自家苗中的特异性抗体的作用5 : h, 7 k) x9 E( m& S2 K, P也可能是异体蛋白的刺激激活了免疫系统而提高了机体免疫力其机理尚须研究疫苗免疫制备自家苗预防仔猪大肠杆菌病相关专题： 猪 时间：2011-10-31 17:30 来源： 阿里巴巴农业频道 【阿里巴巴农业】 仔猪黄白痢是养猪场 广泛存在的常见病，不仅给养猪业带来大量药物开支，也直接影响了仔猪的生长发育。引起仔猪黄白痢的大肠杆菌菌群多、抗原结构复杂(O抗原、H 抗原、K抗原)，且流行菌群有地方差异，因此控制难度较大。l 材料 11 病料广西武鸣县两家发生仔猪黄、白痢的病猪肠内容物及肠粘膜刮取物4份。 12 培养基麦康凯、马丁肉汤、三糖铁、普通琼脂、厌氧肉肝汤、血液琼脂斜面。 13 试验动物及其它体重1822 g左右的小白鼠18只；甲醛溶液、氢氧化铝溶液。2 方法与结果 21 分离与鉴定 211 分离与形态鉴定：将上述4份病料分别用灭菌生理盐水稀释后接种麦康凯平板培养基，经37C恒温培养箱培养 1618 h，挑取可疑红色菌落进行革兰氏染色。经镜检见有多量中等大小的红色杆菌即可初步认定为大肠杆菌。 212 毒力鉴定：为了确定所分离细菌的毒力，取上述新鲜马丁肉汤纯培养物接种血液琼脂斜面培养基后置37C恒温箱培养，同时用适量灭菌生理盐水稀释后接种小白鼠(每份病料接种2只)，05 ml只。结果发现血液琼脂斜面培养物中有溶血现象；观察小白鼠接种后的状态，发现接种3 h后即有2只小白鼠死亡，24 h后共死亡6只；另2只仅表现出一定的抑郁状态后逐渐恢复正常。 213 生化鉴定：将死亡小白鼠解剖后无菌采取其心血，经镜检后分别接种于马丁肉汤和三糖铁培养基置温箱培养，可见马丁肉汤液变混；三糖铁培养基完全变黄，同时沿穿刺线周围形成许多气泡，表明被检菌能够分解糖类产酸产气。经镜检和稀释后再次接种麦康凯平板培养基培养证实，马丁肉汤和血斜培养物均未污染其它杂菌，将两种培养物均置4C 冰箱内保存。 22 制苗与检验 221 制苗与纯检：取上述保存的培养物接种新鲜血斜培养基复壮，用无菌生理盐水或马丁肉汤洗下菌层检验培养物纯度。经检验合格后即可转人5O ml大试管马丁肉汤中培养。将培养12 h以上的马丁肉汤培养物经纯检后分别接种于多个直径18 em的普通琼脂平板中均匀散开(每个约05 m1)，同时另取部分肉汤培养物经稀释后接种于普通琼脂平板进行活菌计数。当培养物覆满整个平板后逐个检查上面是否存在杂菌污染现象。剔除被污染的平板，并将其余平板全部转人低温空调房间，使琼脂受冷变硬后便于刮取菌苔。 222 配苗与分装：在无菌条件下于每个平板中加人约 1O ml马丁肉汤浸泡，用灭菌止血钳挟住经75酒精浸泡消毒的载玻片(用时再经酒精灯灼烧)至平板内刮取菌液。每个平板约共用5O ml马丁肉汤冲洗3次即可。将洗下的菌液全部注人500 ml的灭菌盐水瓶中，取菌液接种血液斜面、马丁肉汤和厌氧肉肝汤中培养未发现异常杂菌，另取少量菌液于灭菌青霉素瓶中以备活菌计数，其余按菌液总量05的比例加人甲醛溶液(37 4O)，置37 温箱中灭活48 h (期间充分摇匀46次)。根据活菌计数结果，将收集的灭活菌液以1O 的比例加人无菌氢氧化铝浓缩，使所制备的菌苗中大肠杆菌数目在100亿以上；同时取样置普通琼脂和马丁肉汤中进行灭活检验。经检验合格的疫苗用100 ml疫苗瓶分装后贴上标签，置于室温下保存备用。 223 安全与效力检验：将试制的菌苗接种5只小白鼠未见不良反应(05 ml只)，安全率100 。15 d后用所分离的强毒活菌液攻毒，对照组5只全部于36 h内死亡；试验鼠 5只，死亡1只，保护率达8O 。 224 免疫接种：将所制备的菌苗托运至两家原发病猪场，建议先对部分临产前1O20 d的母猪进行试用(1 ml头)。从场方随后反馈的信息得知，2头试验母猪注苗后未见精神和食欲异常，分娩所产仔猪在本病发病阶段未发生明显的腹泻现象，表明本次制备的大肠杆菌自家苗能较好地控制原发病猪场仔猪大肠杆菌的发生，成效明显优予过去所使用的商品型疫苗，达到了如期效果。 3 讨论 仔猪黄白痢是由致病性大肠杆菌引起的较常见肠道感染疾病。由于引起黄白痢的大肠杆菌血清型较多，每个猪场的血清型均不一致，在防治上应用商品苗或抗生素较难取得理想效果(进口疫苗效果较好，但费用较高)。因此根据发病的实际情况，选用与本场血清型相一致的疫苗或制备自家苗对产前母猪实施免疫是预防仔猪大肠杆菌病的有力措施。虽然仔猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌感染所致，但本病的发生也与仔猪的抵抗力、环境条件及饲养管理措施密切相关。因此，除采用合适的疫苗及时进行免疫接种外，还应注意加强日常的卫生与饲养管理工作，减少环境诱因和应激反应；注意母猪临产时的猪体清冼和消毒及空产床的消毒工作；做好母猪产前补硒和仔猪产后补铁与补硒工作；确保保育舍内一定的保温和干燥效果；对已发病的猪应及时做好隔离消毒，及选用敏感的药物进行治疗等，达到综合防治的目的。自家疫苗的制备与使用 ( 发布时间: 2008-1-4 8:17:55 浏览量:695 )自家疫苗是取自本养殖场患畜的内脏为病料,提取病料中含有的病原体（细菌或病毒）,通过甲醛灭活后作为抗原,接种到自家家畜自制的疫苗。用自家疫苗可对本场家畜发生的传染病起到防疫保护作用，今年夏季在我县暴发高致病性猪蓝耳病期间,为了开展生产自救,弥补国家发放的疫苗不足,在县畜牧局化验室制备了自家疫苗,对数万头生猪进行了免疫注射，对流行在我县的高致病性猪蓝耳病起到了一定控制作用。为今后制出更好的自家疫苗与同行们一起作些技术探讨。 一、制作过程 1、采集病料 病料取自症状典型病程较长或濒临死亡的病猪，病料组织为病原体侵害的靶器官，以高致病性猪蓝耳病为主症的，应取肺、肝、淋巴结。采集的病料迅速作冷冻处理以防变质。 2、切碎 用1000U/ml的双抗液冲洗病料表面,将冷冻的病料切成小块(除去筋膜气管及较粗的支气管,摘除心脏,但一定要取出肺门淋巴结),便于放入搅拌机中。 3、搅碎 将碎块放入高速匀浆机中搅拌4-6次,搅成肉浆糊。 4、稀释 按病料与生理盐水1：3-5的比例向肉浆糊中加入生理盐水成稀泥状。 5、过滤：将上步制成物分三次过滤，第一次用一层纱布过滤，第二次用两层纱布过滤，第三次用四层纱布过滤。（每次的滤渣丢弃，滤液待用）向滤液加入生理盐水至所需要制作的量。 6、醛化量 用适量的生理盐水稀释甲醛和溶解叠氮钠。（甲醛用量占自家苗量的千分之八；叠氮钠用量占自家苗量的万分之五） 7、混合 将第6所制作的溶液加入第5所制作的滤液中。（边搅拌边加入） 8、振荡 将第7步所制作的溶液置振荡器上1小时，放入37培养箱中72小时（其中每隔4-6小时拿出来置振荡器振荡20-30分钟），然后于2-8冷藏保存待用。 二、使用方法 1、无菌检查 将灭活后的自家组织苗接种普通琼脂培养基上，37培养24-72h，未见有细菌生长。 2、先用自家苗注射一两窝小猪，观察两天，看有无发生过敏反应、注射部位发生炎症。如果没有上述反应说明自家苗制作成功。 3、效力试验 采集头注射自家苗天仔猪的血清，用猪蓝耳病抗体检测试剂盒检测效果。 4、临床观察 假定健康的若干头仔猪、母猪和育肥猪注射自家苗后，若未再发生类似的临床症状，则表明效果明显。 5、使用量 母猪产前周注射ml头，乳猪：日龄肌注ml/头，日龄注射ml/头，小猪（日龄）ml头，中大猪ml头。 6、加双抗液：自家苗在临用时需加液或双抗液。其配制方法：青霉素（万）支，链霉素（万U）支，共同溶于ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置冰箱保存备用（万单位ml）。临用时，按的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素Uml。 三、讨论与体会 1、在高致病性猪蓝耳病发病期间，我县制备使用的自家苗，注射生猪达数万头之多,通过临床观察有预防和治疗的双重作用,对控制我县高致病性猪蓝耳病的流行起到了一定作用。如水田坝乡在高致病性猪蓝耳病发病期间，采用自家苗普注的方法，据水田坝乡畜牧兽医服务中心观察发病数减少，有明显的预防控制作用；对病猪注射自家苗后有一定的治疗作用。如水田坝乡辛家坪村李某猪场发生高致病性猪蓝耳病已死亡7头，剩下存栏 65 头全部是病猪，用自家苗每头注射10ml后，放弃治疗，不再用其它任何药物，只