分析方法标准化程序090415.doc

分析检测方法标准化程序一、 确定标准化分析方法的目标和范围 根据测定组分的目标和范围，查阅国内外相关文献， 通过对文献的理解初步确定分析方法；分析方法的选择要综合考虑多方面的因素（1）分析对象是什么（2）样品基体是什么?（3）分析对象的浓度范围（4）定性和定量要求（5）检出限和定量限是多少（6）样品或被分析物稳定是否稳定（7）设备和仪器试剂通用性药品及等（8） 标品及试剂的稳定性。二、建立分析方法的基本要求1、标准物质的要求：（1）常量分析中（大于0.1 ）标准纯度要求接近100 ；在微量、痕量及超痕量分析中（0.1 至ug/g以下）标准纯度至少应为95 。稀有的或贵重的纯物质标准的建立，一般通过测量其在特定溶剂中的吸光度的方法，且分析过程不应有明显干扰。（2）如果标准参考物与分析物质间转化因子不同，应该通过光谱或色谱（峰高、面积）计算它们的不确定度。（3）如果标准物容易吸潮使用前应该在100度烘箱中干燥，如果标准物质比较稳定，放入干燥器中储藏2、方法适用范围的要求 （1）建立的分析方法适用于单一基质，至少使用3种典型的标样，如不同属性（外观，成熟度，品种，时期）在不同时间进行回收率重复性测定，（2）分析方法适应用于一类物质如水果、谷物、油脂等在分析范围内选择具有代表性的物品进行回收率重复性测定。（3）分析方法适应用于一般“食物”，应从食物三角(Sullivan, D.M. and Carpenter, D.E. (1993) “Methods of Analysis for Nutrition Labeling” AOAC International, Gaithersburg MD 20877, pp. 115-120)中选择具有代表性的物质。如残留物，基质一般分为几类，如“脂肪性食物”和“非脂肪性食物”选择能代表实际物质组成合性质的物质才能适应实际分析。在不同时间进行回收率重复性测定，测定结果应有明显差别具体要求见表：三、 预实验的方法1 、 预实验的方法 （1） 标样和试剂的配制表1 标准溶液配制标准的名称标样的配制方法标样的介质标样的浓度 配制日期有效日期（2）色谱参数的初步优化 选择合适的色谱柱，配制混标溶液进样，根据文献资料的保留时间、紫外吸收（液相）结合空白样品，2个不同浓度的单标溶液，进行色谱峰的确认，改变流动相比例及溶剂（气相改变升温程序）进行色谱条件的优化）。 （3）样品前处理方法研究按照实验设计的方案，进行样品（2个）及样品加标（样品的含量50%，及样品含量100%）实验，以样品的加标回收率和重复性，对前处理方法的进行研究和评价表 2 样品的加标预实验序号组分名称标样的含量样品加标后含量 回收率（%）三、 分析方法测定条件的研究 1、分析条件的优化：重点优化的内容：减少运行时间，提高分辨率，改善峰形，提高提取效率，分离度（分离度要求大于1.5，至少大于1.0），选择性，稳定性，在典型的合适储存条件下对分析物的稳定性进行了测试。2、线性范围、线性方程及相关系数测定根据仪器的响应值结合样品的含量，配制68个标准溶液梯度（包括分析的浓度范围），进行标准曲线的绘制，测定结果以峰面积y对浓度x(mg/L)进行回归处理，计算线性回归方程。相关系数大于0.99 表3 标准曲线线性方程及相关系数序号组分名称线性范围线性方程相关系数12、样品加标回收率回收率测定每种基质需要最少涵盖分析范围的3种浓度样品，每个加入浓度至少独立重复测量10次，于不同时间独立测定。选择加入样品的含量25%，50%，100%，200%（在分析物的测定范围内）表4 样品加标回收率及精密度实验化合物AB加入量（g/kg）测定值（g/kg）12345678910平均测定值（g/kg）平均回收率（%）标准偏差SD相对标准偏差RSD（%）注：平均回收率大于110%时考虑进一步进化基质，或提高分离度，若回收率低于60-70 ，应进改善分析方法，进一步提高回收率。AOAC规定的回收率合理范围见表5 表5 回收率合理范围浓度回收率 (%) 100% 98-101 10% 95-102 1% 92-105 0.1% 90-108 0.01% 85-110 10g/g (10 ppm) 80-115 1 g/g (1 ppm) 75-120 10 ng/g(10 ppb) 70-125 3、方法的重复性采用不同基质、不同浓度的样品，进行测定，每种基质加入3个浓度梯度。每个浓度于同一天测定7次。表6 重复性的测定次数浓度1234567平均值RSD(%)测定的重复性的评估：根据HORRAT公式评估： HORRATr = RSDr (检测, %)/RSDr (计算,%) ，通常可接受值为该比率的0.52，RSD理论计算公式： RSDr = C-0.15 其中C为浓度。 表7 RSD理论计算值样品含量计算的RSD 100%1%10%1.5%1%2%0.10%3%0.010%4%10 ppm6%1ppm8%10ppb15%4、 检出限和定量限测定以3倍信噪比确定检出限，以10倍信噪比确定定量限四 、标准分析方法草案确定最佳分析条件，进行回收率和重现性的计算，按照20001.4-2001标准编写规则：化学分析部分要求编写标准分析方法草案。五、分析方法的实验室间对比 1、对比实验的基本要求对比合作实验室的应该选择本领域有一定的影响力，有相应的实验应用能力和仪器设备，能够完成本研究任务的实验室定量分析方法：要求有不少于八个实验室提供的有效数据（当涉及非常昂贵的设备或专门的实验室，最少5个实验室对比研究），每种基体2种不同浓度的定性研究报告，每种浓度5个样品，每种基体5个阴性对照实验每个实验室分析至少五种物质，作为随机匹配或优等匹配。定性分析方法：至少需要15个实验室（最好超过15个实验室，因为其中的一些实验数据必须舍弃），进行数据对比。送检样品：定量分析样品的最低数量为5（只有当单一浓度涉及单一基质可能最低减至3 ）。送检样品必须是保持均匀性，并随机编码，为使报告的次序无预选性。分析样品的浓度应在选择浓度范围内，分析样品应该经过运输，不会变化，同时预留一定量的样品，以备重新测定。空白样品：当某组分不存在与存在一样重要时，当必须校正组分含量或基质引起的背景时，或要求恢复数据，则必须规定测量分析物时消除背景信号。同样重要的是要了解空白的可变性和方法趋势也能产生误差。测试报告：实验室应依据提供的分析方法进行对比样品的测定；按照要去完成测定报告，提供测定的原始数据，图表，记录追查，照片，或其它文件。2 、实验室间数据研究分析：对所参加对比的实验室数据进经过格拉布斯（Grubbs）法, 科克伦（Cochran）,狄克逊（Dixon）法进行异常值的审查；按照GB/T6379标准测量方法的重复性和再现性统计分析，计算回收率（Rec）、HORRAT、重复性（实验室内，sr）和再现性（实验实间sR）标准偏差；重复性和再现性相