《核酸结构与功能》PPT课件.ppt

第二章核酸的结构和功能 StructureandFunctionofNucleicAcid 核酸 nucleicacid 是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子 携带和传递遗传信息 一 核酸的发现和研究工作进展 1868年FridrichMiescher从脓细胞中提取 核素 1944年Avery等人证实DNA是遗传物质1953年Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构1965年Nirenberg发现遗传密码1970年Temin和Baltimore发现逆转录酶1981年Gilbert和Sanger建立DNA测序方法1985年Mullis发明PCR技术1990年美国启动人类基因组计划 HGP 1994年中国人类基因组计划启动2001年美 英等国完成人类基因组计划基本框架 二 核酸的分类及分布 第一节核酸的化学组成及其一级结构TheChemicalComponentandPrimaryStructureofNucleicAcid 核酸的化学组成 1 元素组成C H O N P 9 10 嘌呤 purine 腺嘌呤 adenine A 鸟嘌呤 guanine G 碱基 嘧啶 pyrimidine 胞嘧啶 cytosine C 尿嘧啶 uracil U 胸腺嘧啶 thymine T 碱基的互变异构 酮式 烯醇C OC OHNN氨基 亚氨基C NH2C NH2 HNHN受介质pH影响 戊糖 核苷 AR GR UR CR脱氧核苷 dAR dGR dTR dCR 一 核苷酸的结构 核苷酸 AMP GMP UMP CMP脱氧核苷酸 dAMP dGMP dTMP dCMP 电脑模型图简化式 酯键 糖苷键 体内重要的游离核苷酸及其衍生物 含核苷酸的生物活性物质 NAD NADP CoA SH FAD等都含有AMP 多磷酸核苷酸 NMP NDP NTP 环化核苷酸 cAMP cGMP AMP ADP ATP cAMP C G A 二 核酸的一级结构 定义核酸中核苷酸的排列顺序 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同 所以也称为碱基序列 书写方法 5 pApCpTpGpCpT OH3 5 ACTGCT3 目录 第二节DNA的空间结构与功能DimensionalStructureandFunctionofDNA DNA的二级结构 双螺旋结构DNA双螺旋结构的研究背景和历史意义DNA双螺旋结构模型要点DNA的超螺旋结构及其在染色质中的组装DNA的超螺旋结构原核生物DNA的高级结构DNA在真核生物细胞核内的组装DNA的功能 一 DNA的二级结构 双螺旋结构 一 DNA双螺旋结构的研究背景和历史意义 目录 Chargaff规则任何一种生物中各碱基相对比例相同即 A T G C 不同生物的DNA 其碱基组成不同 同一个体不同器官 组织的DNA 其碱基组成相同 DNA双螺旋结构发现的历史意义 揭示了生物体遗传信息储存及表达的分子机制开创了现代分子生物学是生物学发展史上的里程碑 二 DNA双螺旋结构模型要点 Watson Crick 1953 DNA分子由两条相互平行但走向相反的脱氧多核苷酸链组成 两链以 脱氧核糖 磷酸 为骨架 以右手螺旋方式绕同一公共轴盘 螺旋直径为2nm 形成大沟 majorgroove 及小沟 minorgroove 相间 目录 二 DNA双螺旋结构模型要点 Watson Crick 1953 碱基垂直螺旋轴居双螺旋内側 与对側碱基形成氢键配对 互补配对形式 A T G C 相邻碱基平面距离0 34nm 螺旋一圈螺距3 4nm 一圈10对碱基 目录 碱基互补配对 T A G C 二 DNA双螺旋结构模型要点 Watson Crick 1953 氢键维持双链横向稳定性 碱基堆积力维持双链纵向稳定性 目录 三 DNA双螺旋结构的多样性 目录 B 二 DNA的超螺旋结构及其在染色质中的组装 一 DNA的超螺旋结构 超螺旋结构 superhelix或supercoil DNA双螺旋链再盘绕即形成超螺旋结构 正超螺旋 positivesupercoil 盘绕方向与DNA双螺旋方同相同 负超螺旋 negativesupercoil 盘绕方向与DNA双螺旋方向相反 意义DNA超螺旋结构整体或局部的拓扑学变化及其调控对于DNA复制和RNA转录过程具有关键作用 二 原核生物DNA的高级结构 三 DNA在真核生物细胞核内的组装 真核生物染色体由DNA和蛋白质构成 其基本单位是核小体 nucleosome 核小体的组成DNA 约200bp组蛋白 H1H2A H2BH3H4 三 DNA的功能 DNA的基本功能是以基因的形式荷载遗传信息 并作为基因复制和转录的模板 它是生命遗传的物质基础 也是个体生命活动的信息基础 基因从结构上定义 是指DNA分子中的特定区段 其中的核苷酸排列顺序决定了基因的功能 第三节RNA的结构与功能 StructureandFunctionofRNA RNA的种类 分布 功能 一 信使RNA的结构与功能 内含子 intron mRNA成熟过程 外显子 exon 目录 mRNA结构特点 1 大多数真核mRNA的5 末端均在转录后加上一个7 甲基鸟苷 同时第一个核苷酸的C 2也是甲基化 形成帽子结构 m7GpppNm 2 大多数真核mRNA的3 末端有一个多聚腺苷酸 polyA 结构 称为多聚A尾 帽子结构 mRNA核内向胞质的转位mRNA的稳定性维系翻译起始的调控 帽子结构和多聚A尾的功能 帽结合蛋白 CBPs polyA结合蛋白 PAB mRNA的功能把DNA所携带的遗传信息 按碱基互补配对原则 抄录并传送至核糖体 用以决定其合成蛋白质的氨基酸排列顺序 tRNA的一级结构特点含10 20 稀有碱基 如DHU3 末端为 CCA OH5 末端大多数为G具有T C 二 转运RNA的结构与功能 N N二甲基鸟嘌呤 N6 异戊烯腺嘌呤 双氢尿嘧啶 4 巯尿嘧啶 稀有碱基 tRNA的二级结构 三叶草形氨基酸臂DHU环反密码环额外环T C环 氨基酸臂 额外环 tRNA的三级结构 倒L形 tRNA的功能活化 搬运氨基酸到核糖体 参与蛋白质的翻译 rRNA的结构 三 核蛋白体RNA的结构与功能 rRNA的功能参与组成核蛋白体 作为蛋白质生物合成的场所 rRNA的种类 根据沉降系数 真核生物5SrRNA28SrRNA5 8SrRNA18SrRNA 原核生物5SrRNA23SrRNA16SrRNA 核蛋白体的组成 四 其他小分子RNA及RNA组学 除了上述三种RNA外 细胞的不同部位存在的许多其他种类的小分子RNA 统称为非mRNA小RNA smallnon messengerRNAs snmRNAs snmRNAs snmRNAs的种类核内小RNA核仁小RNA胞质小RNA催化性小RNA小片段干涉RNA snmRNAs的功能参与hnRNA和rRNA的加工和转运 RNA组学研究细胞中snmRNAs的种类 结构和功能 同一生物体内不同种类的细胞 同一细胞在不同时间 不同状态下snmRNAs的表达具有时间和空间特异性 RNA组学 核酸和蛋白质的比较 核酸的理化性质ThePhysicalandChemicalCharactersofNucleicAcid 第四节 目录 1 DNA或RNA的定量OD260 1 0相当于50 g ml双链DNA40 g ml单链DNA 或RNA 20 g ml寡核苷酸2 判断核酸样品的纯度DNA纯品 OD260 OD280 1 8RNA纯品 OD260 OD280 2 0 OD260的应用 目录 二 DNA的变性 denaturation 定义 在某些理化因素作用下 DNA双链解开成两条单链的过程 方法 过量酸 碱 加热 变性试剂如尿素 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇 丙酮等 变性后其它理化性质变化 OD260增高粘度下降比旋度下降浮力密度升高酸碱滴定曲线改变生物活性丧失 目录 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 例 变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应 DNA变性时其溶液OD260增高的现象 目录 热变性 解链曲线 如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260 absorbance A A260代表溶液在260nm处的吸光率 值作图 所得的曲线称为解链曲线 目录 Tm 变性是在一个相当窄的温度范围内完成 在这一范围内 紫外光吸收值达到最大值的50 时的温度称为DNA的解链温度 又称融解温度 meltingtemperature Tm 其大小与G C含量成正比 目录 三 DNA的复性与分子杂交 DNA复性 renaturation 的定义在适当条件下 变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象 这一现象称为复性 减色效应DNA复性时 其溶液OD260降低 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性 这一过程称为退火 annealing 目录 在DNA变性后的复性过程中 如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中 只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系 在适宜的条件 温度及离子强度 下 就可以在不同的分子间形成杂化双链 heteroduplex 这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成 也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成 这种现象称为核酸分子杂交 核酸分子杂交 hybridization DNA DNA杂交双链分子 不同来源的DNA分子 核酸分子杂交的应用 研究DNA分子中某一种基因的位置定两种核酸分子间的序列相似性检测某些专一序列在待检样品中存在与否是基因芯片技术的基础 探针 在核酸杂交的基础上发展起来的一种用于研究核酸和基因诊断的新技术称为探针技术 探针 单链的核苷酸聚合体标记后 就可以称为探针 第五节核酸酶Nuclease 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶依据底物不同分类DNA酶 deoxyribonuclease DNase 专一降解DNA RNA酶 ribonuclease RNase 专一降解RNA 依据切割部位不同核酸内切酶 分为限制性核酸内切酶和非特异性限制性核酸内切酶 核酸外切酶 5 3 或3 5 核酸外切酶 参与DNA的合成与修复及RNA合成后的剪接等重要基因复制和基因表达过程负责清除多余的 结构和功能异常的核酸 同时也可以清除侵入细胞的外源性核酸在消化液中降解食物中的核酸以利吸收体外重组DNA技术中的重要工具酶 生物体内的核酸酶负责细胞内外催化核酸的降解 核酸酶的功能 核酶 催化性DNA DNAzyme 人工合成的寡聚脱氧核苷酸片段 也能