食品微生物中细菌菌落总数的测定.ppt

食品微生物学检验菌落总数的测定 组员 唐逍屿 谢娇 谢红艳 一 目的1 学习并掌握食品中菌落总数测定方法和原理 2 了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义 二 原理 细菌数量的表示方法由于所采用的计数方法不同而有两种 菌落总数和细菌总数 1 菌落总数是指食品检样经过处理 在一定条件下培养后 所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落总数 以CFU g mL 来表示 一定条件包括培养基成分 培养温度和时间 pH 是否需要氧气等 按国家标准方法规定 即在需氧情况下 36 1 培养48 2h 能在平板计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数 所以厌氧或微需氧菌 有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌 由于现有条件不能满足其生理需求 故难以繁殖生长 食品中细菌菌落总数越多 则食品含有致病菌的可能性越大 食品质量越差 菌落总数越小 则食品含有致病菌的可能性越小 须配合大肠菌群和致病菌的检验 才能对食品做出较全面的评价 2 细菌总数指一定数量或面积的食品样品 经过适当的处理后 在显微镜下对细菌进行直接计数 其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数 细菌总数也称细菌直接显微镜数 通常以1g或1mL样品中的细菌总数来表示 三 材料 1 食品检样2 培养基平板计数培养基 无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液3 其它无菌培养皿 无菌吸管 电炉 恒温培养箱等 四 流程 1 检样2 做几个适当倍数的稀释液3 选择2 3个适宜稀释度各1mL 分别加入灭菌平皿内4 平皿内倾注15 20mL琼脂培养基 混匀5 36 1 培养48 2小时或 24 2 小时6 记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量7 计算菌落总数 报告 五 步骤 一 取样 稀释和培养1 以无菌操作取检样25g mL 放于225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的灭菌玻璃瓶内 瓶内预置适量的玻璃珠 或灭菌乳钵内 经充分振荡或研磨制成1 10的均匀稀释液 固体和半固体检样在加入稀释液后 最好置灭菌均质器中以8000 10000r min的速度处理1 2min 制成1 10的均匀稀释液 2 用1mL灭菌吸管吸取1 10稀释液1mL 沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内 振摇试管或反复吹打混合均匀 制成1 100的稀释液 3 另取1mL灭菌吸管 按上项操作顺序 制10倍递增稀释液 如此每递增稀释一次即换用1支1mL吸管 4 根据标准要求或对污染情况的估计 选择2 3个适宜稀释度 分别在制作10倍递增稀释的同时 以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中 每个稀释度做两个平皿 同时分别取1ml稀释液 不含样品 加入两个灭菌平皿内作空白对照 5 稀释液移入平皿后 将冷却至46 琼脂培养基注入平皿约15 20ml 并转动平皿 混合均匀 6 待琼脂凝固后 翻转平板 置36 1 温箱内培养48 2h 水产品30 1 温箱内培养72 3h 如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时 可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基 约4毫升 凝固后培养 二 菌落记录方法做平板菌落数记录时 可用肉眼观察 必要时用放大镜检查 以防遗漏 在记下各平皿的菌落总数后 求出同稀释度的各平板平均菌落数 到达规定培养时间 应立即计数 如果不能立即计数 应将平板放置于0 4 但不要超过24h 1 平皿菌落数的选择选取菌落数在30 300之间的平板作为菌落总数测定标准 每一个稀释度应采用两个平皿 大于300的可记为多不可计 2 其中一个平板有较大片状菌落生长时 则不宜采用 而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数 若片状菌落不到平板的一半 而其余一半中菌落分布又很均匀 则可以计算半个平板后乘以2 以代表一个平板的菌落数 3 当平板上有链状菌落生长时 如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限 则应作为一个菌落计 如存在有几条不同来源的链 则每条链均应按一个菌落计算 不要把链上生长的每一个菌落分开计数 三 菌落总数的计算1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内 计算两个平板菌落数的平均值 再将平均值乘以相应稀释倍数 作为每g mL 中菌落总数结果 2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时 按如下公式计算 N C n1 0 1n2 d 1 式中 N 样品中菌落数 C 平板 含适宜范围菌落数的平板 菌落数之和 nl 第一个适宜稀释度平板数 n2 第二个适宜稀释度平板数 d 稀释因子 第一稀释度 3 若所有稀释度的平板菌落数均 300 则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数计算 4 若所有稀释度平板菌落数均 30 则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数计