妇科再造丸对中波紫外线照射所致豚鼠皮肤色素沉着的抑制作用.doc

妇科再造丸对中波紫外线照射所致豚鼠皮肤色素沉着的抑制作用作者：张晴，罗俊，黄能慧【摘要】 目的研究妇科再造丸对皮肤色素沉着的作用，并探讨其部分作用机理。 方法应用白色豚鼠经中波紫外线（UVB）照射诱导皮肤色素沉着动物模型，用HMB45为一抗，以免疫组化方法显示表皮中的黑色素细胞，检测黑色素细胞个数及其平均灰度值。结果妇科再造丸高、中、低3个剂量组与模型组比较，均能减少黑色素细胞个数并增加其平均灰度值（P<0.01）。结论 妇科再造丸对黑色素细胞增殖有一定的抑制作用。 【关键词】 妇科再造丸; 中波紫外线; 色素沉着; 黑色素细胞Abstract：ObjectiveTo study the inhibitory effect of Fu-Ke-Zai-Zao Pill on pigmentation induced by UVB and investigate its mechanism. MethodsThe changes of number and mean gradation of melanocytes induced by UVB were observed in the experimental hypermelanosis model (white guinea pig). Results Decreased number and increased mean gradation of melanocytes were found in three groups of Fu-Ke-Zai-Zao Pill compared with model group(P<0.01). ConclusionFu-Ke-Zai-Zao Pill can inhibit melanocytic proliferation，which maybe make it valid in treating skin pigmentation.Key words：Fu-Ke-Zai-Zao Pills; UVB; Pigmentation; Melanocyte 皮肤色素沉着是临床常见疾病，发病人群广泛，尤其对于女性，在影响容貌的同时还会造成心理压力。其发病机制主要是由于皮肤中黑色素细胞增多、合成黑色素能力增强1。妇科再造丸为一复方中药制剂，由当归、熟地、白芍等四十余味中药材组成，临床应用已有几十年之久。本实验通过建立中波紫外线（UVB）诱导豚鼠皮肤色素沉着模型，观察了妇科再造丸对黑色素细胞的作用，旨在为该药的进一步开发利用提供科学的理论依据。1 器材与方法1.1 动物雌性白色豚鼠，体重（35020）g，合格证号：SCXK（黔）2002-0001，由贵阳医学院实验动物中心提供。1.2 试剂妇科再造丸丸剂（2.6 g/10丸，贵阳德昌祥制药有限公司产品，批号051126），维生素C（50 mg/片，重庆天圣药业有限公司产品，批号050722），维生素E胶囊（100 mg/个，广州白云山制药厂产品，批号060602），黑素瘤抗体（HMB45）试剂盒（天津市津脉基因测绘技术有限公司产品）。1.3 仪器SS-01A型紫外线光疗仪光谱（31210）nm，辐照强度3.2 mW/cm2，上海希格玛高技术有限公司，Biomias99图像分析系统（四川大学图像图形研究所）。1.4 方法2，3豚鼠48只，按体重随机分为6组，每组8只：妇科再造丸高（1.96 gkg-1d-1）、中（0.98 gkg-1d-1）、低（0.49 gkg-1d-1）3个剂量组，阳性对照组4（维生素C 0.085 gkg-1d-1+维生素E 0.03 gkg-1d-1），正常对照组（蒸馏水6 mlkg-1d-1）及模型组(蒸馏水6 mlkg-1d-1)。 除正常对照组外，其余5组用乌拉坦（0.4 gkg-1）腹腔注射麻醉，剪净背部中心被毛，使用紫外光疗仪照射每只豚鼠背部中心30 min，照射总量达到5 700 mJ/cm2。照射次日开始灌胃给药，连续3周。3周后处死动物，取豚鼠照射区域去毛皮肤一块（约1 cm2 cm），正常组豚鼠取相应区域去毛皮肤一块，中性福尔马林固定。常规石蜡包埋切片，用黑素瘤鼠抗人单克隆抗体(HMB45)为一抗，采用免疫组化方法显示表皮中的黑色素细胞。1.5 检测指标5光镜观察HMB45染色阳性的黑色素细胞密度及着色深浅，并通过Biomias99图象分析系统，检测切片上黑色素细胞个数及平均灰度值。采用Excel 2003统计软件进行组间T-test分析。2 结果2.1 光镜观察正常对照组豚鼠表皮的基底层细胞间，可见到较少的HMB45标记阳性的黑色素细胞，着色不是很深（见图1）。模型组HMB45标记阳性的黑色素细胞明显增多，成簇分布于表皮基底层细胞间，并且着色很深，呈强阳性反应（见图2）。妇科再造丸3个剂量组及阳性对照组中黑色素细胞数均有减少，着色变浅，其中以妇科再造丸高剂量组尤为明显，见图3。2.2 对豚鼠皮肤中黑色素细胞个数及平均灰度的作用结果显示，正常对照组豚鼠表皮基底层细胞间，HMB45染色阳性的黑色素细胞较少，着色也较浅；而模型组豚鼠表皮基底层细胞间HMB45染色阳性的黑色素细胞量多密集，并且着色较深。灰度（MG）反映物体颜色的深浅度，颜色越浅，灰度值越高。与模型组比较，妇科再造丸高、中、低3个剂量组均能不同程度的减少黑色素细胞个数并增加其平均灰度值（P<0.01）。结果见表1。表1 黑色素细胞个数及平均灰度（略）3 讨论 色素沉着诱因很多，如长期日晒、遗传、内分泌失调等。据文献报道，中波紫外线（UVB）能引起黑色素细胞数目增多、黑色素合成增加等细胞功能状态的变化，是引起皮肤色素沉着增加的根本原因6。在黑色素的生成中，酪氨酸酶起着至关重要的作用，是黑色素合成过程中的限速酶，其表达和活性决定着黑色素生成的量和速度。因此如果酪氨酸酶的活性受到抑制，就能使黑色素的合成减少，就能在一定程度上预防和治疗色素沉着。据文献报道，妇科再造丸组方中的当归、熟地、黄芪、白芍、川芎、益母草、茯苓及山药等多味中药均有抑制酪氨酸酶活性的作用4。因此我们建立了UVB诱导豚鼠皮肤色素沉着模型，研究了妇科再造丸对黑色素细胞的作用。 实验结果显示，妇科再造丸各剂量组均能减少HMB45标记阳性的黑色素细胞个数并增加其平均灰度值，其中以妇科再造丸高剂量组效果最好。提示妇科再造丸对UVB照射引起的色素沉着有一定的治疗作用，其作用机制可能与组方中药物抑制酪氨酸酶活性有关。【参考文献】 1Halaban R , Tyrrell L , Longley J , et al. Pigmentation and prolifertion of human melanocytes and the effects of melanocyte stimulating hormone and ultraviolet B lightJ.Ann Ny Acad Sci. 1993 , 680 :290.2Imokawa G, Kawai M, Mishima Y, et al. Differential analysis of experimental hypermelanosis induced by UVB,PUVA ,and allergic contact dermatitis using a brownish guinea pig modelJ.Arch Dermatol Res, 1986, 278:352.3李洪武，朱文元，夏明玉.白术等对UVB诱导豚鼠皮肤色素沉着的抑制作用J.中华皮肤科杂志，2000，33（6）：386.4王福兴,陈前进.具抑制酪氨酸酶活性祛斑增白药物J.中国医院药学杂志，1999，19（8）:479.5过伟峰，徐立，项晓人，等.建立小鼠黄褐斑实验动