乙肝表面抗原弱阳性及少见模式的临床标本在2种检测法下的对比分析.pdf

当代医学2 0 1 0 年6 B第l 6 卷第l 8 期总第2 0 9 期C o n t e m p o r a r y Me d i c i n e J u n 2 0 1 0 V o 1 1 6 N o I 8 I s s u e No 2 0 9 d o i 1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 0 0 9 4 3 9 3 2 0 1 0 1 8 0 8 2 乙肝表面抗原弱阳性及少见模式的临床标本在2 种检 测法下的对比分析 张立 军刘艾琴 摘要 目的 探讨E ls 法检测乙肝五项结果中的H B s A g 阳性结果和少见模式结果的真实性 方法 从3 1 2 0 0 例乙肝五项E I s 法检测结果中筛出 H B s A g 弱阳性 0 例 少见模式结果7 3 2 例 对筛出的2 4 2 例标本再进行电化学发光定量检测 结果 j 1 0 例H B s A g 弱阳性结果用电化学发光检测 结果 一 致为9 O 例 符合率为8 1 8 少见模式1 5 2 例与电化学发光检测的符合率为1 0 6 其中全部为H B s A g 和H B s A b 阳性 结论 E I9 法检测乙肝五项对 H B s A g 阳性结果报告要慎重 E ls 法灵敏度小于电化学发光检测 假阳性率大于电化学发光检测 H B s A g 阳性结果中 H B s A g H B e A b H B c A b B 性和 H B s A g H B c A b 阳性标本 占 大多数 少见模式结果主要是H B s A g 和H B s A b 同时阳性的结果 且出现几率非常小 关键词 乙肝 酶联免疫吸附 电化学发 光 A b s t r a c t O b j e c t i v e T o i n v e s ti g a t e t h e d e t e c ti o n o f h e p a t i t i s BE l s fi v e w e a k p o s i ti v e HB s A g r e s u l t s inth e r e s u l ts a n d t h e r e s u lt s o f th e a u the n ti c i t y o f r a r e mo de l s M e tho d s Fr o m the 3 1 20 0 c a s e s o fh e p a ti t i s B t e s t r e s u l t s o f fiv e El s me tho d t o s i e v e o u t t h e HBs Ag we a k l y p os i ti v e in 1 1 0 e a s e s 1 3 2 c ase s o f r a r e mo d e 1 r e s u l ts o n the s c r e e n o u t o f t h e 24 2 s p e c i me n s t o c o n d u c t q u a n ti t a t i v e d e t ecti o n o fe l e c tr o c h e mi l u mine s c e n c e Re s u l t 1 l 0 c a s e s of I I Bs Ag we ak ly po s i ti ve r e s u i t e l e c t r o c he mi c a l l u mi n e s e e n c e d e t e c t i o n t he s a l n e as the 9 0 c a s e s c o mp l i anc e was 8 1 8 1 3 2 c a s e s wi th u n u s ua l p a t t e r ns c o n s i s t e n t wi t h e l e c t r o c he r n i lu mi n e s e e n c e d e t e c ti on r a t e wa s 1 0 6 o fwh i c h a l l the HBs Ag an d HBs Ab p o s i t i v e Co n c l u s i o n El s d e t e c tio n o fhe p a ti ti s B 5 p a ir s o fwe ak p o s i t i v e HBs Ag r e s ul t s r e p o r t mu s t b e c a u t i o u s El s me thod h as I e s s than ECL de t e c t i o n the f a l s e po s i t i v e rat e than l i g h t e mi t t i n g e l e c t r o c h e mi c a l d e t e c ti o n H B s A g w e a k l y p o s i t i v e r e s u l ts in H Bs A g H B e A b H B c A b p o s i t i v e and H B s A g H B c A b p o s i t i v e s a m p l e s i n th e ma j o r i ty R a r e m o d e l r e s u l ts a r e m a i n l y p o s i ti vef o rHBs Agan dHBs Abthe s a meti methe r e s ul ts a n dthe r ei sv e r yl i t t l e c h anc e f K e y wo r d s 1 h e p a t i t i s B E L I S A e l e c t r o c h e mi l u mi n e s c e n c e 乙肝五项E l s 法 酶联免疫吸附试验 检测是各大医疗机构进 行乙肝诊断常用的检测方法 简单快捷 灵敏度和重复性好 而且价格便宜 适宜大批标本检测 但它也有不足 本文从我 院3 1 2 0 0 份检测中筛出2 4 2 份标本结合罗氏电化学发光定量法进 行分析如 下 1 资料与方法 1 1 标本来源 从我院2 0 0 7 年4 月1 日 2 0 0 8 年3 月3 1 日检测的门诊和住院以 及体检标本中 筛出弱阳性结果和少见模式结果共计2 4 2 例进行 分析 其中弱阳性l 1 0 例 少见模式1 3 2 例 1 2 仪器 多功能自动酶标洗板机P W 9 6 0 E l x 8 0 0 酶标仪 3 7 温 箱 离心机 罗氏电化学发光仪E l 7 0 1 3 试剂 科华公司立可读乙肝检测试剂盒 罗氏电化学发光乙肝检 测试剂盒 1 4 方法与检测 2 4 2 例标本来源于我院日常检测工作 每天由具有检验技术资质人员 严格按实验的操作规程 认真 完成 检验结果须由另外检验技术人员检查并签发报告 对有 疑问结果 认真记录并留取标本与隔天进行定量检测并分析 2 结果 2 1 酶联免疫吸附试验 E l s 法 HB s Ag HB s Ab HBe Ag 采用双抗体夹心法测定 严 作者单位 5 1 8 0 2 0 暨南大学第二临床学院深圳市人民医院检验科 张立军刘艾琴 格按实验的操作规程 使用E l x 8 0 0 酶标仪读板 结果判断 样品OD 值 阴性对照平均OD值 2 1 判断为阳性 否则为阴 性 阴性对照O D值低于0 0 5 以0 0 5 计算 高于0 0 5 按实际OD 值 计算 HB e Ab HB c Ab 采用竞 争法测定 严格按 实验 的操 作规程 E I x 8 0 0 酶标仪读板 结果判断 C u t o f f V a l u e 计算 c ov 阴性对照平均O D值 阳性对照平均OD 值 2 样本O D 值 C O V为阴性 样本OD 值 C OV 为阳性 罗 氏电化学 发光 法 HB s Ag 阳性 0 9 COI HB s Ab 阳 性 1 0 I U L HBe Ag 阳性 1 COI HB e Ab HB c Ab阳性 1 COI 2 2 3 1 2 0 0 例标本中共分离出弱阳性l 1 O 例 E l g 法 HB s Ag 的OD值在0 1 l 5 0 3 1 5 2 间 用罗氏电化学发光 法定量检测 HB s Ag 阳性9 0 例 符合率为8 1 8 1 1 0 例HB s Ag 弱阳性结果 E l s 法 中 以HBs Ag HB e Ab HBc Ab阳性和 HB s Ag HB c Ab 阳性标本 占大多数 共8 3 例 与 罗氏电化学发 光法定量检测的符合率分别为9 4 0 和8 1 2 1 1 0 N I HB s A g 阳 性结果 E l s 法 中 单独测得HB s Ag I H 性的标本有2 5 例 与罗氏 电化学发光法定量检测的符合率为4 8 0 另外有2 例E l s 法测得 HB s Ag 阴性而罗氏电化学发光法定量检测阳性的标本 见表1 2 3 3 1 2 0 0 例标本中共分离出少见模式共筛出l 3 2 例 HB s Ag 和HBs A b 同时阳性有9 5 例 其中最多例数的是HB s Ag HB s Ab HB c Ab 阳性标本和HB s Ag HB s Ab HB e A b HB c Ab 阳性 分别为3 2 例和2 9 例 与罗氏电化学发光法定量检测的符合 率分别为2 1 9 和1 3 8 HB s Ag HB s A b HB e Ag HB c A bI H 性标本和HB s Ag HB s Ab 阳性 分别为l 7 例 HB e Ag 与HB e Ab 共同阳性9 例 另外有1 例HB s Ab 与HB e Ag 共同阳性 罗氏电化学 发光法再检测也为阳性 后查实为新生儿免疫球蛋自治疗患儿 118 当代医学2 0 1 0 年6 月第l 6 卷第l 8 期总第2 0 9 期C o n t e mp o r a r y Me d i c i n e J u n 2 0 1 0 V o 1 1 6 N o 1 8 I s s u e N o 2 0 9 表 1 1 1 0 例HB s A g 弱阳性标本E I s 法和 电化学 发光法检测对 比 注 HBs Ag 的OD值在0 1 1 5 0 3 1 5 之 间 表2 1 3 2 例少见模式的标本E l s 法和 电化学发光法检测对比 其它少见模式未见相符 总符合率为l 0 6 见表2 3 讨论 在 乙肝检测 中HB s Ag 的检 测是重点 也是一个容易 引发病 人投诉的项目 由于价格成本和仪器设备等的原因 我国检测 乙肝多用酶联免疫吸附试验 E l s 法 这就导致检验 中经常出现 多种不好与病人和医生解释的结果 HB s Ag 主要 以2 2 n m的小球形颗粒形式存在 小球形颗 粒 由1 0 0 个HBs Ag 单体组成 每个单体 由2 2 6 个氨基酸残 基构成 9 9 1 6 0 位氨基酸构成了HB s Ag 主要亲水区 Ma j o r h y d r o p h i l i c r e g i o n MHR 由1 2 4 1 4 7 位氨基酸构成特定 空间构型的 a 决定族 是HB s A g 刺激B 细胞产生抗体与之结 合的表位 所有血清型HB s Ag 都有共同 a 决定族 a 决定族此区高度保守 目前人们公认 a 决定族是与HB s Ab 结合的关键性位点 此处个别氨基酸的变异足以改变其抗原性 和免疫应答 导致HB s Ag 和HB s A b 共存的少见模式出现 对HB s Ag 的定性检测我国已有多个厂家试剂 检测灵 敏度多为0 5 n g ml 有资料显示 目前国内主要8 种试剂盒检 测变异的HB s Ag能力各不相同 1 8 种变异 总体漏检率为 l 6 7 4 4 4 HB V突变导致常规试剂检测A值降低 是 造成检测能力下降原因 我院1 1 O 例弱阳性结果 E l s 法 再用罗 氏电化学发光法定量检测 结果一致为9 0 例 符合率为8 1 8 罗 氏电化学发光法定量试剂检测灵敏度为0 0 5 n g ml 得到 8 1 8 的数据 与彭静等 的4 1 份弱阳性标本用雅培试剂定量 检 测得 到 的7 9 5 9 数 据相 近 因此 用定 性 试剂 E l s 法 检 测 HB s Ag 出假阳性结果几率大于定量试剂 罗 氏电化学发光 法 这与试剂本身质量和检验操作流程有关 大多数 HBV 感 染血清 中HB s Ag 含量 在5 n g ml 6 0 0 g ml 之间 1 0 0 g ml 以上常同时检测出HB e Ag 我院1 1 0 例 HB s Ag 弱 阳性结果 E l s 法 中 以HB s Ag HB e Ab HB c Ab 阳性和HBs Ag HB c Ab 阳性标本 占大多数 共8 3 例 与罗氏 电化学发光法定量检测的符合率分别为9 4 0 和8 1 2 1 l o N HB s A g j 阳性结果 E l s 法 中 单独测得HB s A g 阳性的标本有2 5 例 与罗氏电化学发光法定量检测的符合率为4 8 0 从数据 可看出单独测得HB s Ag g 性的标本 E l s 法 中有一半是假阳性 因此在 目前的医疗环境下为病人单测一项HB s Ag 是非常不可取 的 病人感染后 临床症状出现前6 8 N可检测出HB s Ag 症 状初期HB s Ag 浓度最高 如果无并发症出现 HB V感染后3 4 月将检测不到HB s Ag 如果6 个月后HB s Ag 仍为阳性 占感染患 者的5 1 0 表明感染 已转为慢性 相对于成人来讲 9 0 的婴幼儿会发展为慢性感染 所以婴幼儿早期接种乙肝疫苗是 非常重要的 乙肝 检测中HBs Ab 是感染后产生的保护性抗体 根据 Ro b e t t k o c h 协会疫苗标准委员会制定的标准 如HB s Ab 小于 1 0 0 I U L 需要再次接种疫苗并需检测 我们检测到的1 3 2 例 E l s 法 少见模式的标本中有9 5 例HB s Ag 和HB s Ab 共同阳性标 本 再用 电化学发光法检N HB s Ag 和HB s Ab 结果一致的有1 3 例 符合率仅为1 3 6 可以看出而HB s Ag 和HB s Ab 同时阳性 的结果很少见 同时阳性可能的原因有 人在乙肝病毒感染 的恢复期 HB s Ag 的携带者 病人感染了两个不同亚型的 乙肝病毒 在9 5 例 E l s 法 HB s A g 和HB s A b 共同阳性标本中 例数最多 的是HB s Ag HB s Ab HB c Ab 阳性标 本和HB s Ag HB s Ab HB e Ab HB c Ab II E 性 分 别为3 2 例和2 9 例 与罗 氏电化学 发 光法定量检测的符合率分别为2 1 9 和1 3 8 1 3 2 例 E l s 法 少 见模式的标本中其他模式标本与罗氏电化学发光法定量检测的 符合率都非常低或未见相符 因此在酶联免疫吸附试验 E l s 法 检测乙肝五项的实验结果 中 少见模式的阳性报告多为假 阳 性 为数不多的真阳性报告也以上面的2 种模式多见 HBe Ag 是HBV复制的重要血清学指标之一 传统认为 HBV感染者血清 中HBe Ag与HBe Ab的血清学转换 提示 HB V复制明显下降 但临床上 1 0 2 0 的HBe Ag 阴性患者 仍然伴有高水平的乙肝病毒复制 HB e Ag 是乙肝病毒复制 及血清有强感染性的一个重要指标 在我们 日常检测工作中 由于对HB e Ag 和HB e Ab 有异议引起的患者投诉非常少 反而 是临床医生多一些 这可能是在治疗过程中乙肝病毒发生前c 区变异 或 C区变异 表达异 常 HB e Ag 正常 的HB e Ag 检 测不到 表现为HB e Ag 阴性 HB V DNA阳性 临床上称之 为HB e Ag 阴性慢性乙型肝炎 e CHB 而实际上病毒仍在复 制 这种变异的病毒促使机体产生相应抗体 导致肝细胞损 伤 病情进展 HB s Ag 也处与高水平变动 定性检测表现为 小三阳 和忽高忽低AL T 值及HBV DNA始终阳性 在检测过程 中 E l s 法 要时刻注意 由于抗原抗体过量而引 起的假阴性 即免疫学 中的 勾带效应 患者血清中如存 在大量的大分免疫球蛋白如RF因子 也可引起假阳性结果 检 测中HB e Ag 与HB s Ag 抗原量是一致的 得到正确的结果 需 要操作者认真判读 HB e A g 和HB e Ab 同时阳性未得到定量证 实 如果在急性乙肝恢复期和慢性肝炎的病人血液中形成了 免疫复合物 理论上是有可能测到的 HB c Ag 是非常强的免 下转第1 3 8 页 119 当代医学2 0 1 0 年6 月第l 6 卷第1 8 期总第2 0 9 期C o n t e mp o r a r y Me d i c i n e J u n 2 0 1 0 V o 1 1 6 N o 1 8 I s s u e N o 2 0 9 与教育为一体 2 2 饮食指导 合理的饮食是正常生命机能的基本保证 营养的合理调 配和摄取 在肝硬化的治疗过程中起着非常重要的作用 它可 以增加机体的免疫力肝硬化的护理诊断 增加肝细胞的再生能 力 使疾病早 日痊愈 因此 要保证足够的营养供给 食物要 多样化 应以高糖 高维生素 富含氨基酸的高效蛋白质 低 脂肪 少渣饮食为主 以米面为主食 进食优质蛋白如鱼 鸡 蛋 豆制品 限制油脂摄入 每天不超过2 0 2 对腹水或浮肿患 者 应根据尿量 体重的指标控制水分 钠盐的摄入 每天盐 的摄入量不超过0 5 2 低盐饮食 每天盐的摄入量不超过2 g 告知病人可用啤酒瓶盖做量具 每一瓶盖为3 g 肝硬化腹水应 限制液体入量 可按前l d 尿量再 b l1 5 0 0 ml 避免进食粗糙 坚 硬 不易咬碎的食物 适当多吃促进肠蠕动的食物 如蔬菜 高纤维食物 避免将鸡骨 鱼刺等咽下 忌辛辣的调味品 忌 饮酒 或刺激性食物 血氨偏高时 应限制蛋白质摄入选择植 物蛋白 例如豆制品 因其含蛋氨酸 芳香氨基酸和产氨氨基 酸较少 新鲜蔬菜水果含有丰富的维生素 如西红柿 橙等富 含维生素C 日常食用保证维生素的摄人 应耐心向病人介绍 各种食物的成分 如高钠食物有咸肉 酱油 酱菜 含钠味精 等 应少食 含钠较少的食物有谷类 茄类 水果等 引起便秘 的食物 如油炸食品 干果 坚果 巧克力 葡萄干等 易发 酵的食物 如面包 面食 易产气的食物 如豆类 菜花 洋 葱 甘蓝 奶制品 含钾多的食物有水果 硬干果 马铃薯 肉类等 要结合病人生活经验讲解 以通俗易懂的语言解释教 育内容 2 3 作息及行为指导 2 3 1 注意休息 卧床休息可以增加肝脏的血流量 有助于肝细胞修复和再 生 因此 休息是保护肝脏的重要措施之一 失代偿期肝硬化 患者应绝对卧床 或半坐卧位以减轻腹胀引起不适 减轻心肺 负荷 这样有利于增加肝脏的血流量 减轻肝脏负担 促进肝 细胞的恢复 避免出血 保证充足睡眠 生活有规律 并可以 采用半坐式来缓解腹部张力 同时也可给予背部按摩 2 3 2 保持大便通畅 肝硬化患者如果饮食不当 加之活动减少 胃肠蠕动减 慢 易导致习惯性便秘 对该病的愈后极为不利 因此 要给 患者适量进食一些富含纤维素的食物和香蕉之类的水果 既能 通便又可补充钾 必要时可服用缓泻剂 例如乳果糖 口服液 减少肠道氨的吸收 避免诱发肝性脑病 腹胀时 应用松节油 或薄荷油热敷促进肠道蠕动 减轻胀气引起的腹胀 同时也可 以配合顺时针方向的腹部按摩 这样有助于腹胀的缓解 2 3 3 做好口腔皮肤护理 每 日口腔护理2 次 指导患者用软牙刷刷牙 忌用牙签剔 牙 保持床铺整洁 保持皮肤清洁 每 日用温水擦浴 建议患 者穿柔软宽松 的棉质衣服 有水肿处用棉垫或气垫圈予 以保 护 避免造成皮肤破损 而增加感染机会 2 3 4 用药指导 对症治疗 禁止应用对肝脏有损害药物 有腹水或浮肿时 应按医嘱正确使用利尿剂 原则上要间断 联合 短期 同时 注意维持水电解质平衡 或按医嘱使用白蛋白和血浆 以提高 血浆胶体渗透压 减轻腹水或浮肿 3 出院时的舒适护理 3 1 向病人讲明不良情绪对疾病康复的影响 虽然肝病很难逆转 但现代医学的发展 治疗手段多样且 有效 所以患者应有坚定的信念 保持心情愉快 情绪稳定 遇事自我安慰 避免情绪过激而诱发 加重病情 起居有常 合理安排生活 注意休息 注意体重及腹围的变化 测量并记 录这些变化 3 2 重视家庭及社会支持系统不可忽视对家属的教育 在疾病恢复中 同时受过健康教育的病人家属在对病人的心 理支持 饮食 功能恢复中起重要作用 护士要做好家属的学习教 育工作 使其积极协助护士 帮助病人树立战胜疾病的信心 指导 家属 朋友 同事关心患者 理解患者 创造良好的氛围 使患者 解除后顾之忧 增强战胜疾病的信心 以利于疾病的康复 细心观 察 及早知道病情变化 当病人出现眭格 行为异常应警惕为肝性 脑病有前期症状 定时督促病人随诊 肖除不利于个人和家庭的 各种因素 让病人树立战胜疾病停 团 上接第1 1 9 页 疫原 可持续存在数十年 故在我们检测时HB c Ab 的阳性率 是很高的 对于HB c Ab 单独阳性结果 可能是HB V感染的窗 1 3期或其它抗原抗体太少测不出 抗原抗体非特异结合也是 常见的 团 参考文献 1 J H s u H Y C h a n g M H N i Y H e t a f S u r v e y o f h e p a t i t i s B s u r f a c e v a r ia n t i n f e c t i o n i n c h i Wr e n 1 5 y e a r s a f