艾迪注射液抗肿瘤作用及其对免疫功能的增强效应研究.doc

艾迪注射液抗肿瘤作用及其对免疫功能的增强效应研究目的研究艾迪注射液抗肿瘤作用及其对免疫功能的增强效应。方法利用小鼠体内移植瘤H22肝癌整体动物实验模型分析艾迪注射液的抑瘤率。采用双抗体夹心ELISA法检测荷瘤小鼠血清TNF-和IL-6的水平；分析艾迪注射液对胸腺和脾脏指数的影响，以碳粒廓清法分析艾迪注射液对网状内皮系统吞噬能力。结果艾迪注射液对小鼠体内移植瘤H22肝癌的抑瘤率高达30%以上，显著提高胸腺和脾脏指数、提高血中TNF-和IL-6的水平，增强内皮系统吞噬能力。放、化疗在恶性肿瘤治疗中占重要的地位，但是在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞也有较强的杀伤作用，患者往往无法承受同时带来的骨髓、免疫、胃肠道等方面的不良反应，导致生存质量严重下降。近年来，从传统中医药宝库中寻找新的抗肿瘤药物或组方逐渐成为广大医药学科技工作者关注的问题1。艾迪注射液由人参、刺五加、黄芪和斑蝥等制备而成，具有扶正驱邪、抗肿瘤和免疫调节作用。该药物已经上市，并被广泛应用于临床，取得了较为满意的疗效。本文主要研究艾迪注射液对H22荷瘤小鼠抑制肿瘤的作用，同时研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响，为其临床应用提供实验基础与理论指导。1材料与方法1.1 细胞株小鼠肝癌H22细胞株1.2 样品及试剂艾迪注射液1.3 动物健康昆明种小鼠，体重1822 g，1.4 对小鼠腋下接种H22肿瘤2取H22肿瘤细胞株用培养液制成细胞悬液，取少许的细胞悬液加等量的0.4%台朌蓝染液，显微镜下用血细胞计数板计数活细胞，计数后将悬液移入到25 ml培养瓶里，用含10%小牛血清的培养液按比例稀释至1107/ml。再将培养瓶放入温度37，相对湿度100%，含5%CO2，95%空气的培养箱培养。给培养瓶内的细胞换液1次/d，2 d传代1次。传代2次，将培养液离心得到的肿瘤细胞，再稀释成浓度为1107/ml的细胞后，用无菌注射器接种到小鼠腹腔内，0.2 ml/只。瘤株在动物体内传代2次后，选择接种8 d腹部明显膨大的动物，颈椎脱臼，固定于蜡板上，无菌操作，抽吸腹水，将6只动物的腹水混合。滴1滴腹水混合液于载玻片上，推片，瑞氏染色，镜下进行细胞分类记数，瘤细胞数95%。腹水用无菌PBS液稀释至1107个/ml，每鼠右腋下接种0.2 ml细胞。1.5 分组及给药肿瘤接种24 h后随机分组，即：正常对照组，模型组、艾迪高剂量组、艾迪中剂量组 、艾迪低剂量组；每组10只。尾静脉给药1次/d，给药容积为10 ml/kg，连续给药7 d。1.6 抑瘤率实验3末次给药后30 min球后静脉丛取血，处死小鼠，称体重并剥离皮下瘤块，称瘤重，计算瘤指数与抑瘤率。抑瘤率=100%瘤指数=瘤重（g）/动物体重（g）（实验结束时）1.7 荷瘤成年鼠免疫器官脏器指数分析处死动物，剖取胸腺和脾脏，按下式计算脏器指数：脏器指数（mg/g）= 脏器重量体重101.8 IL-6及TNF-分析对H22抑瘤率实验中取得血液，2 500 r/min离心15 min，分离制备血清。按检测试剂盒说明书进行检测操作，制备一系列标准溶液后，测定吸光度，与标准曲线对照，得到含量。1.9 对网状内皮系统吞噬活性的作用4末次给药后30 min ，尾静脉注射印度墨汁（用生理盐水稀释4倍）0.1 ml/10 g，注射后立即记时，于注射后3 min和13 min分别用肝素处理过的玻璃毛细管经小鼠球后静脉丛取血，取0.025 ml的血液加入含有0.1%Na2CO3 2 ml的试管中，混匀。于721分光光度计600 nm处测定每个样品的光密度值（OD），用0.1% Na2CO3液做空白对照。末次取血后，处死动物，取出肝脾称重，分别记录。计算清除速度的K