长春西汀在大鼠体内的药代动力学及生理处置.docx

课程平时考核作业题目 _长春西汀在大鼠体内的药代动力学及生理处置 成 绩 课程名称 生物药剂学与药物动力学 学 院 华西药学院 考核序号 1 专 业 药 学 年级班级 2008级2班 学生姓名 陈宇 学 号 0845051028 完成日期 2011年 5月 18 日 5长春西汀在大鼠体内的药代动力学及生理处置Pharmac0kinetics and disp0sit10n 0f vinpocetine in rats 1 实验目的长春西汀（vinpocetine）是从夹竹桃科小蔓长春花（Vinca minor L.）中提取的生物碱长春胺（vincamine）的衍生物。本品对缺血性脑血管疾病有良好疗效。长春西汀的药代动力学，国外有些研究，但国内尚未见报道。本实验建立高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）测定生物样品中长春西汀的方法，并用此法研究了本品在大鼠体内的药代动力学及生理处置。为该药的体内过程及应用提供理论和实验依据。2 材料2.1 实验动物Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠，质量（18020）g，合格证号为皖医实动准字01号，由安徽医科大学实验动物中心提供，实验前禁食12h，但可以自由饮水。1.2 实验仪器岛津高效液相色谱仪：包括LC-10AT泵、CBM-10Alite控制器、SPD-10Avp紫外检测器、CTO-10ASvp柱温箱、LC-Solution工作站；XW-80A微型旋涡混合器：上海医大仪器厂；TGL-l6GB台式高速离心机：上海安亭科学仪器厂；BP211D型电子天平：德国Sartorius公司；JL-l8O超声仪。IBM-PC计算机。1.3 药品与试剂长春西汀及内标物阿朴长春胺酸甲酯（apovincaminic acid）：东北制药总厂，含量99%，批号081228；乙腈：色谱纯，天津市恒星化学试剂制造有限公司；乙醚：色谱纯，天津市恒星化学试剂制造有限公司；甲醇：色谱纯，江苏汉邦科技有限公司；水为双蒸水；其余试剂氢氧化钠、碳酸铵为分析纯。3 实验方法3.1 色谱条件色谱柱：Nucleosil C18（5m，200mm5mm）；流动相：甲醇-硫酸铵水溶液（81：19）；流速：1.5ml/min；紫外检测波长：228nm，量程0.02AUFS；柱温25；内标物阿朴长春胺酸甲酯；进样量：100l；灵敏度：0.02AUFS。3.2 内标溶液的配制精密称定阿朴长春胺酸甲酯约10mg，置于100ml容量瓶中，加流动相适量，超声溶解，并定容至刻度，摇匀，即得每1ml中约含100g的内标溶液。3.3 生物样品采集取SD雄性大鼠6只，均分成二组，实验前12h开始禁食不禁水，尾部静脉注射长春西汀10mg/kg，两组大鼠分别于给药后30及l20min后断头处死，取其脏器，置于肝素化试管中。3.4 生物样品处理取肝素抗凝的大鼠血浆、胆汁、肝匀浆（1:5）、粪匀浆（1:10）及尿稀释液（1:2）各1ml，分别加入5l内标液（100g/m1）及0.5M NaOH 0.5ml（血浆）或0.25M NaOH 0.5ml（除血浆以外的生物样品）碱化，混匀后加乙醚3.0ml。旋涡器上混悬30秒，在4下离心10分钟，转速6000r/min，将有机相转移至10ml离心管中，剩余水相再加乙醚3.0ml，同法萃取离心，合并两次萃取液，于5060水浴下挥干，0.5ml甲醇溶解残渣。取100l溶液注入液相色谱仪，进行HPLC测定，按长春西汀与内标峰面积计算。4 长春西汀在雄性大鼠体内的药物代谢动力学考察参数及意义 取禁食但可以自由饮水的SD雄性大鼠72只，均分成二组，第一组静脉注射长春西汀10mg/kg-1，第二组静脉注射长春西汀5mg/kg-1，分别于30、60、90、120、180、240、300、360min断头取血。取血浆1ml，制取血浆样品并测得平均血药浓度-时间数据，绘制时量曲线，以此计算静脉注射长春西汀后药动学参数。1、根据二室模型计算将数据通过3P87程序在计算机拟合，结果表明iv 2种剂量长春西汀在大鼠体内的药代动力学行为符合二室模型，即符合C=Ae-t + Be-t通式，其中，和为混杂参数。1、根据血药浓度-时间曲线消除相数据求和B:以末端的血药浓度的对数对时间作图，即作ln C-t图，构成的直线，截矩为ln B，斜率为-。2、根据残数浓度Cr求和A。以实测浓度C减去外推浓度C得到外推浓度Cr，以ln Cr-t作图即为残数线，其截矩为ln A，斜率-。3、消除半衰期（t1/2（），Half-Life），血浆药物浓度或体内药物总量减少1/2所需时间，反映药物消除过程。消除快的药物t1/2短，消除慢的药物t1/2长。经5个t1/2后药物浓度下降到原来的3%左右，可认为基本消除完毕。根据该药的半衰期长短决定给药的间隔时间。对于肝、肾功能不好的患者来说，半衰期相对延长，如按常规给药，有引起中毒的危险。4、药物从中央室消除的一级速率常数k105、血药浓度-时间曲线下面积（AUC）AUC0420min 指药物从零时间至420min这一段时间的药-时曲线下总面积AUC0n=（C1+C2）（t2-t1）+（C2+C3）（t3-t2）+ + （Cn-1+Cn）（tn-tn-1）AUC0 指药物从零时间至所有原形药物全部消除这一段时间的药时曲线下总面积，反映药物进入血循环的总量。6、总清除率（CL, Total body clearance）单位时间内有多少毫升血中的药物被清除，是正确估算药物从体内消除速度的唯一参数 其中X0为静脉注射药量。2、根据矩量估算药物动力学参数1、平均滞留时间（MRT） 平均滞留时间是导入机体的所有药物分子在体内停留的平均时间一次给药将向机体输入众多药物分子。这些分子在体内停留不同时间，有的很快消除，有的则停留很长时间。其总体结果便是所有分子滞留时间的分布，故可用平均值加以表征。2、生物半衰期 t1/2=0.693MRT3、清除率CL 4、稳态时的表观分布容积Vss，它是反映药物稳态特征的参数之一，与药物消除无关。5 长春西汀在大鼠体内生理处置5.1 药物在体内的组织分布大鼠6只，均分二组，静脉注射长春西汀l0mgkg-1后30及120min分别断头处死，取其脏器，在冰浴下用生理盐水制成组织匀浆，测定药物在各组织中的含量。结果表明静脉注射本品后30min，药物在肺、脾、肝、肾含量最多，脑、脂肪、睾丸次之，心脏、肌肉、血浆最少。静脉注射后120min的组织分布与给药后30min基本相似，但各组织含量明显降低。脑组织可测得原形药，说明本品可通过血脑屏障进入脑组织。另取大鼠6只，同法灌胃长春西汀l0mgkg-1后的组织分布与静脉注射者基本相似。5.2 自尿、粪及胆汁的排泄取大鼠6只，3只静脉注射长春西汀l0mgkg-1，于不同时间收集尿和粪，测其药物含量，另3只于乙醚轻度麻醉下行胆道插管术，清醒后静脉注射长春西汀l0mgkg-1，于不同时间收集胆汁并测定其药物含量。另取大鼠6只，同法灌胃长春西汀l0mgkg-1后收集尿、粪及胆汁并测其药物含量。结果表明，大鼠静脉注射10mgkg-1长春西汀后24h尿、粪、胆汁排泄量分别占给药量的0273，0025和011%；大鼠灌胃10mgkg-1长春西汀24h后尿、粪、胆汁排泄量分别占给药量的0122，0017和0023%。6 讨论1. 实验的优缺点 优点：本实验采用高效液相色谱法（HPLC）测定大鼠血浆中长春西汀含量及其药物代谢动力学，与气相色谱-质谱（GC-MC）、毛细管电泳（CE）以及紫外分光光度法（UC）相比，有着高压、速度快、方法简便、所需样本量少、分析精度高、检测特异性较好，提高了回收率等优点。缺点：1) 样品处理过程复杂。在大鼠血浆处理中，有文献采用甲醇直接沉淀蛋白 Vereczkey L，et al. Kinetic metabolism of vinpocetine in the rat. Ibid 1979; 29;953.，离心后得到的上清液放置后有大量蛋白沉淀，不能完全地除去蛋白。本实验采用0.5M NaOH 碱化样品，混匀后加乙醚萃取，挥干后用甲醇溶解残渣，可充分沉淀蛋白并且提取长春西汀，效率较高，符合生物药代动力学研究。2) 流动相的筛选复杂。有文献报道用甲醇碳酸铵溶液(1571000)乙醚(75：25：3)为流动相 Rowland M and Tozer TN. Clinical Pharmacokinetics: Concepts and Applications. 3rd ed. Philadelphia: Lea Febiger, 1995, 485489.，经过实验发现，此流动相不能与杂质峰分开。经过流动相配比及选择后确定采用甲醇-硫酸铵水溶液（81：19）为流动相，可获得较短的保留时间，同时又可以与杂质峰分离。3) 检测波长的筛选复杂。文献报道了223nm，269nm与314nm等多种检测波长 Szepesi G. et al. High-performance liquid chromatography of eburnean alkaloids I. Separation on reversed phases .J Chromatography1981, 204,341.，本实验通过波长扫描显示显示长春西汀在228nm处有最大吸收峰，且干扰最小。2实验能解决的问题大鼠静脉注射长春西汀后，可分别用二室模型和矩量求算t1/2、MRT、AUC、AUC0、Vss和CL等药物动力学参数。这些药动学参数，有助于客观地对长春西汀的药用价值进行评价。药代动力学实验结果表明，大鼠静脉注射长春西汀后符二室开放模型，自血浆消除较快，体内分布广泛。大鼠灌胃长春西汀后，药物在体内吸收、消除均较快，其口服生物利用度较低。 一般认为，生物利用度不高的原因可能与胃肠道吸收不全、胃肠道内分解或首过效应有关。文献报道，长春西汀在大鼠肠腔及肠粘膜内不被水解，也不被细菌