高效液相色谱法测定注射用亚胺培南西司他丁钠含量.doc

高效液相色谱法测定注射用亚胺培南西司他丁钠含量刘刚1，周倩怡2，李进利1，兰青1，姜韧1，张华1，谭生建1*（1.中国人民解放军第306医院 药学部 北京 100101； 2.佳木斯大学化学与药学院 佳木斯 154000） 摘要 ： 目的 建立正相高效液相色谱法测定注射用亚胺培南西司他丁钠的含量。方法 色谱柱用氰基柱（250 mm 4.6 mm ，5 m），柱温30，流动相为乙腈0.1%磷酸（50 ：50)，流速1mL/min，检测波长265 nm。结果 亚胺培南和西司他丁钠的理论板数分别约为9000和9500，与相邻峰的分离度均大于1.5。以峰面积（X）对进样浓度（Y，g/mL）线性回归，亚胺培南的回归方程：Y=0.6386X+6.173，r为0.9999，线性范围117.1585.5 g/mL；西司他丁钠的回归方程：Y=0.5886X+6.294，r为0.9999，线性范围117.1585.3 g/mL。亚胺培南和西司他丁钠的回收率（RSD）分别为98.8%（1.7%）和99.2%（1.1%）。结论 本方法精密度和准确度好，操作简便，可用于测定注射用亚胺培南西司他丁钠中亚胺培南和西司他丁钠的含量。 关键词：高效液相色谱法；亚胺培南；西司他丁钠 中图分类号：R927.1 文献标识码：A 文章编号：2008- Determination of Imipenem and Cilastin for Injection Sodium by HPLCLIU Gang,ZHOU Qian-yi ，LI Jin-li ,LAN Qing, JIANG Ren，ZHANG Hua ,TAN Sheng-jian*（department of Pharmacy， Hospital 306 of PLA，Beijing 100101 China ，college of Chemistry and Pharmacy, Jiamusi university, Jiamusi 154000 China ） ABSTRACT: OBJECTIVE To establish an HPLC quantitative method for the determination of Imipenem and Cilastin Sodium for Injection . METHOD The chromatographic conditions include CN column(250 mm 4.6 mm，5 m) , temperature 30C, acetonitrile0.1% phosphoric acid(50:50) as mobile phase . The flow rate was 1ml/min and monitored at 265 nm. RESULTS The theoretical plate number of Imipenem is 9000, and that of Cilastin Sodium is 9500.The resolution is more than 1.5. The regress equation for Imipenem was Y=0.6386X+6.173 , r=0.9999 and the linear range was 117.1585.5g/mL;Cilastin Sodium Y=0.5886X+6.294, r=0.9999,and the linear range was 117.1585.3g/mL.The average recovery (RSD)of Imipenem , Cilastin Sodium were 98.8% (1.7%) and 99.2%(1.1%) respectively. CONCLUSIONS The method is precise, accurate, simple, and can be applied to determin the content of Imipenem and Cilastin Sodium for Injection. KEY WORDS: HPLC ; Imipenem; Cilastin Sodium注射用亚胺培南西司他丁钠由-内酰胺类抗生素亚胺培南和肾肽酶抑制剂西司他丁钠加碳酸氢钠为辅料混合而成，含量测定方法在USP29版1和国家食品药品监督管理局进口作者简介：刘刚，男，副主任药师 Tel: ( 010)66356187 E-mail: *通讯作者：谭生建，男，主任药师Tel: ( 010)66356172 E-mail: 药品注册标准2有收载，也有方法改进研究的文献报道3，4，5，都是采用反相高效液相色谱法，色谱条件如色谱柱、流动相组成、流动相pH值、检测波长等也相同，只是流速大小有所不同。迄今，注射用亚胺培南西司他丁钠的含量测定方法仍存在一些不足3，4，5，特别是亚胺培南保留时间短（一般保留时间约2.5 min ），与有关物质分离不够，使用单一水相做流动相，难以调整系统适用性是其主要的问题。本试验研究建立了正相高效液相色谱法测定注射用亚胺培南西司他丁钠的含量。 1.仪器与试药 1.1 仪器 高效液相色谱仪（安捷伦公司Agilent 1200系列）包括：G1311A 四元色谱泵，G1329A自动进样器，G1315B二极管阵列检测器，G2170BA色谱工作站，G1316A柱温箱和G1379B在线脱气机。 1.2试药与溶液制备1.2.1 试药 亚胺培南对照品（WS20071101-1，含量91.5%）、西司他丁钠对照品（20070601，含量94.4%）由深圳市海滨制药有限公司提供；乙腈（DIMA TECHNOLOGY INC ，LOT：61201）色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。注射用亚胺培南西司他丁钠（批号：07329、07339、07346）购自北京市医药公司。1.2.2 混合对照品溶液制备 分别精密称取亚胺培南和西司他丁钠对照品各约12.5 mg，置25mL量瓶中，用水20 mL溶解，加1% 碳酸氢钠溶液0.5 mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为亚胺培南和西司他丁钠混合对照品溶液。1.2.3 供试品溶液制备 取本品5瓶，倾出内容物，混合均匀，精密称取适量（约1.1 g,相当于1瓶的量），置100mL量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5 mL，置50mL量瓶中, 用水稀释至刻度,摇匀,即得。2.方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱为BIO-RAD Rosil CN (2504.6 mm，5 m)，柱温30C，以乙腈0.1%磷酸(50 :50)为流动相，流速:1 mL/min，进样量：10L，检测波长265 nm。2.2 系统适用性试验2.2.1 理论板数和分离度 在上述色谱条件下，取亚胺培南西司他丁钠混合对照品溶液，供试品溶液各10L，分别进样，记录色谱图(溶剂的色谱图为直线，略)，见图1。在图1中， 亚胺培南保留时间为11min,西司他丁钠保留时间为9min, 与相邻峰的分离度均大于1.5，理论板数分别约为9000和9500。 A-亚胺培南和西司他丁钠混合对照品溶液 B-注射用亚胺培南西司他丁钠供试品溶液 1- 西司他丁 2-亚胺培南图1 对照品和样品色谱图Fig1. HPLC Chromatogram of chemical reference substances and samples 2.2.2 重复性试验 取亚胺培南和西司他丁钠混合对照品溶液（每1mL分别含亚胺培南575.2 g和西司他丁钠552.4 g）重复进样5次，亚胺培南色谱峰面积分别为896.5、894.2、896.9、895.2和896.7，平均895.9，RSD 0.13%，西司他丁钠色谱峰面积分别为927.8、926.5、924.9、926.5和925.6，平均926.3，RSD 0.12% 。2.3 精密度试验 2.3.1重复性 取同一样品（批号07329），重复测定6次，亚胺培南含量（mg/瓶）测定结果分别是549.8 、548.9、547.0、546.2、546.0 和544.7 ,平均547.1，RSD 0.35%。西司他丁钠含量（mg/瓶）测定结果分别是554.9、554.6、553.9、552.5、554.5、554.3 ,平均554.1，RSD 0.16%。2.3.2日间精密度 取同一样品（批号07339），每日测定2次，重复测定3日，亚胺培南含量（mg/瓶）测定结果是553.3、553.1、540.9、535.2、547.2、552.9,平均547.1 RSD1.4%。西司他丁钠含量（mg/瓶）测定结果是554.4、555.6、 554.4、554.7、570.0、561.0, 平均558.4，RSD1.1%。2.4 线性关系 分别精密量取亚胺培南和西司他丁钠混合对照品溶液（每1 mL含亚胺培南和西司他丁钠分别为585.5g和585.3g）适量，用水稀释成每1mL分别含亚胺培南117.1、234.2、351.3、468.4和585.5g，含西司他丁钠117.1、234.1、351.2、468.2、和585.3 g的溶液，各精密量取10L进样，记录色谱峰面积，亚胺培南峰面积分别为177.7、356.4、536.2、718.7和913.1，西司他丁钠峰面积分别为188.4、388.0、582.6、787.8和982.8。以进样浓度（Y，g/mL）对峰面积（X）线性回归，亚胺培南回归方程：Y=0.6386X+6.173，线性范围117.1585.5g/mL，西司他丁钠回归方程：Y=0.5886X+6.294，线性范围117.1585.3g/mL，r均为0.9999。2.5 定量限和检测限 取对照品溶液，用水稀释至峰高约为基线噪音的10倍进样，测得亚胺培南和西司他丁钠的定量限均为0.04g。取对照品溶液，用水稀释至峰高约为基线噪音的3倍进样，测得亚胺培南和西司他丁钠的定量限均为0.01g。2.6 加样回收率 取已知含量的样品9份，每1份含亚胺培南和西司丁钠各约12.5mg，置50ml量瓶中，分为3组，每1组3份。第1组分别加入混合对照品溶液（每1mL分别含亚胺培南1.009 mg，含西司他丁钠0.9892 mg）10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，测定；第2组分别加入混合对照品溶液（每1mL分别含亚胺培南1.249 mg，含西司他丁钠1.252 mg）10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，测定；第3组分别加入混合对照品溶液（每1mL分别含亚胺培南1.496 mg，含西司他丁钠1.512 mg）10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，测定。亚胺培南平均回收率（n=9）为98.8%，RSD1.7%；西司他丁钠回收率（n=9）为99.2%，RSD 为1.1 %，回收率测定结果见表1表1加样回收率测定结果Tab. 1 Average recovery of Imipnem and Cilastatin样品样品量(mg)加入量(mg)测得量(mg)回收率%平均回收率%RSD%亚胺培南12.5210.0922.642100.3 98.81.712.4310.0922.38598.712.3610.0922.29998.512.4212.4925.178102.112.3812.4924.66598.412.6712.4924.90598.012.4414.9627.25899.112.3714.9626.969897.612.2514.9626.65296.3西司他丁12.629.89222.574100.639.89222.40199.812.469.89222.17898.212.5212.5225.078100.312.4812.5225.007100.112.7712.5224.98097.512.5415.1227.54799.312.4715.1227.41098.812.3515.1227.14897.92.7 供试品溶液稳定性 配制供试品溶液，置自动进样器中，4h内重复进样11次，亚胺培南和西司他丁钠峰面积的RSD%分别为1.20和0.26，显示供试品溶液在4h 内稳定。2.8含量测定 按照上述方法制备亚胺培南和西司他丁钠的混合对照品溶液及注射用亚胺培南西司他丁钠的供试品溶液，分别取混合对照品溶液和供试品溶液10L进样测定，外标法以峰面积计算测定3批样品；按照USP29含量测定方法测定相同的3批样品，结果见表2。表2 含量测定结果Tab. 2 Results of sample determination样品批号亚胺培南西司他丁钠本法USP29法本法/ USP本法USP29法本法/ USP07329109.1110.398.9%109.8109.1100.6%07339108.6109.399.4%108.2109.199.2%07346106.3107.199.3%110.6110.4100.2% 3 讨论3.1文献 6 报道注射用亚胺培南西司他丁钠的溶液稳定性差。混合对照品溶液制备中加1% 碳酸氢钠溶液0.5mL，可加速