增液润燥汤对干燥综合征模型鼠IL-23表达的影响.docx

增液润燥汤对干燥综合征模型鼠IL-23表达的影响摘要：目的 研究增液润燥汤对SS模型鼠颌下腺IL-23的影响，探究本方治疗SS的机制。方法 60只BALb/c小鼠，随机法均分为：正常组，模型组，本方低、中、高组，西药组；免疫诱导法制备SS模型；ELISA法检测IL-23水平。结果 模型组IL-23比正常组显著升高；各治疗组IL-23比模型组降低，差别均有统计学意义（P0.05）。结论 本方能降低SS模型鼠颌下腺IL-23水平，通过降低IL-23水平，抑制病灶炎症反应，减轻唾液分泌腺损伤。关键词：SS；增液润燥汤；颌下腺； IL-23干燥综合征（Sjgrens syndrome, SS）是一种主要侵犯唾液腺等外分泌腺的自身免疫性疾病，严重影响着人民的生活质量和身心健康。文献研究表明，IL-23在SS发生发展过程中起重要作用，故选用IL-23作为检测指标初步探究增液润燥汤治疗SS的作用机制。一、材料及设备1.实验动物：SPF级BALb/c雌性小鼠60只，体重18-20g，购自河南省实验动物中心，许可证号：SCXK(豫)2010-0002。2.药品：增液润燥汤：北沙参15g、天冬15g、炙紫菀10g、知母10g、乌梅10g、桔梗15g、桃仁10g、制附子6g、炙甘草6g，购于河南中医学院第一附属医院门诊颗粒药房（四川新绿色药业有限公司）；白芍总苷胶囊，宁波立华制药有限公司，国药准字H200550058；百白破疫苗，武汉生物制品研究所有限责任公司，国药准字S19980016。3.主要仪器：5722分光光度计：北京普析新通用仪器有限责任公司，型号：TU-1901；冷冻离心机：美国Kendro实验室产品公司。二、方法及步骤1. 制备抗原溶液：取同种鼠颌下腺, 剔除淋巴结，切碎,加入RIPA裂解液、PMSF，充分匀浆,10000-14000g转速、4条件下匀速离心5min，取上清液，以考马斯亮蓝比色法测定抗原含量。用灭菌PBS将上清液稀释成800ug/mL，加等量CFA，得到400ug/mL的抗原溶液。2.造模及检测指标：第0、14天，除正常组外的小鼠每侧腹股沟消毒后皮下注射0.05mL抗原。在第2、7天，以上各组小鼠各腹腔注射0.05mL白百破联合疫苗，加强免疫。以颌下腺病理炎性浸润为检测指标。3.步骤：60只BALb/c小鼠，随机法平均分组如下：正常组：去离子水；模型组：去离子水；增液润燥汤低剂量组（ZYRZI）：0.04g/10g；增液润燥汤中剂量组（ZYRZII）：0.08g/10g；增液润燥汤高剂量组（ZYRZIII）：0.12g/10g；白芍组（BSZG）：0.00234g/10g。注：灌胃体积：0.2ml/（10g日只）；免疫当天开始给药，直至第60天，第61天摘眼球放血法处死小鼠，进行相关处理。4. IL-23测定：无菌操作台上取两侧颌下腺，称重并记录，冰浴中电动匀浆约1min，4、3000rpm下离心20min,取上清液,按照ELISA试剂盒说明书进行检测,以标准物浓度为横坐标，OD值为纵坐标得标准曲线，计算实际样品浓度。 5.以SPSS19.0进行统计学分析，计量资料均采用（S）表示，所得数据均符合正态分布及方差齐性检验,组间多重比较采用单因素方差分析和LSD检验,以P0.05有统计学意义。三、结果：与正常组比较，模型组IL-23显著升高，差别有统计学意义（P0.05）；各治疗组IL-23比模型组降低，差别有统计学意义（P0.05）；与白芍组比较，本方中、高剂量组IL-23水平较低，差别有统计学意义（P0.05）（表1）。表1 各组小鼠颌下腺上清液IL-23水平（S）组别正常组模型组ZYRZZYRZZYRZBSZGIL-23(pg/ml)177.6739.22294.2648.42a223.5031.41b201.2744.26bc191.0423.74bc243.2130.01b注：与正常组比较， aP0.05；与模型组比较，bP0.05；与白芍组比较，cP0.05四、结论及讨论文献研究表明，IL-23能够诱导Th1细胞分化和IFN-的产生，是促进Th17细胞增殖分化的重要细胞因子1。而Th1、Th17细胞及相关细胞因子IL-17、IFN-在SS发生发展及唾液腺损伤过程中起重要作用。目前认为随着SS患者唾液腺浸润情况加重，Th1样细胞因子逐渐占据主导地位。而IL-17作为Th17的主要炎性因子，参与唾液腺局部炎症反应，与其它相关炎性因子如IL-6协同作用，形成炎症反应正反馈，加重腺体损伤。如朱建东、王笑颜2,3等对比发现伴腮腺肿痛的SS患者IL-17水平明显高于无腮腺肿痛者(P0.05)，且IL-17水平与IgG、ESR呈明显的正相关(r=0.651, r=0.714,P0.05)；Nguyen CQ等4通过动物实验发现IL-17随SS病程进展进一步增高。IFN-是与SS相关研究最为广泛的细胞因子之一，普遍认为SS的发生发展与IFN-高表达相关。曹建平、Kulkarni等研究表明IFN-可进一步加剧SS的病理过程5。 本实验结果显示增液润燥汤能降低IL-23的表达，中、高剂量组较低剂量组明显。通过降低IL-23的表达，影响Th1、Th17细胞及相关细胞因子IL-17、IFN-等的表达，抑制唾液腺炎症反应，可能是增液润燥汤治疗SS的机制之一。干燥综合征属中医“燥证”范畴，周全教授认为，其主要发病机制为津液的生成不足和输布失常，当责之于脾胃、肺及经络。津液来源于水谷，故津液的生成离不开胃；水液入胃，必经脾的运化才化为津液，通过脾的升清才输于肺；肺气宣发，才能使津液输布于肌表；肺气肃降，才能使津液输布于内脏；经络是津液输布全身的通道，同时津液又是血液的重要组成部分，津枯则血燥，致使血脉瘀阻，津液输布异常。故