国产与进口盐酸多奈哌齐片在健康人体的生物等效性_陆益红.pdf

Chin J Clin Pharmacol 201 Vol 26 No 3 March 2010 Serial No 125 生物等效性研究 Bioequivalence Study国产与进口盐酸多奈哌齐片在健康人体的生物 等效性 Bioequivalence of domestic and imported donepezil hydrochloride tablets in healthy volunteers 收稿日期 2009 05 12 修回日期 2009 00 00 作者简介 陆益红 1966 女 博士 主任药 师 主要从事药物分析和药理学研究 通讯作者 张正行 教授 博士生导师 T e l 025 83300481 E mai l zzx888 jlonline com 陆益红 1 文红梅2 李 伟2 池玉梅 2 张银娣3 沈建平3 张正行 4 1 江苏省食品药品检验所 南京 210008 2 南京中医药大学 南京 210029 3 南京医科大 学 南京 210029 4 中国 药科大学 南京 210009 LU Yi hong 1 WEN Hong mei2 LIW ei 2 CH IYu mei2 ZHANG Yin di 3 S HEN Jian ping 3 ZHANG Zheng xing 4 1 Jiangsu InstituteforFood andDrug Control Nanjing210008 China 2 NanjingUniversityof T raditional Medicine Nanjing 210029 China 3 Nanjing Medical University Nanjing 210029 China 4 China Pharmaceu tical University Nanjing 210009 Chi na 摘要 目的 研究国产与进口盐酸多奈哌齐片在健康人体的生物等效性 方法 20名男性健康志愿者随机交叉给药 分别单剂量口服国产 受试制剂 与进口 盐酸多奈哌齐片 参比制剂 用高效液相飞行时间质谱 HPLC TOF MS 联用 技术 测定人血浆中多奈哌齐的浓度 计算 2者的药代动力学参数及相对生物利 用度 并评价 2制剂的生物等效性 结果 口服国产及进口盐酸多奈哌齐片 5 mg的主要药代动力学参数 t1 2分别为 62 56 9 76 65 70 12 80 h tm ax分 别为 3 15 0 67 3 10 0 55 h Cmax分别为 10 42 2 52 10 06 2 02 ng mL 1 AUC0 192分别为 489 37 154 32 484 76 150 13 ng h mL 1 AUC0 分别为 566 52 193 84 564 38 176 10 ng h mL 1 用 AUC0 192 AUC0 估算多奈哌 齐供试片的 相对生物利用 度分别为 100 7 9 2 99 2 11 9 结论 2种盐酸多奈哌齐片为生物等效制剂 关键词 盐酸多奈哌齐片 药代动力学 生物等效性 高效液相飞行时间质谱 中图分类号 R977 9 R969 1 文献标识码 A 文章编号 1001 6821 2010 03 0201 04 Abstract Objective To study the bioequivalence of domestic and i m ported donepezil hydrochloride tablets in healthy volunteers M ethods Twenty healthy males volunteerswere orally adm inisteredw ith a random ized and single crossover dose of dom estic and i mported donepezil hydro chloride tablets 5 mg The plasma concentration of donepezil was deter m ined by high pressure liquid chromatography ti m e of flight mass spectrometry The phar m acokinetic parameters and relative bioavalibility were calculated to evaluate the bioequivalence of two preparations Re sults Themain phar macokinetic para meters of test domestic and refer ence i mported sa mple were as follows t1 2were 62 56 9 76 h and 65 70 12 80 h tmaxwere 3 15 0 67 h and 3 10 0 55 h Cmax were 10 42 2 52 ng mL 1 and 10 06 2 02 ng mL 1 AUC 0 192 were 489 37 154 32 ng h mL 1 and 484 76 150 13 ng h mL 1 AUC 0 were 566 52 193 84 ng h mL 1 and 564 38 176 10 ng h mL 1 Themean bioavalibility values of AUC 0 192and AUC0 were 100 7 9 2 and 99 2 11 9 Conclusion The two kinds of donepezil hydrochloride tabletswere bioequivalent Key words donepezil hydrochloride tablets phar macokinetics bio equivalence high pressure liquid chromatography ti me of flight mass spectrometry 202 中 国 临 床 药 理 学 杂 志 第 26卷 第 3期 2010年 3月 总第 125期 多奈哌齐 donepezil 为新一代中枢乙酰胆碱酯 酶抑制剂 因其半衰期长 副作用小 是治疗早 中期 阿尔茨海默氏症的有效药物 1 3 本文利用本实验 室已建立的高效液相飞行时间质谱方法 4 进行血药 浓度的测定 并评价国产 受试制剂 与进口 参比制 剂 盐酸多奈哌齐片的生物等效性 为临床用药提供 理论指导 材料 对象与方法 1 药品 试剂与仪器 受试制剂 盐酸多奈哌齐片 规格 每片 5 mg 批 号 0001181 盐酸多奈哌齐对照品 含量 99 8 均 为江苏豪森制药有限公司生产 参比制剂 盐酸多奈 哌齐片 商品名 安理申 规格 每片 5 mg 批号 44320 英国 Boots公司生产 卫材 苏州 制药有限公 司分装 提供 内标 氯雷他定 含量 99 8 批号 000426 北京正青星光生物医学科技有限公司生产 甲醇 色谱纯 江苏汉邦科技有限公司生产 提供 冰 醋酸 醋酸铵 三乙胺 正己烷 氢氧化钠 均为分析 纯 空白人血浆由南京市红十字血液中心提供 实验 用水为重蒸水 2690高效液相色谱仪 含四元高压泵 在线真空 脱气机 恒温自动进样器 柱温箱 美国 W aters公司产 品 M ariner TM 5140质谱仪 美国 Applied Biosyste m 公 司产品 2 受试者选择 20名受试 者均为健康 男性 年龄为 21 0 0 97 岁 身高为 171 2 5 2 c m 体质量为 62 25 4 36 kg 试验前 所有受试者均经体检证实 无胃 肠道疾病 心 肝 肾功能正常 无药物过敏史 受试 者均于试验前 2周停服一切药品 受试期间禁烟 酒 均签署知情同意书 3 给药方案与血样采集 用标准 2阶段交叉设计自身对照试验法 试验方 案经南京医科大学第一附属医院国家药品临床研究 基地伦理委员会审核通过 20例受试者完全随机分成 2组 10人服用受试 制剂 另 10人服用参比制剂 剂量均为单剂量口服 5 mg 经 4周清洗期后 2组交换服药品种 进行第 2阶 段试验 受试者禁食 12 h后 清晨 7 00空腹用温开水 200mL送服药物 服药后 3 h进统一食谱的标准餐 受试者于服药前 服药后 0 5 1 0 2 0 3 0 4 0 6 0 8 0 12 0 24 0 48 0 96 0 144 0 192 0 h依次 采上肢静脉血约 4 mL 血样置肝素抗凝管内 经离心 后分离血浆 置 20 保存待测 4 样品测定方法 4 1 测定条件 色谱条件 色谱柱 Kromasil KR 100 5 C18 4 6 mm 250 mm 5 m 预柱 W aters C18 4 6 mm 10 mm 5 m 流动相 甲醇 醋酸盐缓冲液 含 0 1 醋酸铵 0 1 冰醋酸 0 01 三乙胺的水溶液 p H 4 0 为 80 20 流量 0 8mL m in 1 柱温 40 质谱条件 离子极性 正离子 positive 离子化方 式 电喷雾离子化 ESI 检测离子 多奈哌齐 M H m z 380 氯雷他定 M H m z 383 喷嘴电 压 5 500 V 喷管电压 180 V 检测器电压 2 000 V 四极杆温度 100 喷管温度 155 4 4 2 血浆样品的处理 吸取血浆 1 0 mL置 10 mL 具塞离心管中 精 密加入内标 1 5 g mL 1氯雷他定溶液 20 L 0 1 mol L 1NaOH 0 2 mL 涡旋 10 s 加入异丙醇 正己烷 3 97 5 0 mL 涡旋 3 m in 于 3 500 r m in 1离心 10 m in 吸取有机相 4 0 mL 在 40 水浴中用氮气吹干 残留物连同离心管冷藏于冰 箱 待分析 测试时 残渣加甲醇 200 L溶解 进 样 40 L 4 3 标准曲线的制备 分别精密吸取盐酸多奈哌齐对照品溶液适量 于 8个具塞离心管中 各加入空白血浆 1 0 mL 配制盐 酸多奈哌齐浓度分别为 0 1 0 2 0 5 1 0 2 0 5 0 10 0和 15 0 ng mL 1的血浆样本 按 血浆样品处 理 项下操作 每种浓度做 5份样品 记录峰面积 以 多奈哌齐峰面积 As 与内标峰面积 Ai 的比值 As Ai 对质量浓度 c ng mL 1 进行线性回归 得回归 方程 As Ai 1 37 10 2 0 10c 0 9998 根据 标准曲线 多奈哌齐的线性范围为 0 1 15 0 ng mL 1 最低定量质量浓度为 0 1 ng mL 1 4 4 方法的专属性 在上述色谱条件下 测得服药前空白血浆及服药 后血浆样品的典型色谱 见图 1 由图 1可见 多奈哌 齐与内标物氯雷他定的保留时间分别约为 4 12m in 空白血浆中的内源性物质不干扰多奈哌齐血药浓度 的分析 4 5 回收率和精密度 配制低 中 高 3种不同质量浓度 0 2 2 0 10 0 ng mL 1 的血浆样本各 5份 按 血浆样品的处理 Chin J Clin Pharmacol 203 Vol 26 No 3 March 2010 Serial No 125 图 1 血浆样品色谱图 Figure 1 HPLC chromatogra ms of donepezil A Blank plasma B V olumteer plasma after oral adminstration of donepezi l 1 Donepezil tR 4 2 m in 2 Loratadin tR 12 0m in 项下操作 测定多奈哌齐和内标的峰面积由标准曲线 测得实测量 以实测量与加入量之比计算方法回收率 并计算日内精密度和日间精密度 配制低 中 高 3种不同质量浓度 0 2 2 0 10 0 ng mL 1 的血浆样本各 5份 按 血浆样品处理 项 下操作 记录样品峰面积 另配制相应浓度的盐酸多 奈哌齐对照品溶液 直接进样相同量作为标准 比较 2 组峰面积 计算多奈哌齐的提取回收率 结果见表 1 4 6 稳定性考察 配制一定量的含药血浆及含药和内标的血浆样 品 分别经冷冻 20 冷藏 4 反复冻融 图 2 多奈哌齐 A 和内标氯雷他定 B 的质谱图 Figure 2 M ass spectrum of donepezil m z 380 18 A and loratadin IS m z 383 11 B 2次考察 均稳定 血样处理吹干后 冷藏放置 3天内 稳定 甲醇复溶后溶液澄清 5 数据处理和统计 通过标准曲线 计算每一点的血药浓度 用 Excel 进行汇总 选择非房室模型 用 3P97程序计算药动学 参数 生物等效性判断 对不同周期数据进行方差分析 和双单侧 t检验和 90 置信区间计算 按照中国药典 收载的生物等效性判断标准评价 表 1 多奈哌齐在人血浆中的精密度与回收率 Table 1 Precision and recovery of donepezil in human plasma Concentration ng mL 1 W ithin day ng mL 1 RSD Between day ng mL 1 RSD Relative recovery Extraction recovery 0 20 19 0 0210 520 20 0 0211 2294 27 9 86101 59 3 91 2 02 04 0 073 232 00 0 062 97102 03 3 3097 27 4 48 10 010 18 0 302 9210 49 0 504 81101 57 2 9796 77 4 02 n 5 mean SD 结 果 1 平均血药浓度 时间曲线 20名健康受试者口服盐酸多奈哌齐片受试制剂 和参比制剂后 所得平均血药浓度 时间曲线见图 3 由图 3可知 受试制剂与参比制剂的 Cmax和 tm ax相似 表明其吸收速率相似 参比制剂与受试制剂在体内的 消除过程相似 2 药代动力学参数 20名健康受试者单次口服盐酸多奈哌齐受试 和参比制剂 5 m g后 主要药代动力学参数见表 2 受试 制 剂 相 对 于 参 比 制 剂 的 生 物 利 用 度 为 99 2 11 9 3 生物等效性评价 所得药代动力学参数 经方差统计分析 结果表 明 受试制剂与参比制剂比较均无显著性差异 P 0 05 经 生 物 等 效 性 评 价 药 代 动 力 学 参 数 lnAUC0 192 lnAUC0 lnCmax tmax 的 90 可信区间都 在规定范围内 分别为 97 1 104 5 94 5 105 2 97 2 108 1 92 1 111 2 表明受 试制剂和参比制剂生物等效 204 中 国 临 床 药 理 学 杂 志 第 26卷 第 3期 2010年 3月 总第 125期 图 3 20名健康受试者口服盐酸多奈哌齐受试制剂 国 产 和参比制剂 进口 5mg后的平均血药浓度 时间曲线 Figure 3 M ean plasma concentration ti me curve of donepezil after a single oral dose 5 mg of test do mestic and reference i mported donepezil hydrochloride tablets in 20 healthy volun teers 表 2 单剂量口服盐酸多奈哌齐受试制剂 国产 与参比制剂 进口 后的主要药代动力学参数 Table 2 M ain phar macokinetic parameters of donepezil in 20 vo l unteers after a single oraldose 5mg of test do mestic and re f erence i mported donepezil hydrochloride tablets ParameterT estReference t1 2 h 62 56 9 7665 70 12 80 tm ax h 3 15 0 673 10 0 55 Cm ax ng mL 1 10 42 2 5210 06 2 02 AUC0 192 ng h mL 1 489 37 154 32484 76 150 13 AUC0 ng h mL 1 566 52 193 84564 38 176 10 F0 192 100 7 9 2 F0 99 2 11 9 n 20 mean SD 讨 论 由于多奈哌齐的口服剂量很小 所以体内血药浓 度很低 5 7 人口服 盐酸多奈哌齐片 2 mg后 峰浓度 仅为 3 0 4 0 ng mL 1 有关盐酸多奈哌齐人体血 药浓度测定方法有 HPLC法 7 和 HPLC MS法 8 这 些方法有的灵敏度尚不能完全满足生物利用度的检 测 有的提取方法操作繁琐 由于多奈哌齐为非极性 化合物 本文采用血浆经 0 1 mol L 1NaOH 碱化后 分别用醋酸乙酯 二氯甲烷 异丙醇 正己烷 3 97 异丙醇 醋酸乙酯 3 97 5 mL提取 结果表明 碱化 血浆后 再用异丙醇 正己烷 3 97 提取后 杂质少 基线噪音低 回收率高 并加入异丙醇避免乳化 本实验采用 HPLC与高分辨飞行时间质谱联用 进行多奈哌齐血药浓度的测定 专属性好和灵敏度 高 多奈哌齐的最低定量浓度可达 0 1 ng mL 1 满 足了盐酸多奈哌齐的人体药代动力学及生物等效性 的研究 本研究的结果与文献报道 8 基本一致 本研究测定了 20名健康受试者自身交叉口服盐 酸多奈哌齐受试制剂和参比制剂 5 mg后的血药浓 度 结果显示 2种盐酸多奈哌齐片的体内过程接近 所得主要药代动力学参数基本一致 所得 2种盐酸 多奈哌齐片的主要药代动力学参数经方差分析 显示 2者无显著性差异 P 0 05 经生物等效性评价 表 明受试制剂与参比制剂在体内的吸收 分布 消除过 程相似 2种制剂生物等效 参考文献 1 M iharaM OhnishiA Tomono Y et al Phar macokinetics ofE2020 a new compound for A lzhei mer s disease in hea lthy male volunteers J Int J ClinPhar macolTherT oxicol 1993 31 223 229 2 Rho JP L ipson LG Focus on donepezil A reversible acetylcholines t erase inhibitor for the treat ment ofA lz