LC-20ATvp高效液相色谱仪验证方案.doc

LC-20A高效液相色谱仪验证方案 1.主题内容与适用范围本方案规定了LC-20A高效液相色谱仪验证的内容、过程和方法。本方案适用于LC-20A高效液相色谱仪验证。2.相关文件岛津LC-20A高效液相色谱仪使用说明书中国药典 2010年版二部药品检验仪器操作规程 2010年版岛津LC-20A高效液相色谱仪的操作及维护保养SOP 编号：EMO-R353.验证目的 为确认LC-20A高效液相色谱仪能够达到仪器性能指标，能符合检验产品需求，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。4.职责验证小组成员工作内容组长解斌负责验证的实施、组织及协调工作成员熊仁清负责按验证计划组织实施验证工作熊仁清负责验证方案、验证报告编写及实施工作熊仁清负责验证的实施及不符合项目的整改工作动力设备部负责验证中涉及计量器具的校验工作质量管理部负责验证质量检验项目的检验、出具报告工作5.验证内容与方法5.1.预确认5.1.1.设备基本情况本仪器由日本岛津公司生产，由2台LC-20AT泵、1台SPD-20A检测器、1台CBM-20A控制器,1台CTO-10ASvp柱温箱，岛津LC solution双通道色谱工作站组成。主要用于各种进厂原料、成品药的含量测定及新方法的开发及其验证。设备名称：高效液相色谱仪型号：LC-20A生产厂家：日本岛津公司安装日期：2008.4使用部门：研究开发中心5.1.2.安装确认项目要求：充分通风，附近无火源（当使用易燃或有毒的溶剂作为流动相时，房间应充分通风；当使用易燃溶液时，严禁室内使用明火或其它火源）；安装场所环境温度4-35，日温度变化要小（不超过2）；湿度保持在4585%，无灰尘及腐蚀性气体；没有阳光直射、远离强磁场及振源、安有空调；电源功率22010V，50HZ；供电电源应有良好的接地；线路连接各接口连接正确；管线连接各接口连接正确。5.2.硬件认证硬件认证检查LC系统是否运转正常，仪器是否适用于准备进行的分析，在LC安装、操作和性能鉴定过中进行认证，此后还要定期检查，随着时间的推移，由于易损部件的磨损，LC系统的性能会下降。因此，从系统安装时起直到系统报废时止，必须定期进行硬件认证。5.2.1.柱温箱温度准确度检查检查温度是否控制在设定的温度，特别是，测量柱箱内部热传感器附近的温度，并与设定温度相比较。在没有特殊要求下，设定温度使用50。5.2.1.1.设备连接：使用热电偶固定架将热传感器（热电偶）固定在柱箱内，将热传感器（热电偶）的导线连接到数字万用表的输入端。5.2.1.2.检查过程：打开电源开关，显示初始屏幕，按func键，屏幕显示SET TEMP,使用/键设定温度为50，按oven键，启动温度控制，当ready指示灯亮后，等待10min,运行TEMPERAGURE TEST。可以接收的标准（温度控制精度为Dt0.2(设定温度为50)）。为了检查温度，输入由数字万用表测量的温度，观察显示结果，屏幕如显示“ACCURACY GOOD”表示结果满足要求。如果显示结果不满足要求，需要进行纠正设定温度错误，具体操作如下：重复按VP键直至屏幕显示CALIBRATION（校正功能VP组）；重复按func键直至屏幕显示TEMPCAL-IB（此为校正设定温度）；输入作为校正温度的T值，该值显示在上述温度准确度检查过程中运行TEMPRATURE TEST功能后所显示的屏幕上；重复按func键直至屏幕显示REF.TEMP CALIB（用于设定温度校正参数）；使用/键设定一温度数值作为校正参数，该值是用热传感器测量的数值，按键以0.1步长升高校正值，按键以0.1步长降低校正值；按Enter键确认新的设定值，当电源关闭后，此值保留在内存中。5.2.2.柱温箱漏液传感器的功能检查打开电源ON，屏幕显示初始屏幕，运行LEAK SENSOR TEST功能，如果屏幕显示SENSOR GOOD，传感器通过测试。可接受的标准为屏幕必须显示“SENSOR GOOD”。5.2.3.泵的检查5.2.3.1.ROM、RAM自检：检查内存功能是否正常。检查步骤：打开电源开关。按VP四次以显示VALIDATION，按func三次以显示MEMORY CHECK，按enter,检查内存MEMORY CHECK。检查评判标准：屏幕显示ROM OK/RAM OK。5.2.3.2.固件版本检查：检查固件的版本。检查步骤：从初始屏幕按VP两次，出现PRODUCT INFO；按func两次显示版本号，显示软件版本号S/W ID P.5-32。检查评判标准：出现版本号。版式本号与所管理的号码相同。5.2.3.3.显示、LED测试：检查显示和LED的操作。操作步骤：打开电源开关，检查打开电源后屏幕上的所有点和键盘上的LED都亮。检查评判标准：屏幕上的所有点和LED都亮。5.2.3.4.流速的控制参数：检查控制流速的参数。检查步骤：从初始屏幕按VP五次，出现CALIBRATION，按func一次以显示Input PASSWORD，输入00000并按enter，输入密码后出现FLOW COMP FACT，记下FLOW COMP FACT（ALPHA）R的显示值，设定流速补偿参数（ALPHA）；按func一次，记下显示的两个PRESS COMP FACT值（1：PRS-1和5：PRS-5），设定压力传感器灵敏度补偿因子（PRESS COMP FACT）。检查评判标准：出现参数。5.2.3.5.送液稳定性测试：检查压力波动幅度没有超出额定值。检查步骤：将电阻管连接到泵出样口，而不是HPLC色谱柱；在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相；重复按func直到出现PARAMETER并按enter；重复按func或back直到出现COMP，记下当前值。按0.45enter 将值设定为0.45。按CE两次返回初始屏幕，按VP四次以显示VALIDATION，按func四次以显示PULSE CHECK，按0.3enter将CRITERIA设定为0.30MPa，按enter，泵以1ml/min的速度运行，测定在一分钟后开始。在测量过程中，显示设定流速、测量压力、压力波动和剩余时间。测量后，显示压力波动幅度的测量值和通过/失败状态。检查脉动PULSE CHECK，按enter，测量结果和日期保存在仪态器的内存中。检查评判标准：压力波动幅度的测量结果不超过0.30MPa。检查后重设：重复按func直到出现PAEAMETER并按enter，重复按func或back直到出现COMP。记下当前值，改回检查的第4步中记录的值。5.2.3.6.压力限制器测试：检查压力限制器在压力上限或压力下限时是否操作正常。检查步骤：将电阻管连接到泵出样口，而不是HPLC色谱柱。在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相，打开电源开关，出现初始屏幕，按func激活流速的设定。按1和enter将流速设定为1ml/min，按func两次以激活P.MAX的输入。按20和enter将P.MAX设定为20.0MPa。按func三次以激活P.MAX的输入，按0和enter将P.MIN设定为0.0MPa。按pump开始送液1分钟。泵指示灯将在送液时亮，这时，屏幕上既不应出现ERROR P-MAX，也不应出现ERROR P-MIN。观察屏幕确认它们都没有出现；在送液时按如下所述更改P.MAX和P.MIN：P.MAX=实际压力+1.0MPa, P.MIN=实际压力-1.0MPa,例如，当实际压力值是10.0MPa时，将P.MAX设定为11.0MPa, P.MIN为9.0MPa。将流速更改为1.5ml/min并观察压力，当实际压力超过所设定的P.MAX值时，应该出现ERROR P-MAX；按CE清除ERROR P-MAX，将流速重设为1ml/min，并再次按下pump重新开始送液，当压力稳定后，将流速更改为0.5ml/min。实际压力应该下跌至低于所设定的P.MIN值，并在几秒钟后出现ERROR P-MIN。按CE清除ERROR P-MIN。检查评判标准：出现ERROR P-MAX和ERROR P-MIN。5.2.3.7.漏液传感器测试：检查漏液传感器的操作。检查步骤：从初始屏幕按VP四次，出VALIDATION，按back一次以显示LEAK SENSOR TEST，检查漏液传感器LEAK SENSOR TEST，用充满水的注射器弄湿漏液传感器底部的湿度传感器，约10秒钟左右，按enter显示测试结果。检查评判标准：屏幕上出现SENSOR GOOD。（注意：在弄湿漏液传感器后，清完全擦干漏液托盘上的水。5.2.3.8.流速准确度测试：使用容量瓶检查流速准确度。检查步骤：将电阻管连接到泵出样口，而不是HPLC色谱柱。在贮液瓶中注入纯化水以替代流路中的流动相，在初始屏幕上按func以激活流速的设定，按1和enter将流速设定为1ml/min，重复按func直到出现PARAMETER并按enter，重得按func直到出现COMP，然后记录下当前的COMP值。按0.45和enter将COMP设定0.45。按pump送液至少5分钟。在送液过程中，泵指示灯亮；从初始屏幕按VP四次，出现VALIDATION，按func五次直到出现FLOW CHECK并按enter。在准备好进行测量时再按enter，将管路的末端插入容量瓶或量筒，然后开始测量。对于容量瓶：在第一滴水一开始现在进入容量瓶的管路末端就开始计时。在注入5ml水时停止计时表。对于量筒：使管路的末端进入量筒并接触筒壁，确定量筒内一个合适的水平面，在该位置达到确定的开始平面时开始计时，在注入5ml水时停止计时表。（注意：在整个测量过程中，务必使管路的末端保持在量筒的水面以上。）通过数字键盘输入已经测量的时间并按enter，显示流速准确度（%）和通过/失败状态。检查评判标准：2.00%以内。检查后重设：重复按func直到出现PARAMETER，然后按enter。重复按func或back直到出现COMP，改回第6步中记录的值。5.2.3.9.高压梯度系统的梯度浓度准确度测试：检查高压梯度系统的梯度浓度准确度。检查步骤：在混合器出样口（1.7ml）和检测器之间连接电阻管，对于流动相，准备纯化水作为流动相A，准备咖啡因溶液（10mg/L）作为流动相B（各500ml）。流动相脱气，打开排液阀并按泵A和B的purge以更换每个泵的流路，按如下所述设定送液条件，并按pump开始送液至检测器基线稳定。总流速=3ml/min,流动相B浓度=50%；按如下所述设定控制设备的参数，并送液至基线稳定：泵系统 送液模式 B.GE 流速 2.0ml/min 流动相B的浓度 0.0%UV检测器 波长 272nm RESPONSE 3(0.5sec) AUX RANGE 2(1.0AU/V)LCsolution时自动设定强度轴输入表中给出的时间程序，该程序将产生如右图所示的操作模式。使用了系统控制器或LC工作站，应从每个菜单都选择时间程序建立该程序。TIME FUNC VALUE5.00 B.CONC 0.05.01 B.CONC 10.010.00 B.CONC 10.010.01 B.CONC 50.015.00 B.CONC 50.015.01 B.CONC 90.020.00 B.CONC 90.020.01 B.CONC 100.025.00 B.CONC 100.025.01 B.CONC 0.030.00 STOP VP功能的GE TEST PROGRAM能够将时间程序自动复制到指定的文件。设定时时间程序以检查梯度模式的浓度准确度GE TEST PROGRAM。将基线归零，开始进行梯度时间程序。在下列浓度位置记录吸光度级别，并用该数据计算实际的浓度。（注意：在基线稳定时测定信号级别）计算方法： 10%的实际浓度=50%的实际浓度=90%的实际浓度=如果高压梯度系统使用3种液体，那么用流动相C（泵C）替换流动相B（泵B），并同样测试。检查评判标准：设定值的1.0%以内5.3.系统认证：LC系统由许多单独的组件组成，系统认证是为了确认每一组件的功能及整个系统的性能，在安装时进行系统认证，之后应该定期进行。5.3.1.等度LC系统认证：进行分析以获取每次峰的保留时间和峰面积。检查获取的数据以检查系统可重现性。可重现的数据用于认证系统。通常，接受认证的系统至少要包括泵、色谱柱柱温箱、进样器、检测器、系统控制器和数据处理机（或色谱工作站）。5.3.1.1.检查和准备LC系统5.3.1.1.1检查LC系统中的所有缆线连接是否正常。5.3.1.1.2.检查LC系统管路确保进样器出样口和色谱柱进样口，色谱柱出样口和检测器进样口，这间管路的I.D.小于0.3mm,并短于300mm，使色谱柱外的死体积尽可能小。5.3.1.1.3.使用下面一种方法清洗系统流路在清洗流路前，从系统中取下色谱柱，并使用二通连接色谱柱的进样口和出样口，对于新系统首先用异丙醇清流行流路，然后用水清洗，在每种情况下，使液体在流路中以2ml/min的流速流动10分钟。对于使用水溶液与有机溶剂的混合剂，或水与易溶于水的有机溶剂（如甲醇、乙腈）作为流动相系统用水清洗流路。使水以2ml/min的流速流动10分钟。5.3.1.1.4.清洗完成后，将流动相（水与甲醇的混合剂（3/2，V/V）注入贮液瓶，然后将色谱柱重新连接到LC系统。5.3.1.2.认证步骤5.3.1.2.1.将送液流速设定为1ml/min，色谱柱柱温箱的温度设定为40。5.3.1.2.2.按泵键盘上的pump和柱温箱键盘上的oven，开始送液和温度调节。5.3.1.2.3.设定检测器参数（272nm），进样器参数（进样体积），数据处理参数。5.3.1.2.4.监视基线，基线平稳后，按检测器zero键，然后注入20ul流动相并确认没有观察到峰。5.3.1.2.5.注入测试标准样（20mg/L的咖啡因溶液）6次，并分析获取的数据。使用手动进样器时，样品的进样量应为定量管体积的5倍。5.3.1.2.6.从6次分析得出峰数据中，计算出保留时间和峰面积和相对标准偏差RSD=其中：SD为标准偏差，X为平均值5.3.1.3.检查评判标准：保留时间的RSD绝不能超过0.5%；峰面积的RSD绝不能超过1.0%；峰高的RSD绝不能超过1.0%。5.3.2.认证梯度LC系统进行分析以获取每次峰的保留时间和峰面积。检查获取的数据以检查系统可重现性。可重现的数据用于认证系统。通常，接受认证的系统至少要包括泵、色谱柱柱温箱、进样器、检测器、系统控制器和数据处理机（或色谱工作站）。5.3.2.1.检查和准备LC系统5.3.2.1.1.检查LC系统中的所有缆线连接是否正常。5.3.2.1.2.检查LC系统管路确保进样器出样口和色谱柱进样口，色谱柱出样口和检测器进样口，这间管路的I.D.小于0.3mm,并短于300mm，使色谱柱外的死体积尽可能小。5.3.2.1.3.使用下面一种方法清洗系统流路。在清洗流路前，从系统中取下色谱柱，并使用二通连接色谱柱的进样口和出样口，对于新系统首先用异丙醇清流行流路，然后用水清洗，在每种情况下，使液体在流路中以2ml/min的流速流动10分钟。对于使用水溶液与有机溶剂的混合剂，或水与易溶于水的有机溶剂（如甲醇、乙腈）作为流动相系统用水清洗流路。使水以2ml/min的流速流动10分钟。5.3.2.1.4.清洗完成后，将流动相（A：水，B：乙腈）注入贮液瓶，然后将色谱柱重新连接到LC系统。5.3.2.2.认证步骤5.3.2.2.1将送液流速设定为1ml/min，流动相B的浓度参数设定为50%；色谱柱柱温箱的温度设定为40。梯度洗脱时间程序如下：TIME FUNC VALUE0.00 B.CONC 505.00 B.CONC 1006.00 B.CONC 1006.01 B.CONC 5012.00 STOP5.3.2.2.2.按泵键盘上的pump和柱温箱键盘上的oven，开始送液和温度调节，检查流经检测器出样品管路的液体流，确认所有连接处都没有漏液。5.3.2.2.3.设定检测器参数（254nm），进样器参数（进样体积），数据处理参数。5.3.2.2.4.监视基线，基线平稳后，按检测器zero键，然后注入20ul流动相并确认第二次没有观察到峰。5.3.2.2.5.注入测试标准样（含1mg/100ml的吡啶和1mg/100ml的蒽乙腈溶液）6次，并分析获取的数据。5.3.2.2.6.从6次分析得出峰数据中，计算出保留时间和峰面积和相对标准偏差RSD=其中：SD为标准偏差，X为平均值5.3.1.3.检查评判标准：保留时间的RSD绝不能超过0.5%；峰面积RSD绝不能超过1.0%；峰高的RSD绝不能超过1.0%。5.4.如果系统不能达到系统认证的标准，或某一硬件没能达到硬件认证标准，要进行如下处理：5.4.1.检查是否有达到其使用寿命的消耗件，如果必要，检查并且更换这些消耗件。5.4.2.排除故障可能是由于一些小问题如气泡导致系统不能达到认证标准，排除故障的目的就是检查这类故障，并且采取适当措施排除所发现的故障。3.如果不能确定原因民，请与岛津公司当地办事处或代理商联系。6.校正6.1.检测器的波长准确度度校正测量由水银灯和氘灯产生的发射谱线光谱中的峰波长，并对波长进行校正以将波长变动最小化。6.1.1.用泵传送水、甲醇或乙腈通过流通池，或用注射器和注射器适配器将三种液体之一注入流通池。确保流通池中没有气泡，然后再流通池装入检测器中。6.1.2.按CE直到显示初始屏幕，重复按VP直到显示CALIBRATION，按func出现密码输入屏幕，输入密码（00000），重复按func直到显示WAVE CALIB，按enter，波长准确度校正自动运行。6.1.3.校正结束后屏幕上出现Calibrated，确认校正已经成功完成。6.2.吸光度准确度校正校正吸光度准确度，以便最小化屏幕上显示的吸光度值（当存在测试的吸光度校正过滤器时）与过滤器的吸光度值之间的差异。6.2.1.重复按CE直到显示初始屏幕，设定仪器为单波长模式，按func，出现PARAMETER，重复按func直到显示LAMP，按1，这将打开氘灯。6.2.2.重复按CE直到显示CALIBRATION，按func，出现密码输入屏幕，输入密码（00000），重复按func直到显示ABS CALIB。6.2.3.ABS CALIB Set FIL HOLDER和ABS CALIB Enter to Calib将交替显示，取下标准流通池，将过滤器固定座安装到检测器上，并用盖盖住过滤器固定座。6.2.4.按enter，大约10秒后，ABS CALIB Insert Filter和ABS CALIB Input Clib Value将交替显示，插入吸光度校正过滤器并用盖盖住。6.2.5.输入245nm处的6nm带宽吸光度值0.*，该值印在吸光度过滤器附带的合格证明上，按enter，2分钟后Calibrating标识更改为Calibrated，校正完成。6.2.6.遵循以下步骤确认校正已经完成：从过滤器固定座下取下吸光度校正过滤器，并装上过滤器固定座盖，设定波长245nm,按CE两次返回初始屏幕，按zero,确保显屏幕上显示的吸光度是0；插入吸光度校正过滤器，然后装上盖子，记录初始屏幕上显示的吸光度值；确认显示的吸光度值和245nm处6nm带宽吸光度值间的差异，印制在吸光度校正过滤器的合格证明上。6.3.吸光度线性度校正当充满具有极高吸光度溶液的流通池，测量传送通过流通池的光强度并更正吸光度线性度。6.3.1.设定检测器为单波长模式，波长为272nm，AUXRANGE为4（4AU/FS），RESPONSE为10（2sec.）并且LAMP为1（氘灯）.6.3.2.用泵传送甲醇通过流通池，确保基线已稳定，并按zero，重复按CE直到显示初始屏幕，重复按VP直到显示CALIBRATION。6.3.3.按func出现密码输入屏幕，输入密码（00000），重复按func直到显示LINER CALIB，按1，然后按enter，显示Calibrated后，按func或back以更改显示。6.3.4.重复按func或back直到显示LINER CALIB，注入咖啡因+甲醇溶液（浓度：90mg/L）到流通池中，使用工具为注射器和注射器适配器，按2，然后按enter。6.3.5.屏幕上出现Calibrated后，关闭电源开关并再次打开，检测器重新启动并且补偿开始生效。6.3.6.传送甲醇通过流通池，完全清洗掉咖啡因+甲醇溶液，确认校正已经完成。7验证结果评定与结论QC负责收集各项验证、试验结果记录，起草验证报告，报验证小组。验证小组负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论。8.验证周期及拟订再验证项目质量部负责根据设备仪器情况，确定再验证周期项目及周期（6个