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文档简介
实验 血涂片的制作与血细胞的观察一、引言血涂片显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法,临床上应用极为广泛,特别是对各种血液病的诊断有很大价值,但血涂片制备和染色不良,常使细胞鉴别发生困难,甚至导致错误结论,因此,制备厚薄适宜,分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。二、实验目的掌握血涂片的制作,观察血细胞的形态及在不同环境下的反应。三、实验器材与试剂器材:显微镜、医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片、盖玻片等。试剂:瑞氏染液、0.9%Nacl溶液、蒸馏水等。四、 实验步骤1、消毒与采血先按摩采血部位(人的指腹),使血流通畅,采血前用70%酒精消毒人的指腹,干燥后用采血针刺破指腹,使血液自然流出(第一滴血不要)。取干净载玻片,让血滴在离玻片一端中4-5mm处,注意手指持载玻片的边缘,不触电及表面,也不能使载玻片接触取血部位的皮肤。2、推片取一块边缘光滑的载玻片做推片。将其一端置于血滴前方,向后移动到接触血滴,使血液均匀分散在推片与载玻片呈30-40角,向另一端平稳地推出(图1)。涂片推好后,迅速在空气中摇,使之自然干燥。 图1 推片示意图3、染色用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线,防止染液外溢。再将瑞氏染色液(伊红-亚甲基蓝)滴在血膜上,至染液淹没全部血膜,染30秒。加等量蒸馏水与染色液混合后再染5分钟。最后用蒸馏水把染色液洗掉,用吸水纸吸干,自然干燥后,即可观察。4、封片 经染色的涂片完全干燥后,用中性树胶封片保存。五、结果观察 显微镜下观察血涂片结果如图2所示。血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。1、红细胞:小而圆,没有细胞核,血涂片中最多,常被染成淡红色,细胞的边缘厚,中间薄,使细胞边缘的颜色比中间的深。2、白细胞:分为有粒白细胞和无粒白细胞,有粒白细胞包括嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞和嗜中性白细胞;无粒白细胞包括淋巴细胞和单核细胞。(1)嗜酸性白细胞:数量较少,但在血涂片中可以找到。细胞质中存在粗大的嗜酸性颗粒,胞质常被染成红色或玫瑰花色,细胞核分叶形,染成紫红色。(2)嗜碱性白细胞:数量最少,在血涂片中很难找到。细胞质中存在粗大的嗜碱性颗粒,胞质常被染成兰紫色,细胞核分叶形,染色较深,但常被粗大的兰紫色颗粒掩盖。(3)嗜中性白细胞:在有粒白细胞中,它的数量最多,很容易找到。细胞质染成淡红色,胞质内含有细小的颗粒,一般不易看清,细胞核为兰紫色,核分杆状、蹄形和分叶形。(4)淋巴细胞:在白细胞中数目是最多的,大小不等,可分为大淋巴细胞、中淋巴细胞、小淋巴细胞。大淋巴细胞较少,占中小淋巴细胞的1/41/18。细胞质所占的比例较小,但随细胞体积增大而相应增多,核周围细胞质,染成天兰色,细胞核大,圆形,染成紫兰色。(5)单核细胞:数目不多,是血细胞中最大的细胞。核为肾形或马蹄形,颜色比淋巴细胞较淡,细胞质为淡灰兰色。3、血小板:为不规则的细胞质小块或碎片,形状象雪花,在血小板中有细小的紫兰色颗粒。血小板常聚集在红细胞之间(注意:在观察过程中注意染料、渣子和细胞及血小板等的区别)。图2 血涂片中血细胞观察结果五、注意事项:1、 载玻片的清洗:新玻片有游离碱质,因此应用10%盐酸浸泡24小时,然后再清水和蒸馏水清洗。2、使用玻璃片时只能手持边缘,切忌触及玻片表面,以保持玻片清洁、干燥,无油腻。3、血涂片制好后,立即固定染色,以免细胞溶解和发生退行性变。3、血膜必须要干燥,以免在染色过程中容易脱落。5、染色时间应视具体情况而定。染色与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染色液浓度越淡,室温越低,细胞越多,所需要的染色时间越长,或适当增加染色液。6、染液不可过少,以防止蒸发干燥染料
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