金菊千里光洁美洗液抗阴道毛滴虫作用的体外试验.doc

金菊千里光洁美洗液抗阴道毛滴虫作用的体外试验杨志林 许志灵 李姣丽(浙江大学附属第二医院)摘要对金菊千里光洁美洗液的抗阴道毛滴虫作用进行体外光，电镜理搴研究结果表明阴道毛谪虫在该药物作用下，虫体质胰疏梧，胞质内染粒的电子密度失去均匀状态随之棱胰断裂。棱质饿聚井教出，最后虫体崩解死亡井与甲硝唑比较，探讨其作用浓度耐问以殛作用毛关键词 阴道毛滴虫(1990) 推荐甲硝唑为该病治疗的首选药物。由于甲硝唑应用有许多禁忌，副作用较重，因此探索更理想药物，剂型，尤其是中药，确为必要。我们用成都中医药大学研制的金菊千里光洁美洗液作体外抗阴道毛滴虫作用的光、电镜观察。并与甲硝唑比较，现将结果报道如下1 材料和方法11 虫株的采集和培养采集急性滴虫性阴道炎患者(无既往治疗史)的阴道分珏物，用肝浸汤培养基加小牛血清分离，培养虫体开始接种加 双抗 (青、链霉紊)，经24次转种达无菌培养后。不加“双抗传代培养，保种。待稳定生长后，供实验使用。12 药物和药物试验的方法121 药物金菊千里光洁美洗液为高效生物提取制剂由成洛阳旺草生物技术开发有限公司生产提供溶于35ml培养液中，实验时按不同浓度加入。【卫生许可证号】：豫卫消证字【2012】第0006号 【执行标准】：Q/LWC001-2012 溶于2ml培养渣中，实验时按不同浓度加入。叶够122 药物试验的方法设药物实验组和空白对照组药物实验组又金菊千里光洁美洗液和甲硝唑组。实验用药物都用培养渣稀释。并经离心、沉淀，取上清渣。按照药物作用浓度，加入培养液中测试对阴遭毛滴虫的作甩以利比较两者的结果甲硝唑组按文献资料的作用浓度“，仅设2mgml和4mgml二组药物实验时从培养48h的培养液底部吸取悬渣于离心管内。以1 50Orpm离心10mln，吸出上清渣加入等量的培养液，清洗23次后浓集虫体，用血细胞计数器对虫体计数后定量加入各试验管，每管加入虫敬为4510个m1采用多管分组同时进行试验的方法，测定药物在不向浓度，作用时问内对虫体的作用，获得定量，定性的试验结果。13 实验观察与结果判断实验观察在室温2024 内进行虫体注入不同浓度药物培养管内，混匀孵育时闻为5、10、I 5、30、60mln，2h以及24h有或无虫体的培养普还进行转种培养，在24、48h观察，对有虫悻生长的培养管进行虫体计数131 光镜观察混匀各管培养渣，按孵育时间，分别吸取各管嚣渣于载玻片上，复上盖玻片，在高倍镜下(物镜为40)观察5O个虫体，计算存活虫数。统一标准为“ ；有虫体(晒虫)为“阳性”，无虫体为“阴性 有虫体又分。虫体团缩不动，胞质呈颗粒状，胞膜破裂或虫体结构模糊定为死虫“0 ；有110个活虫为4-113O个活虫为+i3150个活虫为W。各试验管孵育至24h发现有虫体，以血ll1噜计数嚣计数，对未见虫体或仅有死虫的试目 营都转种于正常培养液中培养48h，进一步判断虫体是否死亡。对“死、活”虫体进行制片，染色、显徽摄影。13 2 电镜样品制备和观察以加入30mgtml泡腾片药物孵育60rain后离心成团，吸出上清液，经25 戌二醛固定15rain以pH74PBS液洗涤二次。再加1饿酸固定2h然后进行乙醇系列脱水，用国产环氧树脂618包埋48h，作超薄切片，用醋酸铀及柠檬酸铅作双染色，JEOL一100SX型透射电镜在加速电压为8OKV观察结果并摄影2 结 果21 金菊千里光洁美洗液对阴道毛滴虫作用的光镜观察结果正常虫体的形状多为梨形，少数可为椭圆形，在光镜下运动活跃，可见不停挥动的前围1 正常阴道毛滴虫滋荠体的形态(lO00)22 金菊千里光洁美洗液对阴道毛滴虫作用的电镜观察结果正常阴道毛滴虫滋养体电镜观察显示虫体呈卵圆形，有质膜包绕，表面具阿米巴样突起，鞭毛和体侧的波动膜，轴柱贯穿整个虫体(图1)。5mgtml浓度的泡腾片对虫体的作用不明显，虫体的形态和活动根似于对照组，但孵育24h后，虫体的效量(2810个tm1)较对照组(3510个tm1)稍少 10mgml浓度在孵育60rain时，活虫减少，出现团缩、变圊的死虫。24h后虫体消失，经转种培养未发现虫体30mgtml浓度对虫体作用5min，就出现团缩变性不动的虫体。鞭毛、轴柱消失；胞质呈颗粒状胞核增大、疏松或崩裂成几块，胞膜不完整2)，染色时不能着色等变化。2h后，虫体消失，转种培养未查见虫体。50mgml和100mgtml浓度分别在作用l5和5rain后，导致虫体溶解、消失。药物对照的甲硝唑2mgml和4mgtml对虫体都有抑翩作用，虫体数量在药物作用60min后减少，活动减慢，部分虫体开始变圃，体内出现颗粒。24h后虫体消失，经转种培养48h亦未查见活虫。不同浓度的泡腾片和甲硝唑在不同时问内对阴道毛滴虫作用的结果呈波浪状。质膜完整，结构清晰。胞质内可见数量甚多的氢化酶体，丰富的糖原和核蛋白体等细胞器。鞭毛位于体前端，轴柱与虫体长轴平行，并于核后方向后延伸，将胞质撑起形成尾突胞棱为长椭圆形，由棱膜包绕内古高电子密度的团块 。30mgrnl浓度的药物作用30rain时，虫体质膜的突起大部分消失，质膜疏松呈一层低电子密度，鞭毛、轴柱和波动膜消失。但胞内结构变化不明显药物作甩60rain时虫体的膜性细胞器如内质网，高尔基氏器消失，胞内由图3 30mgm泡一片作用60rain，死亡虫体的电镜观察虫体呈卵圆形体内有许多浓集成块状的高电子密度颗粒及空泡(8000)高电子密度充满，胞棱的结构几乎消失仅誊断裂的棱膜，攘质内的傲粒多聚集成块状，棱衙松散。最后胞膜破裂，导致虫体裂舞虫体死亡后呈卵圆形，体内有许多浓集成块状的高电子密度颗粒及空泡圈4 正常阴毛浦虫兹养体的电曩田，翦鞭毛( )嫒动膜(Urn)轴桂(Ax)l鲴雎辖(N)l食物泡Fv( 6500)附表泡脯片和甲硝唑体外抗阴速毛滴虫的作用虫为0 无虫为一3 讨 论由消炎杀虫的中药组方，并制备成的泡腾片。前期的试验已证明对细菌、霉菌有杀灭和抑制作甩。我们实验的结果证明妇炎洁泡腾片对阴道滴虫具有一定的杀灭作用，其作用的强度与药物浓度作用时间呈正相关5mgm浓度的泡腾片对虫体的作用不明显虫体的形态和活动相似于对照组，仅在孵育24h后，虫体的数量较对照组少。lOmgml浓度在孵育60rain时活虫数减少，出现团缩、变圆的死亡虫体24h后虫体消失。30mgml浓度时虫体作用5rain就出现团缩变性，不活动的虫体30rain时死亡虫体增多，60rain时虫体死亡，2h虫体消失+转种培养：未查出虫体 海膊,q-q甲硝唑的抗滴虫作用的比较来看，蟊l可肯定两药的抗虫作用基本相同t坦 泡朋慷对滴虫产生作用时，药量大作用时阿驶长，前剐作用小。这是否为中药杀虫的特点，尚待进一步研究以光镜观察的络果为依据，我们选择30mgml浓度的泡腑片药物为电镜观察的药物浓度。对上述剂量药物作用3O和60rain死虫体的电镜观察证实，作用30rain时，虫体的运动细胞器如鞭毛、轴柱消失，质膜、内质网、高尔基氏器的结构有改变。作用60min时，核膜断裂，核质松散+胞膜，氢化酶体膜性细胞器均破坏虫体死亡。说明30mgml浓度的药物对虫体有杀灭作用。2h能全部系