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首都师范大学成人高等教育2010届本科生毕业论文（设计）论文题目：生鲜乳中甲醛测定学生姓名： 院系名称：首都师范大学化学系专业名称：应用化学学 号：10指导教师：朱若华2010年11月10日首都师范大学成人高等教育毕业论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的毕业论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果，如违反有关规定或上述声明，愿意承担由此产生的一切后果。论文作者签名：日期： 年 月 日摘要甲醛是一种无色，有强烈刺激性气味的气体。易溶于水、醇和醚。甲醛在常温下是气态，通常以水溶液形式出现，是一种重要的有机原料。本文将生鲜乳经亚铁氰化钾溶液、硫酸锌溶液沉淀蛋白质后，其上清液与2，4 -戊二酮在弱酸性条件下反应，采用高效液相色谱法测定了生鲜乳中甲醛的含量。通过Waters-2695-2487液相系统，Atlantis T3，4.6 mm250 mm，5 m色谱柱分离，在418 nm处检测。在加标量为0.5 mg/L -10 mg/L之间时，加标回收率为80%-120%，本文测定生鲜牛乳中的甲醛均有较好的准确性, 主要技术特点体现在检出限低、操作简单快捷。关键词：生鲜乳 甲醛 测定 方法 验证目 录1. 绪论12. 实验部分12.1 实验仪器12.2 实验试剂22.3 生鲜乳中甲醛测定32.4.1采样和样品制备32.4.2 样品处理33实验结果33.1甲醛标准曲线绘制33.2 甲醛的添加回收率测定43.3方法的精密度测定74参考文献8致 谢9101. 绪论甲醛是一种无色，有强烈刺激性气味的气体。易溶于水、醇和醚。甲醛在常温下是气态，通常以水溶液形式出现，是一种重要的有机原料。3540的甲醛水溶液叫做福尔马林。福尔马林具有杀菌和防腐能力，并可以增白、改变色泽，故有些不法商贩用它来泡发各种水产品，以增加韧性和脆感；还有些不法商贩用它来熏蒸甚至把它直接加入到面食、蘑菇或豆制品中，达到增白、改变色泽的目的。甲醛是细胞原生质毒物，它可直接作用于氨基、巯基、羟基和羧基，生成次甲基衍生物，从而破坏机体蛋白质和酶，使组织细胞发生不可逆的凝固、坏死， 从而对神经系统、肺、肝脏产生损害，人口服致死量为10 g，进入人体后还能引起免疫功能下降；甲醛已经被世界卫生组织确定为致癌和致畸物质1。我国食品卫生法中明确规定禁止向食品中添加甲醛2。相关文献3中介绍采用衍生试剂将甲醛进行衍生后进行高效液相色谱法进行检测。2. 实验部分2.1 实验仪器液相色谱仪为Waters-2695-2487；采用色谱柱：Atlantis T3， 4.6 mm250 mm，5 m；色谱分离条件为流动相：乙腈：水20：80（V/V）；流速：1.2 mL/min；柱温：室温；检测波长：412 nm；进样量：50 L。旋转蒸发仪：RE52CS，上海亚荣生化仪器厂；调温电热套：KDM型，山东鄄城华夏电热仪器厂；超声波清洗器：KQ-250B，昆山市超声仪器有限公司；超纯水机：美国 MILLIPORE; 高速冷冻离心机：1-15K, Sigma公司；循环水多用真空泵：SHZ-3(),河南省予华仪器有限公司；高速粉碎机： 6202型, 欣镇企业有限公司；电热恒温鼓风干燥箱：DHG-9023A, 上海精宏实验设备有限公司。2.2 实验试剂实验所用试剂如硫酸锌（ZnSO47H2O），亚铁氰化钾 K4Fe (CN)63H2O，乙腈（CH3CN），乙酸铵（CH3COONH4），乙酸（CH3COOH），2,4-戊二酮（C5H8O2），碘化钾（KI），碘（I2），氢氧化钠（NaOH），硫酸（H2SO4）和甲醛溶液（36%38%）均为分析纯，其中乙腈为色谱级。甲醛标准储备溶液1 000 g/mL的配制：取2.8 mL含量为36%38%甲醛溶液，放入1 L容量瓶中，加水稀释至刻度，为甲醛储备液，4保存两周。甲醛储备液的标定：精确吸取甲醛标准储备溶液10.00 mL，置于250 mL碘量瓶中。加入25.00 mL 0.1mol/L碘溶液和7.5 mL 1 mol/L氢氧化钠溶液，放置15 min；加入10 mL10%硫酸溶液，再放置15 min；用浓度为0.1000 mol/L硫代硫酸钠溶液滴定，至溶液呈现淡黄色时，加入1.00 mL 5%淀粉指示剂，继续滴定至恰使蓝色褪去为止，记录所用硫代硫酸钠溶液体积（V1），mL。同时用水作试剂空白滴定，记录空白滴定所用硫代硫酸钠标准溶液的体积（V0），mL。 (1)式中：甲醛标准储备溶液中甲醛的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V0 空白滴定消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积数，单位为毫升（mL）；V1 滴定甲醛消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积数，单位为毫升（mL）；c 硫代硫酸钠溶液准确的摩尔浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；15 1 mL 1 mol/L碘相当甲醛的量，单位为毫克（mg）；10 所用甲醛标准储备溶液的体积，单位为毫升（mL）。 甲醛标准中间溶液：准确吸取1.00 mL的甲醛标准储备液，用超纯水稀释至100 mL，得到浓度为10 g/mL。4保存一周。甲醛标准工作溶液：准确吸取0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL的甲醛标准中间液，用超纯水稀释至10 mL,得到浓度分别为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 g/mL的标准工作曲线，现配现用。2.3 生鲜乳中甲醛测定2.4.1采样和样品制备采样前，样品要通过合适的方式混合均匀。混匀后应立即取样，取样量应不少于100 mL，并将样品迅速冷藏或冷冻保存，作为实验室样品。将实验室样品恢复至室温，并摇匀，作为待测试样。2.4.2 样品处理准确移取5.00 mL的均匀奶样，于25.00 mL容量瓶中，依次加入1.0 mL亚铁氰化钾溶液、1.0 mL硫酸锌溶液。每加入一种溶液后，充分振荡均匀。全部溶液加完后，静置10 min，用水定容到25.00 mL，过滤，弃去最初的12 mL滤液，收集滤液。同时做空白。准确移取上述滤液0.800 mL，加入0.200 mL衍生试剂，并放置在51 0.5 水浴，衍生反应12 min。迅速冷却到室温，涡旋震荡2030 s，待测定。同时做空白和标准工作溶液的衍生。取衍生好的试液过膜，进行液相色谱检测。3实验结果3.1甲醛标准曲线绘制 按照色谱条件甲醛能够较好的分离，甲醛的分离色谱图见图1。取甲醛的标准浓度梯度为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 g/mL的标准溶液，按照色谱检测条件进行高效液相色谱测量峰面积值，各浓度标准溶液进样，平行进样3次，测得峰面积并取平均值。以峰面积Y对被分析化合物浓度（X，g/mL）求得线性回归方程为y = 483165.73646 x + 14591.13337，线性相关系数为0.995以上，说明在0.5g/mL4.0g/mL浓度范围内，甲醛与之对应的峰面积之间存在较好的线性关系。在对实际样品的检测中，可用上述方程通过峰面积计算甲醛的浓度。t/min 图1. 0.864 g/mL甲醛标准工作溶液谱图3.2 甲醛的添加回收率测定选择生鲜牛奶，先测定甲醛含量，结果见表1. 在样品中分别添加不同量的甲醛标准物质，按已确定的提取方法和色谱条件测定添加回收量（扣除样品本底值，以甲醛含量计）。实验数据见表2表7（以上测量值均无需减去试剂空白）。样品中甲醛含量以表示，单位为mg/L。按下述公式计算：(2) 样品中甲醛的含量，单位为毫克每升（mg/L）；c 上机样品中甲醛的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；c0 空白样品中甲醛的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V 样品的体积，单位为毫升（mL）；25 样品最终定容体积为25毫升（mL）。两次平行测定结果用算术平均值表示，结果保留至小数点后两位。表1. 本底样品的检测结果牛奶本底样品编号1-11-21-3峰面积334863400333953检出浓度（mg/L）0.1960.2010.200 平均值（mg/L）0.199 相对标准偏差（%）1.38 甲醛上机浓度均小于10 mol/L（300 ng/mL ）表2 甲醛添加水平1.08 mg/L的检测结果编号123加标浓度（g/mL）10.8加标体积（mL）0.5添加水平（mg/L）1.08峰面积131977131626132159检出浓度（mg/L）1.2151.2121217本底浓度（mg/L）0.199 回收率（%）94.07 93.75 94.26 平均值（%）94.03 相对标准偏差（%）0.27 表3. 甲醛添加水平0.43mg/L的检测结果编号123加标浓度（g/mL）10.8加标体积（mL）0.2添加水平（mg/L）0.43峰面积749807365772399检出浓度（mg/L）0.6250.6110.598本底浓度（mg/L）0.199回收率（%）99.0595.8792.84平均值（%）95.92相对标准偏差（%）3.2甲醛上机浓度10 mol/L（0.3 g /mL ）至250 mol/L (7.5 g/mL) 表4. 甲醛添加水平2.16mg/L的检测结果编号123加标浓度（g/mL）10.8加标体积（mL）1添加水平（mg/L）2.16峰面积233358232960234097检出浓度（mg/L）2.2642.2602.272 本底浓度（mg/L）0.199回收率（%）95.6095.4295.97平均值（%）95.66相对标准偏差（%）0.30 表5. 甲醛添加水平4.32mg/L的检测结果编号123加标浓度（g/mL）10.8加标体积（mL）2添加水平（mg/L）4.32峰面积425572426346421782检出浓度（mg/L）4.2534.2614.214本底浓度（mg/L）0.199回收率（%）93.8494.03 92.94 平均值（%）93.60 相对标准偏差（%）0.62 表6甲醛添加水平8.64 mg/L的检测结果编号123加标浓度（g/mL）10.8加标体积（mL）4添加水平（mg/L）8.64峰面积803353808795807248检出浓度（mg/L）1.6325 1.6437 1.6405 本底浓度（mg/L）0.199回收率（%）92.16 92.82 92.63 平均值（%）92.54 相对标准偏差（%）0.36 表7甲醛添加水平10.8mg/L的检测结果编号123加标浓度（g/mL）10.8加标体积（mL）5添加水平（mg/L）10.8峰面积100974110150471016381检出浓度（mg/L）10.298 10.353 10.367本底浓度（mg/L）0.199回收率（%）93.51 94.01 94.15平均值（%）93.89 相对标准偏差（%）0.36 实验数据表明本方法测定甲醛，回收率为80%120%，所得数据与标准值相比，其标准偏差在允许范围以内，说明该方法对甲醛不同含量的甲醛均有较好的准确度。3.3方法的精密度测定选择生鲜牛奶，按本方法确定的条件进行重复性试验，其相对标准偏差10%，试验结果见表3-8。（以上测量值均无需减去试剂空白）。说明用本方法测定甲醛的含量有较好的精密度、重复性。表8 甲醛检测精密度测定（重复性实验）生鲜牛乳样品编号123456峰面积324443345533940329843356734045检出浓度（g/mL）0.0370 0.03900.04000.03810.03930.0403 平均值（g/mL）0.0389 相对标准偏差（%）3.214参考文献1 程春梅,朱军辉.食品中甲醛的来源及